一种核苷二聚体亚膦酰胺的合成方法技术

本发明专利技术公开了一种核苷二聚体亚膦酰胺的合成方法。使用的中间体，即结构如式M

【技术实现步骤摘要】
一种核苷二聚体亚膦酰胺的合成方法


[0001]本专利技术属于核苷酸的化学合成
，具体涉及一种核苷二聚体亚膦酰胺的合成方法。

技术介绍

[0002]寡核苷酸药物已成为前景广阔的新型治疗方法，越来越多国家已经批准了多种寡核苷酸药物来治疗遗传疾病。在医疗领域，随着寡核苷酸药物疗法的投放逐渐增多，寡核苷酸的生产工艺正变得至关重要，从单体结构单元的可获得性、不同溶剂的选用(废物处理成本)、产品大批量生产、高纯度和可扩展性等方面提出了更高要求。对寡核苷酸的合成需求量已创历史最高水平，其需求将会持续增长。寡核苷酸可以作为潜在的反义和抗原性药物，此外，基于寡核苷酸的芯片技术、诊断工具、纳米科技和生物学应用中的应用也方兴未艾。为了这些目的，亟需拓展有效和多样的寡核苷酸合成方法，对于寡核苷酸合成原料新类型的开发更为紧迫。
[0003]本领域迫切需要提供一种合成步骤简洁、反应条件温和、且收率较高的合成核苷二聚体亚膦酰胺的方法，成为本专利技术需要解决的技术问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在提供一种操作简单且成本低廉的基于一种修饰性核苷单体和另一种修饰性核苷单体亚膦酰胺为原料的偶联/硫化/脱保护“一锅法”的合成方法。
[0005]在本专利技术的第一方面，提供一种结构如式M
‑Ⅴ
所示的化合物的制备方法，所述方法为一锅法，包括步骤：
[0006](i)使结构如式M
‑Ⅰ
所示的化合物与结构如式M
‑Ⅱ
所示的化合物混合，在活化剂作用下反应得到含结构如式M
‑Ⅲ
所示的化合物的反应液；
[0007](ii)使含结构如式M
‑Ⅲ
所示的化合物的反应液在硫化剂存在下反应得到含结构如式M
‑Ⅳ
所示的化合物的反应液；和
[0008](iii)使含结构如式M
‑Ⅳ
所示的化合物的反应液经脱硅烷保护基反应，得到结构如式M
‑Ⅴ
所示的化合物。
[0009]在另一实施方式中，步骤(i)中所述活化剂选自四氮唑、4,5
‑
二氰基咪唑、三氟乙酸吡啶或5
‑
乙硫基四唑。
[0010]在另一实施方式中，步骤(i)的反应介质选自下述的一种或两种以上：乙二醇二甲醚、二氯甲烷、1,4
‑
二氧六环、四氢呋喃、2
‑
甲基四氢呋喃、二甲基亚砜、N,N
‑
二甲基甲酰胺、N,N
‑
二甲基乙酰胺、N
‑
甲基吡咯烷酮、乙腈和吡啶。
[0011]在另一实施方式中，步骤(i)所述反应的温度为10
‑
80℃；优选20
‑
25℃。
[0012]在另一实施方式中，步骤(ii)中所述硫化剂选自N,N
‑
二甲基
‑
N'
‑
(3
‑
硫代
‑
3H
‑
1,2,4
‑
二噻唑
‑5‑
基)甲脒、3
‑
氨基
‑
1,2,4
‑
二噻
‑5‑
唑硫酮或苯乙酰二硫化物。
[0013]在另一实施方式中，步骤(ii)所述反应的温度为10
‑
80℃。
[0014]在另一实施方式中，步骤(ii)所述反应时间为0.5
‑
8.0小时。
[0015]在另一实施方式中，步骤(iii)使含结构如式M
‑Ⅳ
所示的化合物的反应液与氟试剂反应以脱硅烷保护；所述氟试剂选自四丁基氟化胺、氟化氢吡啶盐或氟化氢三乙胺盐。
[0016]在另一实施方式中，所述氟试剂的用量为2
‑
6当量。
[0017]在另一实施方式中，所述脱硅烷保护基反应后经水洗、柱层析除去氟试剂和杂质。
[0018]在本专利技术的第二方面，提供一种结构如式Ⅰ所示的化合物的制备方法，所述方法包括步骤：使结构如式M
‑Ⅴ
所示的化合物和双(二异丙基氨基)(2
‑
氰基乙氧基)膦混合，反应得到结构如式Ⅰ所示的化合物。
[0019]在另一实施方式中，所述结构如式M
‑Ⅴ
所示的化合物和1.0
‑
4.0当量的双(二异丙基氨基)(2
‑
氰基乙氧基)膦混合。
[0020]在本专利技术的第三方面，提供一种结构如式Ⅰ所示的化合物的制备方法，所述方法包括步骤：
[0021](1)使结构如式M
‑Ⅰ
所示的化合物与结构如式M
‑Ⅱ
所示的化合物混合，在活化剂作用下反应得到含结构如式M
‑Ⅲ
所示的化合物的反应液；
[0022](2)使含结构如式M
‑Ⅲ
所示的化合物的反应液在硫化剂存在下反应得到含结构如式M
‑Ⅳ
所示的化合物的反应液；
[0023](3)使含结构如式M
‑Ⅳ
所示的化合物的反应液经脱硅烷保护基反应，得到结构如式M
‑Ⅴ
所示的化合物；和
[0024](4)使结构如式M
‑Ⅴ
所示的化合物和双(二异丙基氨基)(2
‑
氰基乙氧基)膦混合，反应得到结构如式Ⅰ所示的化合物。
[0025]在另一实施方式中，所述步骤(1)
‑
(3)通过一锅法进行。
[0026]据此，本专利技术提供了一种步骤简洁、反应条件温和、且收率较高的合成核苷二聚体亚膦酰胺的方法
具体实施方式
[0027]专利技术人经过广泛而深入的研究，开发了一种[5'
‑
O
‑
二甲氧基三苯甲基
‑
2'
‑
R1‑
B1碱基](腈基乙氧基硫代膦)[2'
‑
R2‑
B2碱基]‑
亚磷酰胺(Ⅰ)的新型合成方法，经过简便的偶联反应、硫化反应、脱硅基化反应，合成出稳定的[5'
‑
O
‑
二甲氧基三苯甲基
‑
2'
‑
R1‑
B1碱基](腈基乙氧基硫代膦)[2'
‑
R2‑
B2碱基](M
‑Ⅴ
)。通过式M
‑Ⅴ
化合物与双(二异丙基氨基)(2
‑
氰基乙氧基)膦进行膦酰化反应构建P
‑
O键，较高收率、高选择性地生成目标产物核苷二聚体亚膦酰胺。在此基础上，完成了本专利技术。
[0028]本专利技术涉及的主要化合物如下表所列：
[0029][0030][0031][0032][0033][0034][0035][0036][0037]在本文中，“结构如式Ⅰ所示的化合物”、“式Ⅰ化合物”或
“Ⅰ”本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种结构如式M
‑Ⅴ
所示的化合物的制备方法，其特征在于，所述方法为一锅法，包括步骤：(i)使结构如式M
‑Ⅰ
所示的化合物与结构如式M
‑Ⅱ
所示的化合物混合，在活化剂作用下反应得到含结构如式M
‑Ⅲ
所示的化合物的反应液；(ii)使含结构如式M
‑Ⅲ
所示的化合物的反应液在硫化剂存在下反应得到含结构如式M
‑Ⅳ
所示的化合物的反应液；(iii)使含结构如式M
‑Ⅳ
所示的化合物的反应液经脱硅烷保护基反应，得到结构如式M
‑Ⅴ
所示的化合物。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(i)中所述活化剂选自四氮唑、4,5
‑
二氰基咪唑、三氟乙酸吡啶或5
‑
乙硫基四唑。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(i)的反应介质选自下述的一种或两种以上：乙二醇二甲醚、二氯甲烷、1,4
‑
二氧六环、四氢呋喃、2
‑
甲基四氢呋喃、二甲基亚砜、N,N
‑
二甲基甲酰胺、N,N
‑
二甲基乙酰胺、N
‑
甲基吡咯烷酮、乙腈和吡啶。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(i)所述反应的温度为10
‑
80℃；优选20
‑
25℃。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(ii)中所述硫化剂选自N,N
‑
二甲基
‑
N'
‑
(3
‑
硫代
‑
3H
‑
1,2,4
‑
二噻唑
‑5‑
基)甲脒、3
‑
氨基
‑
1,2,4
‑
二噻
‑5‑
唑硫酮或苯乙酰二硫化物。6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(ii)所...

【专利技术属性】
技术研发人员：张定远，赵谦益，刘胜韬，高攀攀，姚峰，
申请(专利权)人：上海兆维生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：