【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】基于亮氨酸拉链的组合物和使用方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2018年8月16日提交的美国临时专利申请第62/765,058号和2019年1月29日提交的美国临时专利申请第62/798,168号的优先权，将其全部内容均通过引用并入本文，并要求其优先权。
专利
[0003]本公开的主题提供用于基于细胞的免疫疗法的组合物和系统。它涉及包括膜结合多肽和可溶性多肽的系统，以及使用它们的方法。
技术介绍
[0004]基于细胞的免疫疗法或过继细胞疗法是具有癌症治疗治愈潜力的疗法。通过引入对所选抗原具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)，可以将T细胞和其他免疫细胞修饰成靶向肿瘤抗原。使用CAR的靶向T细胞疗法已展现出在治疗血液恶性肿瘤方面的最新临床成功。为了确保以最小的毒性有效根治癌症，基于CAR的治疗可能需要靶向多种肿瘤抗原，并且通常需要将较大的重组构建体放入T细胞和其他免疫细胞中。然而，很难以所需的效率将大量遗传信息稳定地整合到原代T细胞中；这是当前细胞工程的技术限制。随着病毒载体插入物接近和超过病毒的包装极限，逆转录病毒和慢病毒都显示出病毒滴度的显著降低(逆转录病毒约为6
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8kb，慢病毒约为10
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12kb)。病毒滴度低导致转导效率低，以及每个细胞整合的拷贝数低，导致基因构建体表达的水平较低。因此，需要新的遗传工程策略来表达靶向多种抗原的更大的CAR构建体，并且需要能够以最小的毒性和脱靶活性来诱导有效的根除癌症的治疗策略。
技术实现思路
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种系统，其包括：a)膜结合多肽，其包括：i)跨膜结构域，ii)细胞内结构域，和iii)包括第一二聚化结构域和阻断间隔区的细胞外结构域，和b)可溶性多肽，其包括：i)第二二聚化结构域，和ii)与抗原结合的抗原结合结构域，其中所述第一二聚化结构域和所述第二二聚化结构域中的每一个均包括亮氨酸拉链结构域，并且当所述膜结合多肽和所述可溶性多肽不是由相同细胞表达时，所述阻断间隔区阻止所述膜结合多肽与所述可溶性多肽的二聚。2.根据权利要求1所述的系统，其中所述阻断间隔区的长度不超过约25个氨基酸。3.根据权利要求1或2所述的系统，其中所述阻断间隔区的长度为约5个氨基酸至约25个氨基酸。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的系统，其中所述阻断间隔区是截短的CD28间隔区或IgG1铰链。5.一种系统，其包括：a)膜结合多肽，其包括：i)跨膜结构域，ii)细胞内结构域，和iii)包括第一二聚化结构域和能够与所述第一二聚化结构域二聚的第二二聚化结构域的细胞外结构域，和b)可溶性多肽，其包括：i)能够与所述第一二聚化结构域二聚的第三二聚化结构域，和ii)与抗原结合的抗原结合结构域，其中所述第一二聚化结构域和所述第二二聚化结构域中的每一个均包括亮氨酸拉链结构域。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的系统，其中所述抗原选自肿瘤抗原、病原体抗原、免疫检查点分子、活化受体和造血谱系细胞的生物标志物。7.根据权利要求1
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6中任一项所述的系统，其中所述抗原是肿瘤抗原。8.根据权利要求7所述的系统，其中所述肿瘤抗原选自CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD19、CD20、CD22、VpreB、CD30、CD33、CD38、CD40、CD44v6、CD70、CD79a、CD70b、CLL
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1/CLEC12A、CD123、IL
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3R复合物、TIM
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3、BCMA、TACI、SLAMF7、CD244、Epcam、E
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钙粘蛋白、B7
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H3、B7
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H4及其组合。9.根据权利要求1
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6中任一项所述的系统，其中所述抗原是活化受体。10.根据权利要求9所述的系统，其中所述抗原结合结构域与所述活化受体的结合能够激活抗原呈递细胞(APC)。11.根据权利要求10所述的系统，其中所述APC是专职性APC。12.根据权利要求11所述的系统，其中所述专职性APC选自树突状细胞、巨噬细胞、B细胞及其组合。13.根据权利要求10所述的系统，其中所述APC是非专职性APC。14.根据权利要求10
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13中任一项所述的系统，其中所述APC是髓系谱系的细胞。15.根据权利要求14所述的系统，其中所述髓系谱系的细胞选自树突状细胞、巨噬细胞、单核细胞及其组合。16.根据权利要求9
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15中任一项所述的系统，其中所述活化受体选自CD40、Toll样受体(TLR)、FLT3、RANK、GM
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CSF受体及其组合。17.根据权利要求1
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6中任一项所述的系统，其中所述抗原是免疫检查点分子。
18.根据权利要求17所述的系统，其中所述抗原结合结构域与所述免疫检查点分子的结合能够阻断免疫应答细胞中的免疫检查点信号。19.根据权利要求17或18所述的系统，其中所述免疫检查点分子选自PD
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L1、CD200、B7
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H3、B7
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H4、HVEM、半乳凝素9、PD
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1、CTLA
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4、CD200R、TIM
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3、Lag
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3、TIGIT、其片段及其组合。20.根据权利要求1
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6中任一项所述的系统，其中所述抗原是造血谱系细胞的生物标志物。21.根据权利要求20所述的系统，其中所述造血谱系细胞的生物标志物选自CD3、CD16、CD33、c
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Kit、CD161、CD19、CD20、VpreB、促黄体生成激素受体(LHCGR)、CD123、IL
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3R复合物、CLEC12A/CLL
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1、其片段及其组合。22.根据权利要求20或21所述的系统，其包括至少四个可溶性多肽，其中每个可溶性多肽的抗原结合结构域与不同的造血谱系细胞的生物标志物结合，任选地，所述至少四个可溶性多肽中的每一个均包括有包括亮氨酸拉链结构域的二聚化结构域。23.根据权利要求22所述的系统，其包括与CD3结合的第一可溶性多肽、与CD19结合的第二可溶性多肽、与CD161结合的第三可溶性多肽和与c
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Kit结合的第四可溶性多肽。24.根据权利要求1
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23所述的系统，其还包括：c)嵌合抗原受体(CAR)，其包括第二抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内活化结构域。25.根据权利要求24所述的系统，其中所述系统还包括d)抑制性受体，其包括亮氨酸拉链结构域，其中所述抑制性受体与第三抗原结合。26.根据权利要求25所述的系统，其中所述抑制性受体是基于酪氨酸磷酸酶的抑制性受体。27.根据权利要求26所述的系统，其中所述酪氨酸磷酸酶选自PTPRJ、PTPRC、PTPN22和PTPN6。28.根据权利要求25
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27中任一项所述的系统，其中所述抑制性受体在不存在所述第三抗原的情况下，组成性地抑制CAR和/或使所述CAR失活。29.根据权利要求25
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28中任一项所述的系统，其中所述抑制性受体与所述第三抗原的结合阻止所述CAR被所述抑制性受体抑制和/或失活。30.一种系统，其包括：a)膜结合多肽，其包括跨膜结构域、细胞内结构域和包括第一二聚化结构域的细胞外结构域，和b)可溶性多肽，其包括能够与所述第一二聚化结构域二聚的第二二聚化结构域和细胞因子或趋化因子，其中所述第一二聚化结构域和所述第二二聚化结构域中的每一个均包括亮氨酸拉链结构域。31.根据权利要求30所述的系统，其中所述细胞因子选自IL
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1、IL
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2、IL
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3、IL
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7、IL
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10、IL
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12、IL
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15、IL
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17、IL
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18、IL
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21、IL
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22及其组合。32.根据权利要求30所述的系统，其中所述趋化因子选自CCL1、CCL17、CCL8、CCL16、CCL18、CCL22及其组合。33.根据权利要求30
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32中任一项所述的系统，其中所述膜结合多肽的细胞外结构域还
包括第三二聚化结构域，并且其中所述第二二聚化域能够在所述第一二聚化结构域和所述第三二聚化结构域之间的二聚之前，与所述第一二聚化结构域进行二聚。34.根据权利要求1
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33中任一项所述的系统，其中所述膜结合多肽的细胞外结构域还在所述第一二聚化结构域和所述第二二聚化结构域之间包括接头。35.根据权利要求34所述的系统，其中所述接头包括SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。36.根据权利要求1
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35中任一项所述的系统，其中所述膜结合多肽的细胞内结构域包括一个或多个免疫活化分子。37.根据权利要求1
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36中任一项所述的系统，其中所述膜结合多肽的细胞内结构域不包括一个或多个免疫活化分子。38.根据权利要求1
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37中任一项所述的系统，其中所述第一二聚化结构域包括SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：58所示的氨基酸序列，所述第二二聚化结构域和第三二聚化结构域中的每一个均包括SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：67所示的氨基酸序列。39.根据权利要求1
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38中任一项所述的系统，其中所述可溶性多肽和所述膜结合多肽在由相同细胞表达时能够形成二聚体。40.根据权利要求1
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39中任一项所述的系统，其中所述可溶性多肽和所述膜结合多肽在由不同细胞表达时，由于所述膜结合多肽的第一二聚化结构域和第二二聚化结构域之间的二聚，不能形成二聚体。41.根据权利要求1
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40中任一项所述的系统，其中所述膜结合多肽的细胞内结构域包括CD3
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ζ结构域、共刺激结构域或其片段或组合。42.根据权利要求1
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41中任一项所述的系统，其还包括自杀分子。43.根据权利要求42所述的系统，其中所述自杀分子是诱导型胱天蛋白酶9多肽(iCasp9)。44.根据权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：纪念斯隆凯特琳癌症中心，
类型：发明
国别省市：
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