本发明专利技术公开了一种特异性敲降TNF
【技术实现步骤摘要】
一种特异性敲降TNF
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α
基因表达的siRNA及其应用
[0001]本专利技术涉及一种特异性敲降TNF
‑
α基因表达的siRNA及其应用,属于生物医药
技术介绍
[0002]siRNA一般指长度19~25bp,碱基互补配对的双链RNA。目前,siRNA已经有上市的药物,还有更多siRNA药物正在临床试验阶段。血清中丰富的成分,尤其是酶的多样性,使 siRNA抗血清酶解的能力较弱,容易降解,这极大的影响siRNA药物在人体内发挥效应的时长。进入临床的siRNA药物中,siRNA序列通过化学修饰,来提高siRNA体内滞留时间。目前应用广泛的修饰方法有以下几种。一、磷酸骨架修饰。比较经典的是硫代修饰,即RNA 碱基连接的磷酸二酯键中,磷酸基团的氧原子被硫原子替换。正义链硫代修饰后能提高 siRNA稳定性,反义链硫代修饰后,可能会带来细胞毒性,且siRNA的敲降能力下降,这可能与反义链结合mRNA后,由于硫代修饰影响RNA链的二级结构,从而靶向mRNA能力下降有关。二、核糖修饰。常用的有RNA戊糖的2
’‑
OH替换成烷基,如2
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OMe、2
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O
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MOE; RNA戊糖的2
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OH替换成2
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F、2
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Ara
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F或者LNA。比如全球第一个通过FDA批准的siRNA 药物Patisiran,正义链所有尿嘧啶和胞嘧啶作2
’‑
OMe修饰,反义链的两个尿嘧啶作2
’‑
OMe 修饰,在不影响siRNA干扰水平的同时,提高了siRNA滞留人体的时间,避免被快速降解代谢。三、碱基修饰。因为siRNA与mRNA通过碱基之间的氢键互补配对,所以对碱基修饰,增强碱基与碱基之间的相互作用。常用的有m6A、m5C、s2U、Phpc修饰方法。四、其它。Alnylam公司治疗成人急性肝卟啉症的siRNA药物Givosiran,在正义链的3
’
端添加N 乙酰半乳糖胺(GalNAc),在提高siRNA稳定性的同时,提高靶向肝细胞的特异性。总的来说,siRNA化学修饰是RNAi进入临床的必然手段,序列的特异性造成电荷与二级结构的不同,每条siRNA都有自己最适合自己的修饰方法,因此并没有一个通用的化学修饰策略或者设计化学修饰的网站。目前siRNA的修饰方法需要科研人员自己设计及筛选。
[0003]TNF
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α(肿瘤坏死因子)由巨噬细胞、NK细胞及T淋巴细胞产生。由巨噬细胞产生的 TNF称作TNF
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α,由T淋巴细胞产生的称作TNF
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β。TNF
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α占总TNF的70%以上,因此一般说的TNF就指TNF
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α。人类TNF
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α位于染色体6p21.4,由3个内含子和4个外显子组成。 TNF
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α的受体是TNFR(TNF receptor),是一种三聚体结构。体内的成纤维细胞、表皮细胞、角质细胞、星形细胞等都表达TNF
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α。
[0004]TNF
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α的表达与癌症有密切关联,在体内、体外均能杀死某些肿瘤细胞,或抑制增殖作用。在乳腺癌中,TNF
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α对癌症分期和转移情况有指导意义。健康成年人的血清中几乎不表达TNF
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α,乳腺癌患者TNF
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α表达量较高,且随着癌症的恶化,TNF
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α的表达逐渐升高。发生乳腺癌细胞转移的患者TNF
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α表达比未转移患者要高;手术切除肿瘤后复发患者的TNF
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α表达也重新升高。TNF
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α的抑制剂英夫利昔单抗就有抑制肿瘤转移的效果。胃癌中,患者血液中TNF
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α表达过高,引起患者免疫系统失调,加重患者其它器官损伤,最终引起恶性转移而死亡。早期与晚期患者血清中TNF
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α表达较低,中期患者TNF
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α表达很高。肝癌中,原发性
肝癌是常见的恶性肿瘤之一。TNF
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α通过内质网应激信号通路诱导癌细胞增殖,肝癌患者的TNF
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α表达水平高于健康人。此外,TNF
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α在肝硬化、酒精性肝炎、病毒性肝炎、肝衰竭中表达量均高于健康人。TNF
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α在肿瘤中异常高表达提示了,抑制TNF
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α的表达可以抑制肿瘤发生的进程,缓解患者的病情。
[0005]TNF
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α的表达与自身免疫性疾病密切相关。系统性红斑狼疮中,患者血液中TNF
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α表达量较健康人高,但是抑制TNF
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α的表达,有可能抑制其免疫系统调节功能。用TNF
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α抑制剂英夫利昔单抗,患者的皮表损伤明显较少,狼疮活动指数(SLEDAI)明显下降。银屑病中,TNF
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α、IL
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12、IL
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17、IL
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23都异常表达。咪喹莫特药膏可以诱导小鼠银屑病样皮肤,实验表明TNF
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α基因敲除的小鼠在使用咪喹莫特后,皮损炎症情况轻于对照组。强直性脊柱炎中,TNF
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α不仅表达水平升高,而且促进骨赘的生成。TNF
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α的表达越高,脊柱活动越受限,可能是TNF
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α刺激滑膜成纤维细胞分化为成骨细胞,形成新的骨赘,导致脊柱活动受限。
[0006]综上,TNF
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α是治疗多种肿瘤疾病、自身免疫性疾病的潜在靶点,一对有效的siTNF
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α序列在小分子核酸药物中就显得尤为重要。更优选,一种具有高血清稳定性且敲降TNF
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α表达的siRNA在药物研发中更加宝贵。
技术实现思路
[0007]为解决上述技术问题,本专利技术通过筛选获得了一对特异性敲降TNF
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α表达及功能的siRNA(靶基因GeneBank:MH180383.1),用于体外、体内实验。本专利技术还通过化学修饰提供了一对具有高血清稳定性且敲降TNF
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α表达的siRNA,用于体外、体内实验,抑制TNF
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α的表达及功能。
[0008]本专利技术的第一个目的是提供一种特异性敲降TNF
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α基因表达的siRNA,所述的 siRNA的正义链的序列为5
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GCCUGUAGCCCAUGUUGUA TT
‑3’
,反义链的序列为3
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TT CGGACAUCGGGUACAACAU
‑5’
。
[0009]进一步地,所述的TNF
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α基因的本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种特异性敲降TNF
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α基因表达的siRNA,其特征在于,所述的siRNA的正义链的序列为5
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GCCUGUAGCCCAUGUUGUATT
‑3’
,反义链的序列为3
’‑
TTCGGACAUCGGGUACAACAU
‑5’
。2.根据权利要求1所述的siRNA,其特征在于,所述的TNF
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α基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。3.根据权利要求1所述的siRNA,其特征在于,所述的siRNA还包括对其正义链进行硫代修饰。4.根据权利要求3所述的siRNA,其特征在于,所述的硫代修饰是将其正义链从5
’
【专利技术属性】
技术研发人员:李萍,唐雪明,
申请(专利权)人:硅羿科技上海有限公司,
类型:发明
国别省市:
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