一个与栽培花生青枯病抗性紧密连锁的分子标记及应用制造技术

本发明专利技术涉及一个与栽培花生青枯病抗性紧密连锁的分子标记及应用。利用远杂9102和wt09

【技术实现步骤摘要】
一个与栽培花生青枯病抗性紧密连锁的分子标记及应用


[0001]本专利技术涉及一个与栽培花生青枯病抗性紧密连锁的分子标记及应用，属于分子生物学领域。

技术介绍

[0002]青枯病是由青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的细菌性病害，分布范围遍布全世界。青枯病是一种土传病害，病原体主要通过植物根部的伤口感染植物，并在植物维管束系统中迅速传播，导致地上部分缺水萎蔫。雷尔氏菌能侵染包括茄科、十字花科、禾本科等450多种植物，中国有90多种植物受到侵染，其中花生、番茄、烟草等作物在十多个省都发生病害。花生种植受青枯病影响的耕地达到80万公顷，占全国种植面积的近16％。一些病害区减产10～20％，极端情况下减产达到50
‑
100％。
[0003]种植抗病品种是青枯病防治最经济环保的方案。花生是自花授粉植物，所以在杂交育种中获得的抗性能够在子代稳定遗传，有利于抗性品种的推广和应用。目前适应不同生态区的抗病品种的育成和应用显著地克服了过去病区种植感病品种时的大面积枯死和绝收的问题，这些抗病品种仍然是中国青枯病疫区的主推品种，仍然具有很高抗性。目前抗病品种选育还是依靠病圃和人工接种鉴定。人工接种菌群较单一，病圃的面积有限，都是抗性育种工作的限制因素。花生基因组的发表和测序技术的发展，让花生育种工作进入了高效分子育种时代。虽然近些年花生开展了青枯病抗性的QTL定位研究，也获得一些抗性标记，为青枯病抗性的研究提供了理论依据，但是依然不能获得理想的分子标记应用于抗青枯病分子标记辅助育种中。
[0004]竞争性等位基因特异性PCR(Kompetitive Allele Specific PCR，KASP)可在广泛的基因组DNA样品中(甚至是一些复杂基因组的DNA样品)，对SNPs和特定位点上的InDels进行精准的双等位基因判断。与TaqMan双色标记探针法、MassARRAY分子量阵列技术、Affymetrix SNP芯片相比，KASP技术灵活性更高、试剂成本低，同样成本至少获得两倍的数据量。

技术实现思路

[0005]针对现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一个与栽培花生青枯病抗性紧密连锁的分子标记及应用。本专利技术定位到一个能在多个生育期和多年环境中重复的抗性QTL(qBWR_A12)，以qBWR_A12两翼的SNP信息开发了KASP引物，获得一个能应用于远杂9102血缘材料和非血缘材料的SNP分子标记。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：
[0007]一个与栽培花生青枯病抗性紧密连锁的分子标记，所述分子标记为qBWR_A12，位于花生第12染色体的4097252bp处，该位点前后100bp的序列为：
[0008]TCGGAACTCGACTCCTAGAATGTCCTTCACCACCTCGTACGTTACAAATGCGATTGCTATGGACGGCACCACCTGCAAAACAGCAAGTTGAAGAATGTTAGAATGCAACAAGAGTAAGGCCACTAAAAGGATTGTACCTCTTGA
GTATATTAGATGAGACTGACCTTTACAGAATTTGGCACCAGACCCTTGTATAATGCA；
[0009]或
[0010]TCGGAACTCGACTCCTAGAATGTCCTTCACCACCTCGTACGTTACAAATGCGATTGCTATGGACGGCACCACCTGCAAAACAGCAAGTTGAAGAATGTTACAATGCAACAAGAGTAAGGCCACTAAAAGGATTGTACCTCTTGAGTATATTAGATGAGACTGACCTTTACAGAATTTGGCACCAGACCCTTGTATAATGCA。
[0011]一个用于扩增所述的分子标记的KASP引物组合，所述KASP引物组合包括：
[0012]qBWR_A12L_F1:5
’
CAAAACAGCAAGTTGAAGAATGTTAG 3
’
，qBWR_A12L_F2:5
’
CAAAACAGCAAGTTGAAGAATGTTAC 3
’
，qBWR_A12L_com:5
’
TACAATCCTTTTAGTGGCCTTACTC 3
’
。
[0013]利用所述的分子标记位点来鉴定花生青枯病抗性的方法，包括：
[0014](1)提取待鉴定花生样本的DNA，通过SNPLine基因分型平台对待鉴定花生样本的A12.4097252位点进行分型；
[0015](2)若A12.4097252位点的分型结果为G:G时，则待鉴定花生样本表现为抗青枯病，存活率≥70％；若A12.4097252位点的分型结果为C:C时，则待鉴定花生样本表现为感青枯病，存活率<70％。
[0016]所述的分子标记在花生青枯病抗性鉴定中的应用。
[0017]所述的分子标记在花生抗青枯病分子育种中的应用。
[0018]本专利技术有益效果：
[0019]本专利技术利用远杂9102和wt09
‑
0023为亲本的重组自交系群体，构建高密度连锁图谱。定位到一个能在多个生育期和多年份重复到的抗性主效QTL(qBWR_A12)，其区间大小只有374.6Kb，LOD值为32.42
‑
68.02，贡献率为30.7％
‑
45.5％，比已知的其他青枯病抗性QTL的稳定性和贡献率都高。
[0020]本专利技术以主效QTL(qBWR_A12)两翼的SNP信息开发了KASP引物，获得一个能应用于远杂9102血缘材料和非血缘材料的SNP分子标记，该SNP标记位于第12染色体的4097252bp处，基于该QTL开发的标记与青枯病抗性的连锁性更紧密。该方法免去了青枯病接种鉴定或病圃鉴定的步骤，只用检测SNP基因型就能够快速准确的获得该材料的青枯病抗性信息，且能应用于花生抗青枯病的分子育种中。
附图说明
[0021]图1远杂9102和wt09
‑
0023重组自交群体遗传连锁图；
[0022]图2远杂9102和wt09
‑
0023重组自交群体青枯病抗性鉴定结果；
[0023]图3定位于第12连锁群(染色体)上QTL_WBA12的LOD值；
[0024]图4远杂9102衍生系材料的8个SNP位点基因分型结果及青枯病抗性分布；
[0025]图5 317份自然群体材料的8个SNP位点基因分型结果及青枯病抗性分布。
具体实施方式
[0026]以下结合实施例对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。
[0027]实施例1栽培种花生远杂9102青枯病抗性主效QTL的获得
[0028](1)采用简化基因组测序技术对远杂9102和wt09
‑
0023(高感青枯病)的重组自交系群体进本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一个与栽培花生青枯病抗性紧密连锁的分子标记，其特征在于，所述分子标记为qBWR_A12，位于花生第12染色体的4097252bp处，该位点前后100bp的序列为：TCGGAACTCGACTCCTAGAATGTCCTTCACCACCTCGTACGTTACAAATGCGATTGCTATGGACGGCACCACCTGCAAAACAGCAAGTTGAAGAATGTTAGAATGCAACAAGAGTAAGGCCACTAAAAGGATTGTACCTCTTGAGTATATTAGATGAGACTGACCTTTACAGAATTTGGCACCAGACCCTTGTATAATGCA；或TCGGAACTCGACTCCTAGAATGTCCTTCACCACCTCGTACGTTACAAATGCGATTGCTATGGACGGCACCACCTGCAAAACAGCAAGTTGAAGAATGTTACAATGCAACAAGAGTAAGGCCACTAAAAGGATTGTACCTCTTGAGTATATTAGATGAGACTGACCTTTACAGAATTTGGCACCAGACCCTTGTATAATGCA。2.一个用于扩增如权利要求1所述的分子标记的KASP引物组...

【专利技术属性】
技术研发人员：张新友，齐飞艳，孙子淇，刘华，郑峥，秦利，黄冰艳，田梦迪，石磊，苗利娟，董文召，
申请(专利权)人：河南省农业科学院，
类型：发明
国别省市：