一种TBC1D8B基因敲除小鼠动物模型的构建方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种TBC1D8B基因敲除小鼠动物模型的构建方法及其应用，属于生命科学和生物技术领域。TBC1D8B基因的特异性靶位点sgRNA，包括核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的sgRNA3和核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示的sgRNA14。本发明专利技术将合成的sgRNA和Cas9 mRNA以及打靶载体导入小鼠受精卵中，培育，筛选及交配，获得TBC1D8B基因敲除的小鼠动物模型。获得TBC1D8B基因敲除的小鼠动物模型。

【技术实现步骤摘要】
建了TBC1D8B基因敲除小鼠动物模型，为后续筛查防治肾病综合征和/或研究肾病综 合征发生发展病程提供动物材料。
[0007]本专利技术提供了一种TBC1D8B基因的特异性靶位点sgRNA，包括sgRNA3和 sgRNA14；
[0008]所述sgRNA3的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；
[0009]所述sgRNA14的核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示。
[0010]本专利技术提供了一种TBC1D8B基因敲除小鼠动物模型的构建方法，包括以下步骤：
[0011]1)合成有活性的所述sgRNA和Cas9mRNA；
[0012]2)构建TBC1D8B基因敲除的打靶载体；
[0013]3)将步骤1)中所述sgRNA和Cas9mRNA以及步骤2)中所述打靶载体导入小 鼠受精卵中，培育并传代，获得TBC1D8B基因敲除的小鼠动物模型；
[0014]步骤1)和步骤2)之间没有时间顺序的限制。
[0015]优选的，步骤3)中所述sgRNA、Cas9mRNA和打靶载体的拷贝数比为(1～1.2)： (2～3)：(1～本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种TBC1D8B基因的特异性靶位点sgRNA，其特征在于，包括sgRNA3和sgRNA14；所述sgRNA3的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；所述sgRNA14的核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示。2.一种TBC1D8B基因敲除小鼠动物模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1)合成有活性的权利要求1所述sgRNA和Cas9 mRNA；2)构建TBC1D8B基因敲除的打靶载体；3)将步骤1)中所述sgRNA和Cas9 mRNA以及步骤2)中所述打靶载体导入小鼠受精卵中，培育并传代，获得TBC1D8B基因敲除的小鼠动物模型；步骤1)和步骤2)之间没有时间顺序的限制。3.根据权利要求2所述构建方法，其特征在于，步骤3)中所述sgRNA、Cas9 mRNA和打靶载体的拷贝数比为(1～1.2)：(2～3)：(1～1.2)；所述sgRNA中sgRNA3和sgRNA14的拷贝数比为1：(1～1.2)。4.根据权利要求2所述构建方法，其特征在于，步骤2)中构建TBC1D8B基因敲除的打靶载体的方法，包括以下步骤：将TBC1D8B基因上游同源臂片段LR、TBC1D8B基因下游同源臂片段RR和点突变的序列片段A通过克隆到表达载体上，构建获得打靶载体。5.根据权利要求4所述构建方法，其特征在于，TBC1D8B基因上游同源臂片段LR的扩增引物包括EGE
‑
YMX
‑
004
‑
A
‑
LR
‑
F和EGE
‑
YMX
‑
004
‑
A
‑
LR
‑
R；所述EGE
‑
YMX
‑
004
‑
A
‑
LR
‑
F的核苷酸序列如SEQ ID NO:17所示；所述EGE
‑
YMX
‑
004
‑
A
‑
LR
‑
R的核苷酸序列如SEQ ID NO:18所示。6.根据权利要求4所述构建方法，其特征在于，TBC1D8B基因下游同源臂片段RR包括EGE
‑
YMX
...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵卉，张亚平，李闯，陈栋梁，
申请(专利权)人：云南大学，
类型：发明
国别省市：