通过Cas9-crRNA复合物的RNA指导的DNA裂解制造技术

嗜热链球菌CRISPR3/Cas系统的Cas9

【技术实现步骤摘要】
通过Cas9
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crRNA复合物的RNA指导的DNA裂解
[0001]本申请是2013年3月20日提交的同名专利技术专利申请201380023255.3的分案申请。
[0002]本申请要求同时申请的美国申请序列号61/613,373(提交于2012年3月20日)及61/625,420(提交于2012年4月17日)的优先权，二者都明确地以其全文并入本文作为参考。
[0003]摘要
[0004]CRISPR/Cas系统为细菌和古细菌提供针对病毒和质粒的适应性免疫。预先装载有小干扰crRNA的核糖核蛋白(RNP)复合物执行对入侵核酸的沉默，其中crRNA引导对外源核酸的靶向和降解。在本文中，我们描述了Cas9
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crRNA复合物的分离，并证明其在体外产生靶标DNA分子中特异性位点上的双链断裂，其中靶标DNA分子与crRNA序列互补并在匹配序列邻近具有短的原型间隔子序列毗邻基序(proto
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spacer adjacent motif，PAM)。我们表明，对DNA的裂解是由Cas9内部两个不同的活性位点(Ru本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于对靶标DNA分子进行位点特异性修饰的方法，所述方法包括在合适的条件下将靶标DNA分子和RNA导向的DNA核酸内切酶相接触，所述RNA导向的DNA核酸内切酶含有至少一个RNA序列以及RuvC活性位点基序和HNH活性位点基序中的至少一个；以使得靶标DNA分子在某个区域受到修饰，所述区域是由RNA序列与靶标DNA分子的互补结合所确定的。2.权利要求1的方法，其中位点特异性修饰在体内或在体外发生。3.权利要求1的方法，其中靶标DNA是双链或单链的。4.蛋白质
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RNA复合物，其包含a)与SEQ ID NO:1具有至少80％同一性的多肽，b)第一多核糖核苷酸crRNA，其包含3'区域和5'区域，其中3'区域包含CRISPR基因座中存在的至少22个核...

【专利技术属性】
技术研发人员：V，
申请(专利权)人：维尔纽斯大学，
类型：发明
国别省市：