胎盘源性同种异体CAR-T细胞及其用途制造技术

本发明专利技术公开了表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞群，其中所述T细胞是来源于脐带血、胎盘灌注液或其混合物的胎盘T细胞。经显示，相对于替代性细胞群，如来源于外周血单核细胞T细胞的细胞群，此类细胞群在多个方面都有所改善。本发明专利技术还公开了治疗有需要患者的癌症，如血液癌症，例如B细胞癌症或其症状的方法。这些方法包括向所述患者施用有效缓解所述患者的所述癌症或其症状的量的本发明专利技术的任一种T细胞群。症或其症状的量的本发明专利技术的任一种T细胞群。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】胎盘源性同种异体CAR
‑
T细胞及其用途


[0001]本专利技术部分地涉及嵌合抗原受体(CAR)细胞和CAR疗法。

技术介绍

[0002]CAR疗法是作为针对癌症的极其重要的工具而出现。然而，这些疗法典型地依赖于使用患者自身的细胞，例如来源于外周血单核细胞(PBMC)的T细胞作为效应细胞群。由于必须收集每位患者的细胞，进行测试并使其成为CAR治疗剂，故CAR疗法：1)极其昂贵；并且2)只能在某些愿意和/或能够进行该疗法的中心利用。这些缺点使得许多有需要的群体在很大程度上无法使用CAR疗法。本专利技术部分地涉及产生旨在缓解这些和其它问题的一种现成的同种异体CAR疗法。
[0003]自体CAR
‑
T疗法已成为血液癌症患者的标准护理的一部分。CAR
‑
T疗法中细胞的来源来自于患者的PMBC。同种异体CAR
‑
T细胞疗法的研发已进入临床试验期，该疗法还使用了PBMC作为源材料。UCB
‑
T细胞具有不同的生物特性，这使其更适合作为同种异体细胞疗法的源材料。相较于自PBMC扩增的T细胞，这些细胞主要具有Tcm和T稚表型，呈现增加的增殖活性，并且保持较长的端粒/较高的端粒酶活性(Okas等人,《免疫疗法杂志(Journal of Immunotherapy)》,2010；Frumento等人,《移植杂志(Journal of Transplantation)》,2013)。它们对HLA错配具有较强的免疫耐受性并具有减弱的同种异体激活作用(Barker等人,《血液(Blood)》,2001；Chen等人,《血液与骨髓移植生物学(Biology of Blood and Marrow Transplantation)》,2006)。出于治疗目的，这些细胞可扩增至临床规模。
[0004]T细胞和NK细胞是同种异体反应性的关键细胞介体。T细胞受体是参与同种异体反应性的关键受体。T细胞受体基因失活使得同种异体反应性降低。宿主NK细胞杀灭含错配HLA的供体细胞或不表达HLA分子。逃避NK细胞杀灭的一个机制是通过表达抑制NK细胞功能的HLA
‑
E分子实现。
[0005]已研发出一个独特的平台，该平台使用产后人胎盘源性T细胞用于同种异体平台中以治疗血液癌症和实体癌。在本专利技术研究中，已展示利用CD19 CAR
‑
T和CD20 CAR
‑
T细胞疗法胎盘T细胞治疗B细胞恶性病进行的概念验证。尽管胎盘源性T细胞(P
‑
T细胞)展示较强的免疫耐受性和减弱的同种异体反应，但我们设想并且已经展示T细胞受体a恒定区(T
‑
cell receptor a constant，TRAC)敲除(KO)，例如CRISPR介导的T细胞受体a恒定区(TRAC)敲除(KO)，该步骤是避开由P
‑
T细胞上内源性T细胞受体表达引起的任何潜在GvHD的另一风险缓释策略。必要时，这些细胞可进一步基因修饰成不表达B2M，并表达嵌合HLA
‑
E分子以降低其由T/NK细胞引起的同种异体反应性/清除。

技术实现思路

[0006]本专利技术涉及使用胎盘源性细胞作为CAR疗法的细胞来源。这些细胞包含从胎盘、胎盘灌注液和脐带血以及其组合分离的细胞。在本专利技术实例中，使用了来自脐带血和/或来自胎盘灌注液的细胞，并且经显示，这些胎盘源性细胞优于来自其它细胞来源的T细胞，如来
自PBMC的细胞。
[0007]在本文中，申请人已发现，相较于PBMC，胎盘源性细胞具有较幼稚的表型和较少的效应/记忆细胞，表示此群体的一个优点。此外，申请人还展示胎盘源性T细胞的高达3600倍的扩增。基于这些发现，本专利技术一个方面使用了胎盘源性T细胞，例如脐带血源性T细胞或离体扩增的脐带血源性T细胞作为用于CAR疗法的细胞类型。
[0008]申请人还研发出这样做的方法，并显示，此类细胞可以用示例性CAR高效转导，并且可以容易地杀灭表达靶标的细胞，而不杀灭缺乏靶标的细胞。此杀灭或其缺乏与响应于表达靶标但不缺乏靶标的肿瘤细胞所引起的效应物细胞因子表达相关。
[0009]申请人也已展示，胎盘源性T细胞的同种异体反应性明显低于PBMC。因此，在一些实施例中，本专利技术教示了使用胎盘源性细胞，例如脐带血源性细胞或扩增的脐带血源性细胞用于CAR疗法。
[0010]申请人发现的另一个益处在于，胎盘源性T细胞的幼稚型表型(phenotype)允许耗尽Treg细胞，这可能另外降低CAR疗法的有效性。由于CD25在激活T细胞上表达，故此类耗尽对于PBMC来说是不可能的/不实际的。
[0011]在建立同种异体CAR疗法的另一项尝试中，申请人敲除了TCR的一部分，此处是TRAC。申请人已研发出使用CRISPR对胎盘源性T细胞进行高效基因修饰的方法。预期使用此类基因修饰可进一步增大胎盘源性T细胞的同种异体优点。因此，在一些实施例中，本专利技术教示了T细胞的基因修饰以降低同种异体反应性，如敲除TCR基因，例如TRAC。
[0012]尽管在本申请中已使用特定CAR，但预期以下优点适用于任何CAR并明显改善CAR疗法，并且提供具有减少的GVHD的同种异体治疗：1)使用胎盘源性T细胞；2)敲除T细胞基因，例如TCR基因，如TRAC；以及3)其组合。
附图说明
[0013]图1显示了用于避开T/NK驱动的同种异体反应性的策略。
[0014]图2显示了用于产生胎盘源性同种异体CAR
‑
T的方法的概述。
[0015]图3显示了分离的胎盘源性T细胞的表型。
[0016]图4显示了在20天时胎盘源性T细胞的体外扩增。
[0017]图5显示了在第13天之后再刺激之后，在20天时体外扩增的胎盘源性T细胞的表型。
[0018]图6显示了在15天时，CD19 CAR修饰的胎盘源性T细胞的体外扩增。
[0019]图7显示了第15天CD19 CAR修饰的P
‑
T细胞的T细胞分化状态。
[0020]图8显示了T效应记忆(T em)细胞和T效应(T eff)细胞上CD57的表达情况。
[0021]图9显示了针对第15天CD19 CAR修饰的P
‑
T细胞的表型分析。
[0022]图10显示了在P
‑
T细胞中滴定的CD19 CAR病毒载体的第15天CD19CAR表达情况。
[0023]图11显示了在来自不同胎盘供体的多种P
‑
T制剂中再现的第15天P
‑
CD19 CAR表型。
[0024]图12显示了在来自不同胎盘供体的多种P
‑
T制剂中再现的第15天CD19 CAR表达。
[0025]图13显示了针对CD19+/CD19
‑
靶标的第14天UCB CD19 CAR
‑
T细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞群，其中所述T细胞是胎盘T细胞。2.根据权利要求1所述的T细胞群，其中所述胎盘T细胞是脐带血T细胞、胎盘灌注液T细胞或其混合物。3.根据权利要求1所述的T细胞群，其中所述胎盘T细胞是脐带血T细胞。4.根据权利要求1所述的T细胞群，其中所述胎盘T细胞是脐带血T细胞与胎盘灌注液T细胞的混合物。5.根据权利要求1至4中任一项所述的T细胞群，其中所述CAR已通过转染引入所述细胞中。6.根据权利要求1至4中任一项所述的T细胞群，其中所述CAR已通过病毒转导引入所述细胞中。7.根据权利要求6所述的T细胞群，其中所述CAR已通过用逆转录病毒载体进行病毒转导而引入所述细胞中。8.根据权利要求6所述的T细胞群，其中所述CAR已通过用慢病毒载体进行病毒转导而引入所述细胞中。9.根据权利要求1至8中任一项所述的T细胞群，其中相较于外周血单核细胞T细胞群，所述T细胞群具有较高百分比的表达CD45RA的细胞。10.根据权利要求1至9中任一项所述的T细胞群，其中相较于外周血单核细胞T细胞群，所述T细胞群具有较高百分比的表达CD27的细胞。11.根据权利要求1至10中任一项所述的T细胞群，其中相较于外周血单核细胞T细胞群，所述T细胞群具有较高百分比的表达CCR7的细胞。12.根据权利要求1至11中任一项所述的T细胞群，其中相较于外周血单核细胞T细胞群，所述T细胞群具有较高百分比的表达CD127的细胞。13.根据权利要求1至12中任一项所述的T细胞群，其中相较于外周血单核细胞T细胞群，所述T细胞群具有较低百分比的表达CD57的细胞。14.根据权利要求1至13中任一项所述的T细胞群，其中相较于外周血单核细胞T细胞群，所述T细胞群具有较高百分比的表达CD62L的细胞。15.根据权利要求1至14中任一项所述的T细胞群，其中相较于外周血单核细胞T细胞群，所述T细胞群具有较低百分比的表达CD25的细胞。16.根据权利要求1至15中任一项所述的T细胞群，其中相较于外周血单核细胞T细胞群，所述T细胞群具有较高百分比的表达Lag
‑
3+的细胞。17.根据权利要求1至16中任一项所述的T细胞群，其中相较于外周血单核细胞T细胞群，所述T细胞群具有较低百分比的表达Tim
‑
3的细胞。18.根据权利要求1至17中任一项所述的T细胞群，其中相较于外周血单核细胞T细胞群，所述T细胞群展现对癌细胞系的较高体外杀灭作用。19.根据权利要求1至18中任一项所述的T细胞群，其中相较于外周血单核细胞T细胞群，所述T细胞群在体外攻击中针对癌细胞系表达较大量的穿孔素。20.根据权利要求1至19中任一项所述的T细胞群，其中相较于外周血单核细胞T细胞群，所述T细胞群在体外攻击中针对癌细胞系表达较大量的GM
‑
CSF。21.根据权利要求1至20中任一项所述的T细胞群，其中相较于外周血单核细胞T...

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：细胞结构公司，
类型：发明
国别省市：