来自胎盘的自然杀伤细胞制造技术

本发明专利技术提供的是胎盘灌洗液、胎盘灌洗液细胞、胎盘来源的中间体自然杀伤细胞、来自胎盘和脐带血的组合的自然杀伤细胞及其组合。本发明专利技术还提供的是包含胎盘灌洗液、胎盘灌洗液细胞、胎盘来源的中间体自然杀伤细胞和组合的自然杀伤细胞及其组合的组合物及使用它们来抑制肿瘤细胞、癌症细胞等的生长或增殖的方法和治疗具有肿瘤细胞的个体的方法。本发明专利技术还提供的是用胎盘灌洗液、胎盘灌洗液来源的细胞、来自胎盘(例如，来自胎盘灌洗液)的自然杀伤细胞和/或包含来自胎盘(例如，来自胎盘灌洗液)和脐带血的自然杀伤细胞的组合的自然杀伤细胞治疗患有肿瘤或移植物抗宿主病的个体的方法。治疗患有肿瘤或移植物抗宿主病的个体的方法。治疗患有肿瘤或移植物抗宿主病的个体的方法。

【技术实现步骤摘要】
来自胎盘的自然杀伤细胞
[0001]相关申请
[0002]本申请为2014年2月4日提交的、专利技术名称为“来自胎盘的自然杀伤细胞”、申请号为201480020211X的中国专利技术专利申请的分案申请。
[0003]本申请要求2013年2月5日申请的美国临时专利申请第61/761,176号及2013年3月13日申请的美国临时专利申请第61/780,115号的权益，这两个临时专利申请的公开内容通过引用以其全部内容并入本文。
[0004]1.领域
[0005]本文提供的是抑制肿瘤细胞生长或增殖的方法，即通过使肿瘤细胞与胎盘灌洗液、胎盘灌洗液来源的细胞、来自胎盘(例如，来自胎盘灌洗液)的自然杀伤细胞和/或包含来自胎盘(例如，来自胎盘灌洗液)和脐带血的自然杀伤细胞的组合的自然杀伤细胞接触。本文还提供的是产生来自胎盘(例如，来自胎盘灌洗液，例如人胎盘灌洗液)的独特的自然杀伤细胞群体的方法。本文进一步提供的是使用所述胎盘灌洗液和来自所述胎盘灌洗液的自然杀伤细胞来抑制肿瘤细胞增殖的方法。本文还提供的是用胎盘灌洗液、胎盘灌洗液来源的细胞、来自胎盘(例如，来自胎盘灌洗液)的自然杀伤细胞和/或包含来自胎盘(例如，来自胎盘灌洗液)和脐带血的自然杀伤细胞的组合的自然杀伤细胞治疗患有肿瘤或移植物抗宿主病的个体的方法。
[0006]2.背景
[0007]胎盘灌洗液包含通过使灌洗溶液通过胎盘脉管系统获得的胎盘细胞的收集物，和来自脉管系统、来自胎盘的母体表面或两者的灌洗液的收集物。灌洗哺乳动物胎盘的方法描述于例如美国专利第7,045,146号和美国专利第7,255,879号。通过灌洗获得的胎盘细胞群体是不均一的，包含造血(CD34
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)细胞、有核细胞例如粒细胞、单核细胞和巨噬细胞、小百分比(小于1％)的组织培养基底
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贴壁胎盘干细胞和自然杀伤细胞。迄今为止未曾有描述胎盘灌洗液或来自灌洗液的胎盘细胞群体在抑制肿瘤细胞增殖中的用途。
[0008]自然杀伤(NK)细胞是构成先天性免疫系统的主要组分的细胞毒性淋巴细胞。NK细胞不表达T
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细胞抗原受体(TCR)、CD3或表面免疫球蛋白(Ig)B细胞受体，但是通常在人类中表达表面标志物CD16(FcγRIII)和CD56。NK细胞是细胞毒性的；它们的细胞质中的小颗粒含有特殊的蛋白质，例如穿孔素(perforin)和被称为颗粒酶的蛋白酶。一旦在要杀伤的靶细胞附近释放，则穿孔素在所述靶细胞的细胞膜中形成孔，颗粒酶及所缔合的分子通过该孔可以进入，从而诱导细胞凋亡。一种颗粒酶，颗粒酶B(也称为颗粒酶2和细胞毒性T
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淋巴细胞相关丝氨酸酯酶1)，是对于在细胞介导的免疫应答中快速诱导靶细胞凋亡来说至关重要的丝氨酸蛋白酶。
[0009]NK细胞对干扰素或者巨噬细胞源性细胞因子响应而被激活。激活的NK细胞被称为淋巴因子活化的杀伤(LAK)细胞。NK细胞具备两种类型的表面受体，标记为“激活受体”和“抑制受体”，其控制细胞的细胞毒性活性。
[0010]在其它活性中，NK细胞在宿主肿瘤排斥中起作用。因为癌细胞具有降低的或不具有I类MHC表达，所以它们可以变成NK细胞的靶标。积累的临床数据表明分离自外周血单核
细胞(PBMC)或骨髓的人NK细胞的单倍同一性移植介导了强效的抗白血病效应而不会引起可检测的移植物抗宿主病(GVHD)。参见Ruggeri等人,Science 295:2097
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2100(2002))。自然杀伤细胞可以通过细胞缺少或显示出降低水平的主要组织相容性复合体(MHC)蛋白而被激活。激活并扩增的NK细胞和LAK细胞已在晚期癌症患者的离体疗法(ex vivo therapy)和体内治疗(in vivo treatment)中使用，其中对骨髓相关疾病，如白血病、乳癌和某些类型的淋巴瘤，取得了一定的成功。LAK细胞治疗需要患者首先接受IL
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2，随后进行白细胞去除术且然后将所收获的自体血细胞在存在IL
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2的情况下离体孵育和培养几天。必须将LAK细胞与相对高剂量的IL
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2一起再输注以完成所述疗法。这种净化治疗(purging treatment)是昂贵的并且可引起严重的副作用。这些包括体液潴留、肺水肿、血压降低和高烧。
[0011]虽然NK细胞在杀死肿瘤细胞和病毒感染的细胞中具有有利性能，但是它们仍难以与免疫疗法一起使用和在免疫疗法中应用，这主要是由于在培养和扩增期间难以维持它们的肿瘤靶向和杀肿瘤能力。因此，在本领域中存在即时供应自然杀伤细胞的需求。
[0012]3.概述
[0013]在一个方面，本文提供的是胎盘灌洗液；来自胎盘灌洗液的细胞，例如来自胎盘灌洗液的总有核细胞；胎盘灌洗液细胞和脐带血细胞的组合；和/或来自胎盘的自然杀伤细胞，例如来自胎盘灌洗液的自然杀伤细胞或通过消化胎盘组织获得的自然杀伤细胞抑制肿瘤细胞增殖的用途。
[0014]在一个方面，本文提供的是抑制肿瘤细胞或肿瘤细胞群体的增殖的方法，包括使肿瘤细胞或肿瘤细胞群体与人胎盘灌洗液接触。在该方法的一个具体的实施方式中，所述肿瘤细胞是血液癌症细胞。在另一个具体的实施方式中，所述肿瘤细胞是血液癌症细胞。在另一个具体的实施方式中，所述肿瘤细胞是实体肿瘤细胞。在另一个具体的实施方式中，所述肿瘤细胞群体是实体肿瘤细胞群体。在另一个实施方式中，所述肿瘤细胞是原发性导管癌细胞、白血病细胞、急性T细胞白血病细胞、慢性髓样淋巴瘤(CML)细胞、急性髓细胞白血病细胞、慢性髓细胞白血病(CML)细胞、肺癌细胞、结肠腺癌细胞、组织细胞性淋巴瘤细胞、多发性骨髓瘤细胞、视网膜母细胞瘤细胞、结肠直肠癌细胞或结肠直肠腺癌细胞。在另一个具体的实施方式中，所述接触发生在体外。在另一个具体的实施方式中，所述接触发生在体内。在一个更具体的实施方式中，所述体内接触发生在人体内。
[0015]在另一个具体的实施方式中，所述胎盘灌洗液是已经通过胎盘脉管系统(例如，仅通过胎盘脉管系统)的灌洗液。在另一个具体的实施方式中，所述胎盘灌洗液已经通过胎盘脉管系统并且由胎盘的母体面收集。在另一个具体的实施方式中，所述胎盘灌洗液中所有或实质上所有(例如，大于90％、95％、98％或99％)的细胞是胎儿细胞。在另一个具体的实施方式中，所述胎盘灌洗液包含胎儿细胞和母体细胞。在一个更具体的实施方式中，所述胎盘灌洗液中的所述胎儿细胞占所述灌洗液中小于约90％、80％、70％、60％或50％的细胞。在另一个具体的实施方式中，通过将0.9％NaCl溶液通过胎盘脉管系统获得所述灌洗液。在另一个具体的实施方式中，所述灌洗液包含培养基。在另一个具体的实施方式中，所述灌洗液已经过处理以除去大量的红细胞。
[0016]如本文所用的，短语“来自胎盘的自然杀伤细胞”不包括来自脐带血或胎盘血的自然杀伤细胞。
[0017]在另一个方面，本文提供的是抑制肿瘤细胞或众多肿瘤细胞的增殖的方法，包括
使所述肿瘤细胞或众多肿瘤细胞与众多胎盘本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.抑制肿瘤细胞的增殖的方法，包括使所述肿瘤细胞与分离自人胎盘灌洗液和脐带血的自然杀伤细胞接触。2.治疗移植物抗宿主病的方法，包括将分离自人胎盘灌洗液和脐带血的自然杀伤细胞给予患有、怀疑患有移植物抗宿主病或处于发生移植物抗宿主病风险之中的患者。3.权利要求1的方法，其中所述肿瘤细胞是血液癌症细胞。4.权利要求1的方法，其中所述肿瘤细胞是实体肿瘤细胞。5.权利要求1的方法，其中，所述肿瘤细胞是原发性导管癌细胞、白血病细胞、急性T细胞白血病细胞、慢性髓样淋巴瘤(CML)细胞、急性髓细胞白血病细胞、慢性髓细胞白血病(CML)细胞、肺癌细胞、结肠腺癌细胞、组织细胞性淋巴瘤细胞、结肠直肠癌细胞、结肠直肠腺癌细胞或视网膜母细胞瘤细胞。6.权利要求1的方法，其中所述人胎盘灌洗液和脐带血已经过处理以除去大量的红细胞。7.权利要求1的方法，其中所述接触是在体外接触。8.权利要求1的方法，其中所述接触是在体内接触。9.权利要求8的方法，其中所述接触是在人体内。10.权利要求1的方法，其中所述胎盘灌洗液细胞是来自胎盘灌洗液的总有核细胞。11.权利要求1的方法，其中所述自然杀伤细胞包含至少约50％CD56
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细胞。12.权利要求1的方法，其中所述自然杀伤细胞包含至少约50％CD56
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CD16
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细胞。13.权利要求1的方法，其中所述自然杀伤细胞与免疫调节化合物以足以使所述细胞比相等个数的未接触所述免疫调节化合物的细胞表达可检测更多的颗粒酶B的量和时间接触。14.权利要求13的方法，其中所述免疫调节化合物是来那度胺或泊马度胺。15.权利要求1的方法，其中所述自然杀伤细胞包含：比来自外周血的相等个数的自然杀伤细胞可检测更高个数的CD3
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CD56
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CD16
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自然杀伤细胞；比来自外周血的相等个数的自然杀伤细胞可检测更低个数的CD3
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CD56
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CD16
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【专利技术属性】
技术研发人员：张小葵，罗伯特，
申请(专利权)人：细胞结构公司，
类型：发明
国别省市：