【技术实现步骤摘要】
技术介绍
技术实现思路
1、根据本专利技术的一些实施例的一方面，提供了一种选择用于离体扩增以及移植入一受试者的一解冻的脐带血单位的方法，所述方法包括：在将所述脐带血单位分离为cd133+/cd34+部分以及cd/133-/cd34-部分前，确定在所述解冻的脐带血单位中所述多个细胞的存活率百分比，以及选择具有约40％至约85％存活率的多个单位，从而选择适合用于离体扩增以及移植入所述受试者的一解冻的脐带血单位。
2、根据本专利技术的一些实施例，所述方法包括：选择具有约40％至约70％存活率的多个单位。
3、根据本专利技术的一些实施例，所述方法更包括步骤：
4、(a)将适合用于离体扩增以及移植入所述受试者的被选择的所述解冻的脐带血单位分离为：(i)一第一选择的血细胞部分，包括多个cd133+/cd34+选择的细胞，以及(ii)一第二未选择的血细胞部分，包括多个cd133/cd34阴性细胞；
5、(b)在所述第一选择的cd133+/cd34+部分中，确定以下多个分离后的参数：
6、(i)约20×105至约75×105个细胞总数；
7、(ii)约70％至约85％的存活率；
8、(iii)约70％至约85％的多个cd133+细胞；
9、(iv)约70％至约85％的多个cd34+细胞；
10、(v)在cd133+/cd34+选择后，约0.02％至约1％的产率；
11、(vi)每1000个
12、(vii)低于3内毒素单位/毫升的内毒素；以及
13、(c)根据所述多个参数选择或排除所述第一选择的cd133+/cd34+部分，
14、从而选择适合用于离体扩增以及移植入所述受试者的一cd133+/cd34+脐带血部分。
15、根据本专利技术的一些实施例，所述步骤(a)的分离包括对cd133+的免疫磁珠(immunomagnetic bead)选择。
16、根据本专利技术的一些实施例，包括多个cd133/cd34阴性细胞的所述第二未选择的血细胞部分包括低于0.5％的多个cd133+/cd34+细胞。
17、根据本专利技术的一些实施例，包括多个cd133/cd34阴性细胞的所述第二未选择的血细胞部分包括低于0.01％的多个cd133+/cd34+细胞。
18、根据本专利技术的一些实施例，包括多个cd133/cd34阴性细胞的所述第二未选择的血细胞部分包括多个免疫细胞，所述多个免疫细胞包含多个t淋巴细胞、多个b淋巴细胞以及多个自然杀手(natural killer，nk)细胞。
19、根据本专利技术的一些实施例的一方面，提供了一种制备用于移植入一受试者的一脐带血单位的方法，所述方法包括：
20、(a)将适合用于移植入所述受试者的一单一的解冻的脐带血单位分离为：(i)一第一选择的血细胞部分，包括多个cd133+/cd34+选择的细胞，以及(ii)一第二未选择的血细胞部分，包括多个cd133/cd34阴性细胞；
21、(b)在允许细胞增殖的多个条件下，离体培养包括多个cd133+/cd34+选择的细胞的所述第一血细胞部分，所述多个条件包括提供营养素、血清与多个细胞因子以及烟酰胺，所述多个细胞因子包含干细胞因子、血小板生成素、flt3配体以及il-6中的每一个，所述烟酰胺的量在1.0毫摩尔至10毫摩尔之间。
22、根据本专利技术的一些实施例，所述第一选择的cd133+/cd34+血细胞部分(a)(i)是根据上述的方法选择的适合用于离体扩增以及移植入所述受试者的一cd133+/cd34+脐带血部分。
23、根据本专利技术的一些实施例，所述方法更包括：排除在所述离体扩增的第7天或第14天具有大于3.0内毒素单位/毫升的内毒素、及/或细菌、酵母菌或霉菌生长的多个单位。
24、根据本专利技术的一些实施例，适合用于移植的所述单一的脐带血单位的特征为以下多个冷冻保存前(pre-cryopreservation)的参数：
25、(i)约8×106至约15×106个cd34+细胞总数；
26、(ii)在6个i类hla(hla-a以及hla-b，低分辨率)以及ii类hla(hla-drb1，高分辨率)位点中至少4个与所述受试者有hla匹配；
27、(iii)约1.8×109至约3.0×109个冷冻保存前的有核细胞总数；以及
28、(iv)每公斤受试者体重具有约1.5×107至约3.0×107个冷冻保存前的有核细胞总数。
29、根据本专利技术的一些实施例，所述血清包括10％胎牛血清。
30、根据本专利技术的一些实施例，所述多个细胞因子包括干细胞因子、血小板生成素、flt3配体以及il-6中的每一个，且分别为50奈克。
31、根据本专利技术的一些实施例，所述烟酰胺以2.5毫摩尔(mm)提供。
32、根据本专利技术的一些实施例，所述离体培养进行18至25天。
33、根据本专利技术的一些实施例，所述方法更包括：在培养19至23天后，收获离体培养的所述第一选择的cd133+/cd34+部分。
34、根据本专利技术的一些实施例，所述方法更包括：在培养21天后，收获离体培养的所述第一选择的cd133+/cd34+部分。
35、根据本专利技术的一些实施例，所述方法更包括：分别地冷冻保存包括多个cd133+/cd34+选择的细胞的离体培养的所述第一选择的血细胞部分以及包括多个cd133/cd34阴性细胞的所述第二未选择的血细胞部分。
36、根据本专利技术的一些实施例的一方面，提供了一种选择用于移植入一受试者的包括多个cd133+/cd34+选择的脐带血细胞的多个离体培养的脐带血细胞部分的方法，所述方法包括：
37、(a)在离体扩增后，在所述离体培养的脐带血部分确定以下多个参数：
38、(i)约8×108至约15×108个活细胞总数；
39、(ii)约70至85％的所述多个细胞的存活率；
40、(iii)约7至15％的多个cd34+细胞；
41、(iv)约5.6×107至约5×108个cd34+细胞总数；
42、(v)约2.4×107至约2×108个cd133+细胞总数；
43、(vi)约8×105至约25×105个cd133+/cd38-细胞数；
44、(vii)约8×107至约15×108个cd14+细胞总数；
45、(viii)约2×108至约2×109个cd15+细胞总数；
46、(ix)约8×107至约8×109个cd11b+细胞总数；
47、(x)约3.2×107至约3×108个cd1(a+c)+细胞总数；
48、(xi)没有培养的支原体、或细菌、酵母菌或霉菌本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种适合移植的脐带血部分的试剂盒，其特征在于：包含：用于移植入受试者的培养的脐带血部分和未培养的脐带血部分，其中所述培养的脐带血部分和所述未培养的脐带血部分通过包含以下步骤的方法制备：
2.如权利要求1所述的适合移植的脐带血部分的试剂盒，其特征在于：培养的包含CD133+/CD34+选择的细胞的所述第一选择的血细胞部分和包含CD133-/CD34-细胞的所述第二未选择的血细胞部分分别冷冻保存。
3.如权利要求1所述的适合移植的脐带血部分的试剂盒，其特征在于：适合移植的解冻的所述脐带血单位是根据以下所有冷冻保存前参数被选择的：
4.如权利要求1所述的适合移植的脐带血部分的试剂盒，其特征在于：所述烟酰胺的浓度为约2.5毫摩尔，并且所述干细胞因子、所述血小板生成素、所述FLt3配体以及所述IL-6各自的含量为50纳克。
5.如权利要求1所述的适合移植的脐带血部分的试剂盒，其特征在于：离体培养进行18天至25天，并且任选地进行19天至23天。
6.如权利要求1所述的适合移植的脐带血部分的试剂盒，其特征在于：培养的脐带血部分表
7.如权利要求1所述的适合移植的脐带血部分的试剂盒，其特征在于：未培养的脐带血部分表现出以下参数：
8.一种如权利要求1至7中任一项所述的适合移植的脐带血部分的试剂盒的培养的脐带血部分以及未培养的脐带血部分在制备用于治疗受试者的血液恶性肿瘤的药物的应用。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于：所述血液恶性肿瘤选自于由慢性骨髓性白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性骨髓性白血病以及骨髓增生异常综合症所组成的群组。
10.如权利要求8所述的应用，其特征在于：所述受试者已经接受了选自于由以下各项所组成的群组的至少一种治疗：
11.如权利要求8所述的应用，其特征在于：所述培养的脐带血部分以及所述未培养的脐带血部分与血液疾病的额外治疗一起共同给予；并且任选地，其中所述额外治疗选自于由免疫抑制治疗、化疗以及放射治疗所组成的群组。
...【技术特征摘要】
1.一种适合移植的脐带血部分的试剂盒，其特征在于：包含：用于移植入受试者的培养的脐带血部分和未培养的脐带血部分，其中所述培养的脐带血部分和所述未培养的脐带血部分通过包含以下步骤的方法制备：
2.如权利要求1所述的适合移植的脐带血部分的试剂盒，其特征在于：培养的包含cd133+/cd34+选择的细胞的所述第一选择的血细胞部分和包含cd133-/cd34-细胞的所述第二未选择的血细胞部分分别冷冻保存。
3.如权利要求1所述的适合移植的脐带血部分的试剂盒，其特征在于：适合移植的解冻的所述脐带血单位是根据以下所有冷冻保存前参数被选择的：
4.如权利要求1所述的适合移植的脐带血部分的试剂盒，其特征在于：所述烟酰胺的浓度为约2.5毫摩尔，并且所述干细胞因子、所述血小板生成素、所述flt3配体以及所述il-6各自的含量为50纳克。
5.如权利要求1所述的适合移植的脐带血部分的试剂盒，其特征在于：离体培养进行18天至25天，并且任选地进行19天至23天。...
【专利技术属性】
技术研发人员：托尼·佩莱德，多丽特·哈拉蒂，埃夫拉特·兰道，
申请(专利权)人：盖米达细胞有限公司，
类型：发明
国别省市：
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