一种用于角膜移植免疫排斥反应治疗的药物制造技术

本发明专利技术涉及CD4+LAP+Tregs细胞或能够调控其表达及功能的ROCK2蛋白抑制剂在治疗角膜移植免疫排斥反应中的应用。本发明专利技术利用CD4+LAP+Tregs细胞通路治疗角膜移植免疫排斥反应，相较于现有的NKT细胞通路，更加具有针对性，也更为安全、有效。尤其使用ROCK2蛋白抑制剂治疗，可以避免直接细胞治疗过程中所注入的细胞对于器官其他的副作用，具有良好的临床应用价值。值。值。

【技术实现步骤摘要】
一种用于角膜移植免疫排斥反应治疗的药物


[0001]本专利技术涉及角膜移植中免疫抑制相关领域，具体涉及一种利用调节性T细胞或ROCK蛋白抑制剂诱导角膜移植免疫耐受，抑制角膜移植免疫排斥反应的发生。

技术介绍

[0002]角膜盲是由于角膜失去功能导致视功能丧失的一类眼病；通常是由于眼部遭受疾病或外伤等原因，导致角膜受到不同程度的伤害，发生混浊、破裂或感染等导致。通常，导致角膜盲的原因主要有：感染性角膜病、非感染性角膜炎、角膜变性和角膜营养不良、圆锥角膜、眼外伤、眼睑损伤和干眼病等。由于角膜病损或角膜外伤都是仅角膜失去透明性，变混浊，而眼球内部结构正常，所以如果能用透明健康的角膜将病变角膜置换掉，病人的视力即可得到明显的改进，因此，角膜盲是可治愈眼盲。
[0003]据世界卫生组织统计，全球角膜盲患者可能高达6000万人，而国内约有500万人，且每年以10万认以上的规模增长，排在致盲眼病的第二位。目前角膜移植仍是治疗此类疾患最主要的手段；但在临床上，角膜移植材料的供给与需求之间存在着巨大的差异，世界各地的角膜来源均处于稀缺状态，而中国更是奇缺，不少患者只能被动地等待捐献。为了解决眼角膜不足的问题，世界各地的研究人员都在多方面努力进行有关开发代替性的新型移植材料的研究。随着一些关键技术的突破，角膜抑制正在掀起新的风暴，成为一种较为理想的角膜移植替代材料。目前，猪角膜已经成功用于人眼移植；但利用角膜进行移植，手术后的免疫排斥反应成为导致手术失败的主要原因。
[0004]虽然正常角膜组织无血管、淋巴管，处于相对“免疫豁免”的状态，但由于病变角膜组织炎症反应、新生血管等因素的存在，角膜移植术后很容易出现排斥反应，导致手术失败。
[0005]目前临床中针对角膜移植术后的免疫排斥反应主要通过药物治疗，一般需要长期使用。其中糖皮质激素、免疫抑制剂（如环孢素、他克莫司）的应用最为广泛。这些药物的应用包括局部和全身的应用。对于全身应用而言，这些药物长期使用通常会引起肝肾损伤、感染、肿瘤等严重的全身副反应；对于眼部局部的应用而言，糖皮质激素等药物也存在引发激素性青光眼、白内障、干眼症等并发症的问题，同时也不利于角膜植片的长期存活。因此针对角膜移植免疫排斥反应的发生机理，研究出更具有针对性的治疗方式具有积极意义。在角膜移植的相关领域，已有一些研究进展。有研究指出调节性T细胞分泌的TGF-β滴眼液可以有效防治角膜移植排斥反应，延长角膜植片存活时间。
[0006]但在本申请之前，没有研究将CD4
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LAP
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Tregs细胞用于角膜移植的免疫排斥抑制，也没有研究对所述CD4
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LAP
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Tregs细胞调节免疫排斥的调节机制进行研究；本申请不仅验证了CD4
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LAP
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Tregs细胞维持角膜移植免疫耐受，移植免疫排斥方面的作用，还对该调节路径进行了系统性研究，并发现通过调节ROCK蛋白（主要是ROCK2蛋白）能够实现对角膜移植排斥的有效抑制，延长角膜植片存活时间。

技术实现思路

[0007]调节性T细胞（regulatory T cells，Treg）是一类具有独特免疫调节功能的T细胞亚群，包括CD4
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CD25
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T细胞、辅助性T细胞III型等，它们可以抑制病理或生理免疫反应活性，在维持自身免疫耐受和免疫稳态方面发挥重要功能。过往的研究，主要聚焦在CD4
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CD25
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T细胞，近年来，以潜能相关肽（latency-associated peptide,LAP）为细胞表面标志的CD4
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LAP
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Tregs细胞被鉴定出来。一些研究发现CD4
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LAP
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Tregs细胞被认为是新的具有免疫抑制作用的调节性T细胞亚群。LAP作为TGF-β的分子伴侣，可以在细胞表面释放出与LAP相结合的TGF-β,即LTGF-β(latent TGF-β)。Alessandra Metelli等研究发现，Tregs表面的跨膜蛋白与LTGF-β相结合，通过LAP的水解作用，释放出有活性的TGF-β，促进Tregs发挥负性免疫调控作用。如Zhang L等人发现通过诱导系统性红斑狼疮的患者外周血单核细胞（PBMCs）中Tregs表面LAP的表达可以抑制免疫反应的发生。da Cunha AP等人研究发现在实验性自身免疫性脑脊髓炎的动物模型中，阻断LAP的表达，可以降低CD4
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LAP
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Tregs细胞的表达，拮抗口服CD3抗体诱导的免疫耐受。但目前并无CD4
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LAP
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Tregs细胞在角膜移植领域的作用的相关研究。
[0008]众所周知，角膜组织无血管、淋巴管，处于相对“免疫豁免”的状态，但由于病变角膜组织炎症反应、新生血管等因素的存在，角膜移植术后才会出现排斥反应；也就是说，角膜移植的排斥反应是有别于其他移植手术的。因此，在其他器官或组织移植领域能够起到相关移植或导致免疫反应发生的试剂，并不见得在角膜移植领域同样适用。
[0009]本申请专利技术人一直致力于角膜移植领域的研究与实践，在之前的研究中证实了自然杀伤性T细胞对角膜移植免疫抑制的作用机制。但自然杀伤性T细胞在角膜移植免疫治疗中会引发较强的局部副反应，因此，亟需寻找一种新的、更具针对性的角膜移植调控路径和药物。经过大量的研究与实验，本申请专利技术人通过建立小鼠同种异体角膜移植模型，发现在角膜植片发生排斥时，CD4
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LAP
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Tregs细胞比例明显降低，使用anti-LAP的单克隆抗体腹腔注射至小鼠体内，发现可以减少多种Tregs细胞的数量。并在进一步研究中证实， CD4
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LAP
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Tregs细胞在体外和体内的角膜移植免疫抑制功能。相较于自然杀伤性T细胞的调节，CD4
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LAP
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Tregs细胞具有更强的移植免疫调控针对性，也避免了T细胞治疗对于局部的副反应。
[0010]为了提供更多更优的角膜移植免疫药物选择，本申请专利技术人进一步对所述CD4
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LAP
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Tregs细胞的调节路径进行了相关研究。通过大量的研究和实验，本申请专利技术人证明，ROCK蛋白（尤其是ROCK2蛋白）是调节CD4
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LAP
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Tregs细胞表达的关键因素。
[0011]研究表明，Rho蛋白属于小G蛋白超家族的亚家族成员，到目前为止，已发现了20多个Rho家族成员，其中Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶（Rho associated coiledcoil forming protein kinase，ROCK）是其中及其重要的酶之一。ROCK蛋白主要包括ROCK1和ROCK2两种蛋白。ROCK蛋白调节多种关键细胞功能，包括细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗角膜移植免疫排斥反应的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物包含CD4+LAP+Tregs细胞。2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述CD4+LAP+Tregs细胞分离自Balb/c小鼠脾脏。3.CD4+LAP+Tregs细胞在制备治疗角膜移植免疫排斥反应的药物组合物中的用途。4.一种用于治疗角膜移植免疫排斥反应的药物组合物，其特征在于：所述药物组合物包含ROCK蛋白抑制剂。5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：接英，李上，臧云晓，潘志强，杨珂，田磊，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京同仁医院，
类型：发明
国别省市：