巨核细胞条件性敲除TYMP基因小鼠模型的构建方法及其应用技术

本发明专利技术公开了巨核细胞条件性敲除TYMP基因小鼠模型的构建方法及其应用，涉及生物技术领域。巨核细胞条件性敲除TYMP基因小鼠模型的构建方法为基于CRISPR/Cas9系统特异性敲除巨噬细胞TYMP基因，敲除位点为TYMP基因的第2外显子序列上游和第4外显子序列下游。通过该方法构建的巨核细胞条件性敲除TYMP基因小鼠模型能够存活五个月以上，在筛选抑制血小板活化相关药物和研究血栓和炎症相关疾病的分子机制方面具有很好的应用前景。制方面具有很好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
blot。
[0015]在本专利技术的一些实施方式中，筛选所述小鼠的方法包括PCR方法，所用的引物包括：F1/R1、F2/R2、F3/R3、F4/R4和F5/R5；
[0016]其中，F1序列为：5
’‑
GTAACTTACCCCACCCCAGTTCT
‑3’
(SEQ ID NO.3)；
[0017]R1序列为：5
’‑
GTGGATTCGGACCAGTCTGA
‑3’
(SEQ ID NO.4)；
[0018]F2序列为：5
’‑
TTACAGACTGGAGCAATAACTTC
‑3’
(SEQ ID NO.5)；
[0019]R2序列为：5
’‑
CTGAGCGCAGGGCCGTCTAGGTG
‑3’
(SEQ ID NO.6)；
[0020]F3序列为：5
’‑
GATTTGTGAGGTCGAGAAATGGAA
‑3’
(SEQ ID NO.7)；/>[0021]R3本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.巨核细胞条件性敲除TYMP基因小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：设计并体外转录gRNA，同时对TYMP基因进行flox修饰，构建Donor DNA；S2：将gRNA、Donor DNA和Cas9蛋白共同注射入小鼠受精卵后，将受精卵植入假孕母鼠子宫内，生产得到的F0代小鼠与野生型小鼠交配，得到的F1代条件性敲除TYMP基因的杂合子小鼠；S3：然后将F1代条件性敲除TYMP基因的杂合子小鼠相互交配，得到F2代条件性敲除TYMP基因的纯合子小鼠；S4：然后将F2代条件性敲除TYMP基因的纯合子小鼠与巨核细胞特异表达Cre的PF4
‑
Cre鼠交配，得到F3代巨核细胞条件性敲除TYMP基因杂合子小鼠；S5：然后将F3代巨核细胞条件性敲除TYMP基因小鼠相互交配，得到F4代巨核细胞条件性敲除TYMP基因纯合子小鼠。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤S1中，对TYMP基因进行flox修饰具体为在TYMP基因的序列两端插入LoxP序列。3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，步骤S1中，对TYMP基因进行flox修饰具体为在TYMP基因的第2
‑
4外显子序列两端插入LoxP序列。4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，步骤S1中，所述gRNA包括gRNA1和gRNA2；其中，所述gRNA1序列如SEQ ID NO.l所示，所述gRNA2序列如SEQ ID NO.2所示。5.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，步骤S1中，所述Donor DNA的序列核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示。6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，筛选所述小...

【专利技术属性】
技术研发人员：接力刚，杜红延，张玉萍，朱小彤，刘丹丹，
申请(专利权)人：南方医科大学，
类型：发明
国别省市：