T细胞修饰制造技术

本发明专利技术提供了包含异源重组T细胞受体(TCR)和异源重组共受体的修饰的T细胞或修饰的T细胞群体，另外提供了产生修饰的T细胞或修饰的T细胞群体的方法及其在治疗癌症中的应用。用。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】T细胞修饰


[0001]本专利技术涉及修饰T细胞以增加其细胞毒活性以及修饰的T细胞在免疫疗法中，例如用于治疗癌症的用途。

技术介绍

[0002]免疫疗法有望改变癌症治疗领域，并有望带来长期生存(McDermott et al.,Cancer Treat Rev.2014 Oct；40(9):1056
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64)。对于新的免疫调节药物，存在对扩大患者群体和肿瘤类型范围的明显未满足的医疗需求。另外，需要新的试剂来增强抗肿瘤反应的强度和持续时间。由于对过去二十年控制T细胞免疫的基本原理的深入了解，这些试剂的开发成为可能(Sharma和Allison,Cell.2015 Apr 9；161(2):205
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14)。这通常需要肿瘤特异性CD4+和CD8+T细胞识别由MHC分子呈递的肿瘤相关肽抗原。不同的疫苗接种策略和离体扩增的肿瘤浸润淋巴细胞的过继转移在一些情况下已证明了肿瘤特异性T细胞治疗晚期癌症的能力(Rosenberg et al.,Nat Med.2004 Sep；10(9):909
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15)。然而，对肿瘤抗原的高耐受性与通常存在于肿瘤部位处的强免疫抑制微环境相结合，表现为T细胞抗肿瘤活性的次优激活。因此，由于T细胞对自身抗原的耐受性，缺乏高亲和力T细胞的个体可能对免疫检查点阻断疗法，如抗PD
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1和抗CTLA
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4没有反应。
[0003]基因改造可能通过产生高亲和力T细胞受体(TCR)来帮助克服内源性高亲和力T细胞对肿瘤抗原的频率低的问题，并为对检查点抑制剂治疗无反应的患者提供临床益处。对于数种抗原，包括gp100、MAGE
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A3和NY
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ESO
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1，该方法已被证明可以在体外将野生型TCRs对其天然配体肽/MHC I类复合物的亲和力增加10
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1000倍(Li et al.,Nat Biotechnol.2005 Mar；23(3):349
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54；Robbins et al.,J Immunol.2008 May 1；180(9):6116
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31)。
[0004]较高亲和力的TCRs允许T细胞对较低水平的抗原作出反应；这在肿瘤微环境已适应降低抗原表达和降低MHC I类分子表达的情况下很重要(Barrett和Blazar,N Engl J Med.2009年7月30日；361(5):524
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5；Marincola et al.,Adv Immunol.2000；74:181
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273)。经由TCR改造的T细胞疗法或利用T细胞重定向生物制剂已实现将T细胞重定向肿瘤(Bossi et al.,Cancer Immunol Immunother.2014年5月；63(5):437
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48；Fan et al.,J Hematol Oncol.2015 Dec 21；8:130)。
[0005]T细胞治疗已显示出治疗一些复发性或高危肿瘤的治疗潜力(Dudley et al.,J Immunother.2003年7月
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8月；26(4):332
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42；Dudley et al.,J Clin Oncol.2005年4月1日；23(10):2346
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57；Kalos et al.,Sci Transl Med.2011年8月10日；3(95):95ra73)。目前有两种方法用于对患者T细胞进行基因改造以识别肿瘤抗原，包括嵌合抗原受体(CARs)和亲和力成熟的TCRs。然而，CARs仅限于靶向细胞表面上的表位。基于TCR的疗法不仅能够识别细胞表面蛋白，还可以识别内部细胞蛋白。另外，TCR方法通过募集内源性信号分子和T细胞与其特定靶标之间的时空相互作用，更接近地模拟T细胞的天然功能。然而，它仅限于共有适当MHC限制的个体，由TCR识别，并且可能需要并行开发HLA类型和抗原表达的患者选择测定。
[0006]MHC I类限制性T细胞结合受体(TCR)与肽
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MHC复合物的结合被称为CD8(分化簇8)的糖蛋白稳定，其也募集Src家族激酶Lck，并增强信号传导。CD8与MHC I类恒定部分的结合导致结合亲和力增加和对靶细胞上抗原的反应阈值降低(Gao,Nature.1997年6月5日；387(6633):630
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4；Artyomov et al.,Proc Natl Acad Sci U S A.2010年9月28日；107(39):16916
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21)。将CD8转基因添加到TCR慢病毒载体中可以赋予CD4+T细胞类似的增强反应，增强它们为CD8+T细胞提供辅助功能以及另外的直接肿瘤细胞杀伤的能力，可能导致增强的临床疗效。CD8α/CD8β(分化簇8)是一种异二聚体跨膜糖蛋白，由细胞毒性T细胞、自然杀伤(NK)细胞和树突细胞表达。其结合I类肽
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主要组织相容性抗原(pMHCs，在男性中这通常被描述为肽
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人白细胞抗原或pHLAs)上的保守区域，并且在这样做时其充当MHC肽
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由T细胞受体(TCRs)特异性结合的通用共受体。CD8α/CD8β在成熟的CD4+T细胞中没有发现，其中它们的抗原特异性TCRs与相关但不同的II类pMHC抗原结合，并且其中CD4同源二聚体充当TCR共受体。
[0007]最常见的共受体依赖性TCRs类型是异二聚体跨膜糖蛋白，其具有α和β多肽链。当α/βTCRs与I类pMHC抗原结合时，它们会触发磷酸化事件的细胞内信号传导级联，这会激活大量细胞事件，包括通过细胞毒性T细胞杀伤表达pMHC的靶细胞。这种信号传导级联由Lck(淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶)磷酸化TCR结合的CD3跨膜蛋白起始。
[0008]CD8α/CD8β和Lck之间的细胞内关联被认为可以增强TCR信号传导。在人类中，除了CD8α/CD8β异源二聚体外，约三分之一的CD8+细胞也显示出CD8α/CD8β同源二聚体形式。在一些肠道T细胞、NK细胞和γ/δT细胞中，仅发现这种同型二聚体形式。
[0009]有证据表明，在人类中，这种CD8α同源二聚体可以在功能上完全替代CD8α/CD8β异源二聚体(Cole et al.,Immunology.2012 Oct；137(2):139
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48)。
[0010]在体内，TCRs和CD8二聚体与I类pHLA的同时结合会影响T细胞克隆的胸腺阳性/阴性选择。这决定了这些T细胞克隆表达的TCRs的pHLA抗原亲和力。一般来说，病原体相关pHLA反应性T细胞克隆中的TCR抗原亲和力高于识别癌症相关抗原的等效T细胞克隆。TCR亲和力增强技术可以将癌症反应性TCRs的亲和力提高到接近病原体反应性TCRs的亲和力。这些TCR亲和力的增加导致通常与CD8共受体无关的T本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.修饰的T细胞或修饰的T细胞群体，其包含异源CD8共受体和异源T细胞受体(TCR)。2.如权利要求1所述的修饰的T细胞或修饰的T细胞群体，其中所述CD8共受体是CD8α。3.如权利要求2所述的修饰的T细胞或修饰的T细胞群体，其中所述CD8共受体包含与SEQ ID NO:1具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。4.如权利要求1至3中任一项所述的修饰的T细胞或修饰的T细胞的群体，其中所述TCR结合癌症或肿瘤抗原或其肽，和/或是亲和力增强的TCR。5.如权利要求1至4中任一项所述的修饰的T细胞或修饰的T细胞群体，其中所述TCR是MAGE A4 TCR，和/或能够结合MAGE
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A4。6.如权利要求5所述的修饰的T细胞或修饰的T细胞群体，其中所述TCR包含与SEQ ID NO:3具有至少80％序列同一性的α链氨基酸序列。7.如权利要求5或权利要求6所述的修饰的T细胞或修饰的T细胞群体，其中所述TCR包含与SEQ ID NO:5具有至少80％序列同一性的β链氨基酸序列。8.核酸或核酸构建体，其编码如前述权利要求中任一项所述的TCR和CD8共受体。9.如权利要求8所述的核酸或核酸构建体，其包含：i.编码CD8共受体的第一核苷酸序列；和ii.编码T细胞受体的第二核苷酸序列。10.如权利要求8或9所述的核酸或核酸构建体，其中所述CD8共受体是CD8α。11.如权利要求10所述的核酸或核酸构建体，其中编码CD8α的核苷酸序列包含与SEQ ID NO:2具有至少80％序列同一性的核酸序列。12.如权利要求8至10中任一项所述的核酸或核酸构建体，其中所述TCR结合癌症或肿瘤抗原或其肽，和/或是亲和力增强的TCR。13.如权利要求7至11中任一项所述的核酸或核酸构建体，其中所述TCR是MAGEA4 TCR，和/或能够结合MAGE
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A4。14.如权利要求12所述的核酸或核酸构建体，其中所述TCR包含与SEQ ID NO:3具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。15.如权利要求12或权利要求13所述的核酸或核酸构建体，其中所述TCR包含与SEQ ID NO:5具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。16.如权利要求12至14中任一项所述的核酸或核酸构建体，其中编码所述TCR的核苷酸序列包含与SEQ ID NO:4具有至少80％序列同一性的核酸序列。17.如权利要求12至15中任一项所述的核酸或核酸构建体，其中编码所述TCR的核苷酸序列包含与SEQ ID NO:6具有至少80％序列同一性的核酸序列。18.载体，其包含权利要求8至17中任一项所述的核酸构建体。19.如权利要求18所述的载体，其中所述载体是慢病毒载体。20.病毒颗粒，其包含权利要求8至17中任一项所述的核酸或核酸构建体或者权利要求18至19中任一项所述的载体。21.制造权利要求1至7中任一项所述的修饰的T细胞或修饰的T细胞群体的方法，其包括将一个或多于一个拷贝的权利要求8至17中任一项所述的核酸或核酸构建体或者权利要求18或19所述的载体引入T细胞或T细胞群体中，任选地其中所述核酸或载体包含在权利要求20所述的病毒颗粒中。
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【专利技术属性】
技术研发人员：卢卡，
申请(专利权)人：艾达普特免疫有限公司，
类型：发明
国别省市：