一种转录反应液、锁核酸修饰的RNA的制备方法以及突变的T7RNA聚合酶的应用技术

本申请涉及基因工程技术领域，具体而言，涉及一种转录反应液、锁核酸修饰的RNA的制备方法以及突变的T7RNA聚合酶的应用。用于制备锁核酸修饰的RNA的转录反应液，包括DNA模板、突变的T7RNA聚合酶、LNA

【技术实现步骤摘要】
一种转录反应液、锁核酸修饰的RNA的制备方法以及突变的T7RNA聚合酶的应用


[0001]本申请涉及基因工程
，具体而言，涉及一种转录反应液、锁核酸修饰的RNA的制备方法以及突变的T7RNA聚合酶的应用。

技术介绍

[0002]锁核酸(Locked Nucleic Acid，LNA)是一种经过修饰的核酸衍生物，其结构中核糖上的2'
‑
O
‑
和4'
‑
C
‑
位之间通过亚甲基基团桥接，形成“锁定”结构，这种独特的“锁定”结构降低了核糖结构的柔韧性，增加了磷酸盐骨架局部结构的稳定性。
[0003]RNA常作为治疗性药物来调控和限制非正常基因的mRNA的表达，例如，反义RNA(antisense RNA)、核糖酶(ribozymes)、小干扰RNA(siRNA)、微小核糖核酸(microRNA)以及核酸适配体(aptamers)等，经过锁核酸修饰后，RNA药物在体内的稳定性大大提高。
[0004]但是，目前锁核酸修饰的RNA产率较低，导致锁核酸修饰的RNA的制本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于制备锁核酸修饰的RNA的转录反应液，其特征在于，包括DNA模板、突变的T7RNA聚合酶、LNA
‑
NTPs以及缓冲液；其中，所述突变的T7RNA聚合酶包括氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的T7RNA聚合酶、氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的T7RNA聚合酶、氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的T7RNA聚合酶、氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示的T7RNA聚合酶、氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示的T7RNA聚合酶、氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示的T7RNA聚合酶以及氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示的T7RNA聚合酶中的至少一种。2.根据权利要求1所述的用于制备锁核酸的转录反应液，其特征在于，所述缓冲液包括生物缓冲剂、激活剂、多胺、去污剂以及还原剂。3.根据权利要求2所述的转录反应液，其特征在于，所述生物缓冲剂选自Tris、HEPES、MOPS或PIPES；所述生物缓冲剂在所述转录反应液中的终摩尔浓度为25
‑
35mM；可选地，所述缓冲液的pH为6.5
‑
7.5。4.根据权利要求2所述的转录反应液，其特征在于，所述激活剂选自镁离子或钠离子；所述激活剂在所述转录反应液中的终摩尔浓度为4.5
‑
5.5mM。5.根据权利要求2所述的转录反应液，其特征在于，所述多胺选自亚精胺、腐胺或精胺；所述多胺在所述转录反应液中的终摩尔浓度为0.8
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1.2mM。6.根据权利要求2所述的转录反应液，其特征在于，所述去污剂选自Triton X
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100；所述去污剂在所述转录反应液中的质量分数为0.01
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：钱剩金，陈丽，杨侠斐，
申请(专利权)人：上海兆维生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：