亚磷酰胺化的核苷衍生物及其合成方法、应用和试剂盒技术

一种亚磷酰胺化的核苷衍生物及其合成方法、应用和试剂盒，属于寡聚核苷酸领域。合成方法包括：对起始物的羟基保护，碱基上的N6位氨基进行保护，然后脱除3

【技术实现步骤摘要】
亚磷酰胺化的核苷衍生物及其合成方法、应用和试剂盒


[0001]本申请涉及寡核苷酸领域，具体而言，涉及一种亚磷酰胺化的核苷衍生物及其合成方法、应用和试剂盒。

技术介绍

[0002]迄今为止，对于癌症、病毒性感染等疾病，临床上仍缺少理想的特效药物。可喜的是，随着人类及重要模式生物基因组测序的完成，以及功能基因组学及蛋白质组学研究的深入，与疾病相关的分子靶标不断被发现和认识，为基因治疗提供了前提。
[0003]在过去的几十年里，人工合成的寡核苷酸已经广泛应用于靶向基因治疗的研究。寡聚核苷酸主要包括反义寡核苷酸(Antisense oligonucleotides,ASODN)、小干扰RNA(Small interference RNA,siRNA)、转录因子诱饵(Decoy)、核酶(Ribozyme)、脱氧核酶(DNAzyme)、反基因(Antigene)、CpG寡核苷酸和核酸适配体(Aptamer)等。其中，ASODN和siRNA是最常用的基因调控工具，获得广泛应用，并已被开发为基因治疗药物。
[0004]目前，寡核苷酸主要采用化学本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种亚磷酰胺化的核苷衍生物的合成方法，其特征在于，以腺嘌呤2
′‑
脱氧核苷为起始物，经过基团保护、脱保护以及修饰目标基团而实现；所述合成方法包括：步骤1：对所述起始物的3
′
和5
′
羟基保护，再对碱基上的N6位氨基进行保护，然后脱除3
′
和5
′
羟基的保护基团，获得第一中间体；步骤2：依次对所述第一中间体的5
′
和3
′
羟基进行保护，获得第二中间体；步骤3：脱除所述第二中间体的5
′
羟基的保护基团，并通过甲氧基异丙基对5
′
羟基进行保护，获得第三中间体；步骤4：依次脱除所述第三中间体中的3
′
羟基的保护基团和碱基上的N6位氨基的保护基团，获得第四中间体；步骤5：依次对所述第四中间体的碱基上的N6位氨基进行亚胺化保护，3
′
羟基进行亚磷酰胺化保护，获得所述亚磷酰胺化的核苷衍生物。2.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，在步骤5中，对所述第四中间体的碱基上的N6位氨基进行亚胺化保护采用的保护试剂为缩醛，可选地，缩醛的用量为第四中间体摩尔量的2倍至10倍；或者，在步骤3中，通过甲氧基异丙基对3
′
羟基进行保护是通过酸催化二甲基丙基与脱除3
′
羟基的保护基团的第二中间体反应而实现；可选地，所述酸包括硫酸、三氟甲磺酸、三氟甲磺酸银或三氟甲磺酸钪，且酸与第二中间体的摩尔比为1:100至10:100。3.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，在步骤1中，3
′
和5
′
羟基通过硅烷化试剂进行保护；可选地，所述硅烷化试剂包括TMS
‑
Cl，TBDMS
‑
Cl，TBDPS
‑
Cl和TIPS
‑
Cl2中的任意一种或多种组合，且硅烷化试剂是在催化剂的存在下进行反应的，其中的催化剂包括吡啶，二氯甲烷和三乙胺的混合物，或乙腈和三乙胺的混合物，且催化剂和所述起始物的液料比为4至10；可选地，脱除由所述硅烷化试剂形成的保护基团的脱保护试剂包括四丁基氟化铵，三乙胺三氢氟酸盐，或氟化氢吡啶溶液，且起始物与脱保护试剂的摩尔比为1:2.0至1:5.0；或者，在步骤1中，碱基上的N6位氨基进行保护的基团来自于酰氯，所述酰氯包括AcCl，BzCl，PacCl或FmocCl，且酰氯与所述起始物的摩尔比为1:1.05至1:1.50；可选...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晨，李文强，陈哲贤，刘建新，黄银军，杨阳，姚峰，
申请(专利权)人：上海兆维生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：