γδT细胞归巢和保留的方法，可选地使用自然杀伤细胞，以用于生成用于治疗的细胞组合物技术

本发明专利技术提供多个γδT细胞和γδT细胞富集的多个细胞群的体外培养的多种方法，更具体地，提供了增强多个γδT细胞群的功能的多种方法，通过使用一烟酰胺并结合多个细胞因子处理多个细胞，来增强γδT细胞归巢和/或保留潜能。本发明专利技术还设想了包含培养的多个γδT细胞和混合的γδT细胞富集的多个细胞群的多种组合物及其治疗用途。合物及其治疗用途。合物及其治疗用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】γδ
T细胞归巢和保留的方法，可选地使用自然杀伤细胞，以用于生成用于治疗的细胞组合物
[0001]相关申请案
[0002]本申请要求2019年2月24日提交的美国临时专利申请案第62/809671号的优先权，其全部内容通过引用并入本文。
[0003]
和
技术介绍

[0004]在本专利技术的一些实施例中，本专利技术涉及多种培养γδ(Gammadelta)T细胞群的方法、多种培养的γδT细胞群的治疗用途以及多种包含培养的γδT细胞的试剂盒。更具体地，但并非特定地，本专利技术涉及多种培养的γδT细胞单独或与其他细胞组合用于移植的用途。
[0005]伽玛德尔塔(Gammadelta，γδ)T细胞是一种保护的先天性淋巴细胞群体，在组织内环境稳定、感染性疾病、自身免疫性疾病、炎症、移植和肿瘤监测期间参与多种免疫反应。γδT细胞可以共享适应性或先天性免疫系统的属性，或两者的属性，包含识别应激相关的抗原的胸腺和外周组织亚群(Vδ1细胞)、由磷酸化抗原激活的循环亚群(Vδ2细胞)和主要存在于肝脏中的亚群(Vδ3细胞)，常见于病毒感染和白血病。
[0006]当被激活时，γδT细胞发挥强大的、非MHC限制的细胞毒性活性，尤其能有效地杀死各种类型的细胞，特别是致病细胞，如感染(病毒、寄生虫、真菌等感染)和癌细胞。γδT细胞与造血干细胞移植患者的长期生存密切关联，并且它们在肿瘤样本中的存在被认为是一个显着的有利癌症预后特征。γδT细胞能够感知多种改变的脂质途径、检测和消除恶性细胞，而不受肿瘤抗原特征影响，并且具有高度的化疗耐药性，使其特别适合于联合免疫化疗。
[0007]γδT细胞仅占人类外周血和组织驻留T细胞的一小部分(1
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5％)，甚至占脐带淋巴细胞的一小部分(<1％)。因此，γδT细胞群的治疗应用需要其扩增的方式。临床使用(如癌症免疫治疗)富集γδT细胞的两种主要方法包含：通过刺激磷酸化抗原或氨基二磷酸盐与低剂量重组IL
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2一起施用来进行内源性γδ群体的体内(in
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vivo)扩增，以及将试管中(in vitro)扩增的γδT细胞(自体或异体)进行体外(ex
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vivo)过继的细胞转移到患者体内(例如，参见Leeks等人的美国专利申请案公开第2017/0196910号)。由于IL
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2的不良副作用和短暂的血清半衰期，以及体内IL
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2施用的临床试验结果令人失望，体外γδT细胞的扩增是目前优选的方法。一些研究还表明，IL
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15可有效促进γδT细胞的增殖、存活和细胞毒性。
[0008]增强γδT细胞的功能对于有效的T细胞治疗至关重要。γδT细胞被，特别是，(在癌症中积累的)多种小化合物(例如非特异性HMB
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PP；和氨基二磷酸盐)，以及多种细胞应激蛋白，例如膜联蛋白A2激活。除IL
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2(特别是IL
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7、IL
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15和IL
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21)外，γ链家族的一些细胞因子也可增加γδT细胞的增殖、存活和细胞毒性(Van Acker等人，Cytokine and Growth Factor Rev.期刊，2018年，41：54
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64)。γδT细胞还具有多种整合素(例如beta1、beta2、beta7整合素、玻连蛋白受体)，其在移植后组织中γδT细胞的归巢、粘附、信号、迁移、浸润和保留中发挥作用(Seigers，Front in Immunol期刊，2018年)。γδT细胞还表达L
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选择素(CD62L)、E
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和P
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选择素配体以及其他归巢分子，以响应炎症，介导其在各种组织类型(皮肤、肠道、肝脏、大脑、骨髓、淋巴结等)中的归巢和滞留(Sackstein等人，Lab Invest期刊，
2017年，97：669
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97)。
[0009]已经提出了用于移植的γδT细胞体外培养的多种方法。例如，Romagne和Laplace的美国专利申请案公开第US2005/0196385号和Moser和Kuchen的美国专利申请案公开第US2009/0130074号中教示使用合成或天然γδT细胞激活剂小分子来进行γδT细胞的扩增和活化。Maeurer的美国专利申请案公开第US2017/0107490号及Hayday等人的美国专利申请案公开第US2018/0312808号中教示通过培养IL
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2、IL
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15和IL
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21的不同组合来进行γδT细胞的体外扩增。γδT细胞扩增的一些模型包含γδT细胞中抗原呈递功能的诱导或工程(参见，例如，Moser和Kuchen的美国专利申请案公开第US2008/0075732号)，肿瘤识别部分表达的工程(参见，例如，Jakobovits等人，美国专利申请案公开第US2016/0175358号)，从表达CAR(嵌合抗原受体)的多能干细胞中选择γδT细胞(例如：Themeli等人的美国专利申请案公开第US2016/0009813号，Boyd等人的美国专利申请案公开第US2018/0353588号，Leek等人的2018/0125889号，Cooper等人的美国专利申请案公开第US2018/0200299，Lamb等人的美国专利申请案公开第US2018/0250337号)，引导HSC分化为γδT细胞(例如，Messina和Tie的美国专利申请案公开第US2016/0213715号)，及γδT细胞中CXCR6表达的工程(Kobold等人的美国专利申请案公开第US2018/0256645号)以用于靶向肿瘤。
[0010]扩增的多种γδT细胞群的治疗用途已成为15项以上已完成、正在进行、正在招募或授权的临床试验的主题(参见clinicaltrials.gov网站)，这些试验调查了不同方案扩增的γδT细胞在治疗各种感染性和癌性疾病中的应用。一般来说，已发现扩增的γδT细胞群可维持细胞毒性功能。然而，迄今为止的结果着重说明了设计γδT细胞扩增和治疗方案的困难，其不仅安全，而且能够提供大量扩增的γδT细胞群，针对受影响的组织显着有效。
[0011]其他相关出版物包含Nicol等人(BJ of Cancer期刊，2011年，105：778
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106)、Kobayashi等人(AntiCancer Res期刊，2010年，30：575
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580)、Berglund等人(Stem Cell Int期刊，2018年，ID8529104)、Tan等人(J Immunol Sci期刊2018年，2：6
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12)、Fisher等人(Frontiers in Immunol期刊，2018年，9：1409)、Belmant的美国专利申请案公开第US20018/0207568号和Fournie等人的美国专利申请案公开第US2本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种增强γδT细胞归巢和/或保留潜能的方法，其特征在于，所述方法包含：(a)获得富集多个γδT细胞的一选定细胞群；(b)体外为所述选定细胞群提供γδT细胞扩增的多个条件；及(c)提供0.5至50mM范围内的烟酰胺持续一时间段，以显着增强γδT细胞归巢和/或保留潜能，从而增强所述选定细胞群中多个γδT细胞的归巢和/或保留潜能。2.一种增强γδT细胞CD62L表达的方法，其特征在于，所述方法包含：(a)获得富集多个γδT细胞的一选定细胞群；(b)体外为所述选定细胞群提供γδT细胞扩增的多个条件；及(c)提供0.5至50mM范围内的烟酰胺持续一时间段，以显着增强γδT细胞CD62L表达，从而增强所述选定细胞群中多个γδT细胞的CD62L表达。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，γδT细胞扩增的所述多个条件包含提供多种营养素和多个细胞因子，及可选地，其中所述多个细胞因子选自由以下组成的群组：IL
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2、IL
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15和IL
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21。4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，γδT细胞扩增的所述多个条件包含提供多种营养素和多个细胞因子，及可选地，其中所述多个细胞因子选自由以下组成的群组：IL
‑
2、IL
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15和IL
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21。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述烟酰胺选自由以下组成的群组：烟酰胺、一烟酰胺类似物、一烟酰胺代谢物、一烟酰胺类似物代谢物及其衍生物。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述选定细胞群是通过αβT细胞损耗来富集γδT细胞的一淋巴细胞群。7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述选定细胞群包含多个自然杀伤细胞。8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法进一步包含为自然杀伤细胞扩增提供多个条件。9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，提供γδT细胞扩增的所述多个条件和所述烟酰胺来增强所述选定细胞群中所述多个自然杀伤细胞的归巢和/或保留潜能和/或CD62L表达。10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述选定细胞群是通过选择多个γδT细胞来富集的γδT细胞的一淋巴细胞群。11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，所述选定细胞群不含多个自然杀伤细胞。12.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多个γδT细胞的群体衍生自一器官，所述器官选自由以下组成的群组：一肌肉、皮肤、一骨骼、一淋巴器官、一胰腺、一肝脏、一胆囊、一肾脏、一消化道器官、一呼吸道器官、一生殖器官、一泌尿道器官、一血液相关器官、一胸腺、一脾脏、或一神经系统器官。13.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多个γδT细胞的群体来源于选自由以下组成的群组：多个造血细胞、多个脐带血细胞、多个可动的外周血细胞和多个骨髓细胞。14.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多个γδT细胞的群体来源于骨髓或外周血。15.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多个γδT细胞的群体来源于新生儿脐带血。
16.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多个细胞的群体来源于一单核细胞部分。17.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述多个γδT细胞的群体来自一单采样本。18.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(c)的所述时间段为1到3周之间。19.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(c)的所述时间段为1到7天之间。20.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述烟...

【专利技术属性】
技术研发人员：托尼，
申请(专利权)人：盖米达细胞有限公司，
类型：发明
国别省市：