【技术实现步骤摘要】
一种RNA的制备方法、合成蛋白质的方法以及转录反应液
[0001]本申请涉及基因工程
,具体而言,涉及一种RNA的制备方法、合成蛋白质的方法以及转录反应液。
技术介绍
[0002]目前,体外转录(IVT)反应后的体系中含有一定的dsRNA,dsRNA会激发机体自身的防御机制、引起炎症反应以及降低ssRNA作为药物的有效性等。IVT反应后的体系中dsRNA的去除通常是通过LiCl沉淀或醇沉、离子交换色谱柱、硅胶柱等方法提纯,但是上述方法普遍存在纯化后的ssRNA产率较低、ssRNA易被降解以及纯化步骤复杂等缺点。
技术实现思路
[0003]本申请实施例的目的在于提供一种RNA的制备方法、合成蛋白质的方法以及转录反应液,其旨在改善现有的体外转录反应后的体系中由于含有一定的dsRNA而导致的ssRNA的纯度不高的问题。
[0004]本申请第一方面提供一种RNA的制备方法,RNA的制备方法包括:将原料混合后进行转录反应。
[0005]原料包括DNA模板、RNA聚合酶、NTPs、含有镁离子的缓冲液以及核酸变性剂;核酸变性剂包括有机溶剂、糖、糖醇、生物碱以及蛋白变性剂中的至少一种。
[0006]本申请通过在体外转录反应前的体系中加入核酸变性剂,从转录制备RNA合成端,有效抑制dsRNA的生成,显著提高体外转录后的体系中ssRNA的纯度,从而提高ssRNA的体内稳定性、翻译效率以及降低ssRNA的免疫原性,操作简单。
[0007]本申请的第二方面提供一种合成蛋白质的方法,合成蛋 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种RNA的制备方法,其特征在于,包括:将原料混合后进行转录反应;所述原料包括DNA模板、RNA聚合酶、NTPs、含有镁离子的缓冲液以及核酸变性剂;所述核酸变性剂包括有机溶剂、糖、糖醇、生物碱以及蛋白变性剂中的至少一种。2.根据权利要求1所述的RNA的制备方法,其特征在于,所述有机溶剂包括甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、戊醇、聚乙二醇、甲酰胺、1,2,3,4,5
‑
戊五醇、1,2,3,4,5,6
‑
己六醇、丙
‑2‑
烯
‑1‑
醇、3,7
‑
二甲基庚
‑
2,6
‑
二烯
‑1‑
醇、2
‑
丙炔
‑1‑
醇、环己烷
‑
1,2,3,4,5,6
‑
六醇、2
‑
(2
‑
丙基)
‑5‑
甲基
‑
环己烷
‑1‑
醇、二甲基亚砜、甲基仲丁基亚砜、正丙基亚砜、正丁基亚砜、四亚甲基亚砜、三乙醇胺以及乙二醇中的至少一种;所述糖包括海藻糖以及甘露糖中的至少一种;所述糖醇包括山梨醇以及木糖醇中的至少一种;所述生物碱包括甜菜碱;所述蛋白变性剂包括尿素、盐酸胍、异硫氰酸胍、苯酚、亚硫酸盐以及硫代硫酸盐中的至少一种。3.根据权利要求2所述的RNA的制备方法,其特征在于,所述有机溶剂包括乙醇、甲酰胺以及二甲基亚砜中的至少一种;可选地,所述有机溶剂包括乙醇和甲酰胺。4.根据权利要求1所述的RNA的制备方法,其特征在于,所述核酸变性剂包括海藻糖、甜菜碱、尿素、异硫氰酸胍、盐酸胍、山梨醇、木糖醇以及甘露糖中的至少一种;可选地,所述核酸变性剂包括海藻糖、甜菜碱、尿素以及异硫氰酸胍中的至少一种;可选地,所述核酸变性剂包括海藻糖和尿素。5.根据权利要求1所述的RNA的制备方法,其特征在于,所述核酸变性剂包括终摩尔浓度为1.0mM
‑
10.0M的海藻糖、终摩尔浓度为1.0mM
‑
10.0M的甜菜碱、终摩尔浓度为1.0mM
‑
10.0M的尿素、终摩尔浓度为1.0mM
‑
10.0M的异硫氰酸胍、终摩尔浓度为1.0mM
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10.0M的盐酸胍、终摩尔浓度为1.0mM
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10.0M的山梨醇、终摩尔浓度为1.0mM
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10.0M的木糖醇和终摩尔浓度为1.0mM
‑
10.0M的甘露糖中的至少一种;其中,所述终摩尔浓度为溶质的物质的量与所述原料的总体积之比;可选地,所述核酸变性剂包括终摩尔浓度为2.5mM
‑
4.0M的海藻糖、终摩尔浓度为2.5mM
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4.0M的甜菜碱、终摩尔浓度为2.5mM
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4.0M的尿素、终摩尔浓度为2.5mM
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4.0M的异硫氰酸胍、终摩尔浓度为2.5mM
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4.0M的盐酸胍、终摩尔浓度为2.5mM
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4.0M的山梨醇、终摩尔浓度为2.5mM
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4.0M的木糖醇和终摩尔浓度为2.5mM
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4.0M的甘露糖中的至少一种;可选地,所述核酸变性剂包括终摩尔浓度为0.5M
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1.2M的海藻糖、终摩尔浓度为0.5M
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1.2M的甜菜碱、终摩尔浓度为0.5M
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1.2M的尿素、终摩尔浓度为0.5M
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1.2M的异硫氰酸胍、终摩尔浓度为0.5M
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1.2M的盐酸胍、终摩尔浓度为0.5M
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1.2M的山梨醇、终摩尔浓度为0.5M
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1.2M的木糖醇和终摩尔浓度为0.5M
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1.2M的甘露糖中的至少一种;可选地,所述核酸变性剂包括终摩尔浓度为5.0mM
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0.5M海藻糖、终摩尔浓度为5.0mM
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0.5M异硫氰酸胍、终摩尔浓度为5.0mM
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0.5M山梨醇以及终摩尔浓度为5.0mM
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0.5M木糖醇中的至少一种;可选地,所述核酸变性剂包括终摩尔浓度为2.5mM
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【专利技术属性】
技术研发人员:何苗,魏民志,
申请(专利权)人:上海兆维生物工程有限公司,
类型:发明
国别省市:
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