用于调控酸性环境免疫应答的组合物、其制备方法和用途技术

本发明专利技术提供了一种用于调控酸性环境免疫应答的组合物，所述组合物由酸性环境靶向分子和免疫细胞组成，所述酸性环境靶向分子为低pH插入肽(low pH insertion peptide，pHLIP)或其变体的偶联分子或融合蛋白，所述免疫细胞为内源性或外源性免疫细胞。本发明专利技术还提供了本发明专利技术的组合物的制备方法和用途。本发明专利技术的组合物通过调控酸性环境免疫应答，特别是肿瘤酸性环境的免疫应答，可以用于治疗实体肿瘤。可以用于治疗实体肿瘤。可以用于治疗实体肿瘤。

【技术实现步骤摘要】
用于调控酸性环境免疫应答的组合物、其制备方法和用途


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及一种用于调控酸性环境免疫应答的组合物，本专利技术还涉及所述组合物的制备方法和用途。

技术介绍

[0002]肿瘤的免疫治疗涉及单克隆抗体、疫苗、基因治疗、免疫细胞治疗等，其中靶向肿瘤抗原的单克隆抗体、免疫检查点抑制剂、T细胞受体修饰T细胞(TCR-T)、嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)等免疫治疗方法，在临床研究中显示出令人瞩目的抗肿瘤效果。然而，由于肿瘤特异性抗原缺乏而带来的脱靶效应、特别是实体瘤的肿瘤异质性以及肿瘤抑制性微环境对免疫细胞浸润与功能的负向调控等，严重制约了免疫治疗的效果，并引起生物医药
对该种新型肿瘤干预技术的安全性的担忧。
[0003]由于肿瘤微环境异常的血管结构以及肿瘤细胞的过度增殖，使得肿瘤组织的代谢更多地依赖于无氧糖酵解，其代谢产物乳酸与呼吸作用产生的CO2共同造成了肿瘤微环境的酸化，肿瘤细胞外pH(6.5-6.8)显著低于外周血或正常组织的pH(7.4)，酸性环境是多种实体肿瘤的一个共有特征。研究表明，肿瘤的酸性环境可以调控多种生物过程，包括细胞增殖、血管新生、免疫抑制、侵袭和耐药等，甚至促使高侵袭表型的肿瘤形成，肿瘤恶性程度更高。因此，靶向肿瘤的酸性环境是一种全新的诊断和治疗方法，其不依赖于特定的肿瘤抗原，不受限于肿瘤异质性，既可以用于预测肿瘤的恶性程度，又可以递送治疗性药物至多种肿瘤组织从而达到治疗的目的。
[0004]低pH插入肽(pH low insertion peptide，pHLIP)是来源于细菌的视紫红质跨膜螺旋蛋白C的一种水溶性多肽，能够插入细胞双层脂膜并形成稳定的跨膜α螺旋。pHLIP具有三种主要形态，中性或碱性pH(pH＞7)下形成溶于水的无结构形态I，或粘附到细胞膜表面的无结构形态II，于酸性pH(pH＜7)下插入细胞膜并形成跨膜α螺旋的形态III。传统的细胞穿透肽穿过细胞膜后则直接进入细胞质中。与此截然不同，pHLIP和脂质双分子层之间不存在特异性的相互作用，仅仅受到所处环境下的pH影响即在酸性环境下插入细胞膜，其N端位于细胞膜外而C端则进入细胞质中。因此，pHLIP具有强大的传递能力：通过其N端连接货物分子并系于细胞膜表面，进而通过其C端将不具穿膜能力的货物分子靶向到细胞质中。由于pHLIP所具有的这种特殊的理化性质，它被广泛应用于以下领域：(1)通过荧光染料、成像探针等标记pHLIP并递送至酸性组织，用于疾病诊断或荧光图像导航手术；(2)通过放射性核素标记pHLIP递送至酸性组织，进行核成像(PET/SPECT)；(3)与毒素、药物、治疗性基因偶联以治疗疾病；(4)特异递送纳米材料至酸化组织。
[0005]但是，现有技术中并没有pHLIP偶联荧光分子或连接生物活性的细胞因子或趋化因子或各种抗原联合免疫细胞治疗具有酸性特征疾病的相关报道。具体地，关于pHLIP在以下方面的潜在用途尚未见报道：(1)pHLIP连接生物活性的细胞因子或趋化因子或偶联免疫调节药物联合内源性或外源性免疫细胞，特异靶向至酸性环境以调节免疫应答；(2)pHLIP连接肿瘤相关抗原、细菌抗原、病毒抗原等多肽抗原，联合基因工程免疫细胞(T细胞、NK细
胞、NKT细胞、巨噬细胞等)的免疫增强型疗法；(3)磁性纳米材料标记pHLIP，递送至酸性组织进行磁共振成像(MRI)。
[0006]也就是说，当前对更先进的pHLIP的组合物存在需求。

技术实现思路

[0007]基于此，本专利技术的目的是提供一种用于调控酸性环境免疫应答的组合物，其包括酸性环境靶向分子和免疫细胞。本专利技术还提供了所述组合物的制备方法及其用途。
[0008]一方面，本专利技术提供了一种组合物，所述组合物由酸性环境靶向分子和免疫细胞组成，所述酸性环境靶向分子为低pH插入肽(low pH insertion peptide，pHLIP)或其变体的偶联分子或融合蛋白，所述免疫细胞为内源性或外源性免疫细胞；
[0009]其中，所述pHLIP或其变体的偶联分子或融合蛋白通过pHLIP或其变体的N端与细胞因子、荧光分子、免疫调节药物、磁共振成像造影剂、磁性纳米材料、肿瘤相关抗原、细菌抗原、病毒抗原、真菌抗原、植物抗原、多肽抗原或抗体Fc片段连接获得。
[0010]根据本专利技术所述的组合物，其中，所述低pH插入肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示；
[0011]优选地，所述低pH插入肽的变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:3-SEQ ID NO:18中任一项所示；
[0012]优选地，所述pHLIP或其变体的融合蛋白如SEQ ID NO:19-SEQ ID NO:25中任一项所示。
[0013]具体地，所述低pHLIP及其变体包括以下多肽：
[0014]WT-1(SEQ ID NO:1)；WT-2(SEQ ID NO:2)；Var1(SEQ ID NO:3)；Var2(SEQ ID NO:4)；Var3(SEQ ID NO:5)；Var4(SEQ ID NO:6)；Var5(SEQ ID NO:7)；Var6(SEQ ID NO:8)；Var7(SEQ ID NO:9)；Var8(SEQ ID NO:10)；Var9(SEQ ID NO:11)；Var10(SEQ ID NO:12)；Var11(SEQ ID NO:13)；Var12(SEQ ID NO:14)；Var13(SEQ ID NO:15)；Var14(SEQ ID NO:16)；Var15(SEQ ID NO:17)；Var16(SEQ ID NO:18)。
[0015]根据本专利技术所述的组合物，其中，所述免疫细胞为内源性或外源性免疫细胞，包括但不限于自体免疫细胞、异体免疫细胞、自体基因工程免疫细胞、异体基因工程免疫细胞。
[0016]优选地，所述免疫细胞包括但不限于NK细胞、NKT细胞、CD16/64嵌合受体(CD16/64chimeric receptor，CD16/64CR)修饰的NK/NKT/T细胞、嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor，CAR)修饰的NK/NKT/T细胞；
[0017]更优选地，所述免疫细胞为CD16/64CR-T细胞和CAR-T细胞。
[0018]根据本专利技术所述的组合物，其中所述的细胞因子包括但不限于白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子、集落刺激因子、趋化因子和生长因子。其中，所述白细胞介素包括但不限于IL-2、IL-7、IL-10、IL-12、IL-15和IL-21；所述干扰素包括但不限于IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IFN-κ和IFN-λ；其中，所述肿瘤坏死因子包括但不限于TNF-α和TNF-β；其中，所述集落刺激因子包括但不限于SCF、Flt3L、G-CSF、M-CSF和GM-CSF；其中，所述趋化因子包括但不限于CCL2、CCL5、CCL19、CCL21、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于调控酸性环境免疫应答的组合物，所述组合物由酸性环境靶向分子和免疫细胞组成，所述酸性环境靶向分子为pHLIP或其变体的偶联分子或融合蛋白，所述免疫细胞为内源性或外源性免疫细胞；其中，所述pHLIP或其变体的偶联分子或融合蛋白通过pHLIP或其变体的N端与细胞因子、荧光分子、免疫调节药物、磁共振成像造影剂、磁性纳米材料、肿瘤相关抗原、细菌抗原、病毒抗原、真菌抗原、植物抗原、多肽抗原或抗体Fc片段连接获得。2.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述连接为偶联或接头连接。3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中，所述低pH插入肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2所示；优选地，所述低pH插入肽的变体的氨基酸序列如SEQ ID NO:3-SEQ ID NO:18中任一项所示；优选地，所述pHLIP或其变体的融合蛋白如SEQ ID NO:19-SEQ ID NO:25中任一项所示。4.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述免疫细胞选自自体免疫细胞、异体免疫细胞、自体基因工程免疫细胞或异体基因工程免疫细胞；优选地，所述免疫细胞选自NK细胞、NKT细胞、CD16/64嵌合受体修饰的NK/NKT/T细胞、嵌合抗原受体修饰的NK/NKT/T细胞；更优选地，所述免疫细胞为CD16/64CR-T细胞和CAR-T细胞。5.根据权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中，所述细胞因子选自白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子、集落刺激因子、趋化因子和生长因子；其中，所述白细胞介素选自IL-2、IL-7、IL-10、IL-12、IL-15和IL-21；所述干扰素选自IFN-α、IFN-β、IFN-γ、IFN-κ和IFN-λ；其中，所述肿瘤坏死因子选自TNF-α和TNF-β；其中，所述集落刺激因子选自SCF、Flt3L、G-CSF、M-CSF和GM-CSF；其中，所述趋化因子选自CCL2、CCL5、CCL19、CCL21、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL11、XCL1和CX3CL1；其中，所述生长因子选自TGF-β、EGF、FGF、NGF、PDGF和VEGF。6.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中，所述免疫调节药物包括免疫抑制药物和免疫增强药物；优选地，所述免疫抑制药物选自环孢素、他克莫司和硫唑嘌呤；所述免疫增强药物选自胸腺素、转移因子和重组人干扰素。7.根据权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中，所述肿瘤相关抗原选自CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、ROR1、ROR2、CD38、CD123、CD133、NKG2D配体、ERBB2、MUC1、CD44v6、CD44v7、CD44v8、CEA、EpCAM、TAG72、KIT、IL-13Rα2、EGFR、EGFRvIII、GD2、GD3、HMW-MAA、MAGE1、MAGEA3、CD171、NCAM、IL-11Rα、FRα、PSCA、PSMA、TARP、CAIX、VEGFR、BCMA、CTLA-4、PD-L1、PD-L12、GPC3、CD47、AXL、FAP、α5β1、αvβ3、TGFβR、ER、PR、P53、IGFR、...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐建青，张晓燕，廖启彬，丁相卿，
申请(专利权)人：上海鑫湾生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：