与鸡种快慢羽性状相关的分子标记、其鉴定引物及应用制造技术

本发明专利技术涉及动物遗传育种技术领域，具体涉及与鸡种快慢羽性状相关的分子标记、其鉴定引物及应用。本发明专利技术提供的与鸡种快慢羽性状相关的分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术提供的用于鉴别鸡种快羽和慢羽的特异性引物对的序列如SEQ ID NO.2

【技术实现步骤摘要】
与鸡种快慢羽性状相关的分子标记、其鉴定引物及应用


[0001]本专利技术涉及动物遗传育种
，具体涉及与鸡种快慢羽性状相关的分子标记、其鉴定引物及应用。

技术介绍

[0002]雏鸡羽毛增长速度存在差异，有快羽和慢羽之分，主要依据主翼羽和覆主翼羽在不同个体之间生长速度的不同来定义快慢羽。快慢羽性状作为一对伴性遗传性状，受鸡Z染色体上的一对等位基因(K/k)控制。其中快羽基因为隐性基因，用k来表示，慢羽基因为显性基因，用K来表示。慢羽表现为雏鸡出壳时主翼羽等于或短于覆主翼羽，快羽则相反，出壳时鸡只主翼羽明显长于覆主翼羽。慢羽位点等位基因对早期羽毛的生长发育的影响较为明显，差别从第2周起，随日龄增加差异逐渐缩小，至第6周龄时这种差异完全消失，然而此时慢羽鸡的主尾羽显著较短，且形态也与快羽鸡不同，快羽鸡主尾羽排列整齐，羽轴长而宽，羽片较大，而慢羽鸡则排列不整齐，长短不一，羽轴弯曲，羽片较小。因此，在生产上快慢羽这对伴性遗传性状被广泛应用于雌雄鉴别，替代广泛在生产上使用的翻肛雌雄鉴别技术，既具有简便易行、快速准确、节省劳力的优势，又可避免翻肛鉴别对雏鸡的应激反应和避免传播疾病、挤伤雏鸡等(王建华,李花妮,石凤英.鸡羽毛生长基因的研究进展[J].家禽科学,2012(08):44
‑
46.)。
[0003]快慢羽自别雌雄是近代养鸡生产中的重要技术措施，已在养鸡业中广泛应用。但利用表型鉴定鸡的快慢羽在应用于雏鸡自别雌雄时除存在因鉴别误差而降低鉴别准确率的问题外，最主要的问题是能进行准确鉴定的时间有一定的限制，一般不能超过出壳后24h。因此，寻找控制鸡快慢羽表型的基因，建立快速鉴别快慢羽表型的分子方法，对缩短快慢羽自别雌雄配套系的建系时间、提高自别雌雄鉴定的准确性，具有非常重大的意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种与鸡种快慢羽性状相关的分子标记以及用于鉴定鸡种快慢羽性状的引物。本专利技术的另一目的是提供该分子标记和引物的应用。
[0005]本专利技术利用基因组重测序技术对大量不同的快羽和慢羽鸡种进行测序，通过对不同鸡种间的测序深度进行比对，发现慢羽鸡Z染色体(NC_006127.5)存在一个基因复制区域间，而快羽鸡不存在。针对该基因复制区域间设计引物进行PCR扩增，经验证发现，根据该引物扩增得到的产物可以快速、准确地鉴别出鸡种的快慢羽性状。
[0006]具体地，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]第一方面，本专利技术提供与鸡种快慢羽性状相关的分子标记，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]具体地，本专利技术提供与鸡种快慢羽性状相关的分子标记，所述分子标记通过序列如SEQ ID NO.2
‑
3所示的特异性引物对扩增得到。
[0009]本专利技术经验证发现，快羽鸡中不存在序列如SEQ ID NO.1所示的分子标记，而慢羽
鸡中则存在序列如SEQ ID NO.1所示的的分子标记。
[0010]第二方面，本专利技术提供用于检测所述分子标记的特异性引物对，其序列如SEQ ID NO.2
‑
3所示。
[0011]该特异性引物对的序列具体如下：
[0012]SEQ ID NO.2：Dup
‑
F(5
’‑3’
)：GTTGCTCTGTTGCCACTACAAG；
[0013]SEQ ID NO.3：Dup
‑
R(5
’‑3’
)：TTGCAGCAGTTTTGGTGGAAG。
[0014]上述特异性引物对能够特异性地扩增用于区分鉴别快羽鸡和慢羽鸡的分子标记。
[0015]本专利技术还提供用于区分鉴别快羽鸡和慢羽鸡的特异性引物对，其序列如SEQ ID NO.2
‑
3所示。
[0016]第三方面，本专利技术提供含有所述特异性引物对的试剂盒。
[0017]为便于进行PCR扩增，所述试剂盒还可含有其他用于PCR扩增的试剂，包括但不限于PCR反应缓冲液、DNA聚合酶、dNTP、Mg
2+
、ddH2O等，其中，DNA聚合酶、dNTP、Mg
2+
可以单独包装，也可与PCR反应缓冲液混合形成预混液。
[0018]第四方面，本专利技术提供所述分子标记或所述特异性引物对或所述试剂盒在鸡种快慢羽性状鉴定或辅助鉴定中的应用。
[0019]本专利技术提供的分子标记、特异性引物对在用于鉴别快羽鸡和慢羽鸡时，具有较高的准确性，且可在鸡的任意生长时期(雏鸡、成年鸡等)进行鉴别。
[0020]第五方面，本专利技术提供所述分子标记或所述特异性引物对或所述试剂盒在鸡的雌雄鉴别中的应用。
[0021]利用快羽和慢羽的遗传特性可实现通过快羽和慢羽性状的鉴别进行鸡的雌雄鉴别，因此，本专利技术的分子标记、特异性引物对还可用于鸡的雌雄鉴别，避免了传统的翻肛鉴别存在的问题。
[0022]第六方面，本专利技术提供分子标记或所述特异性引物对或所述试剂盒在鸡的遗传育种中的应用。
[0023]第七方面，本专利技术提供分子标记或所述特异性引物对或所述试剂盒在快慢羽自别雌雄配套系构建中的应用。
[0024]第八方面，本专利技术提供一种鉴定鸡种快慢羽性状的方法，该方法包括：以待测鸡种的基因组为模板，利用序列如SEQ ID NO.2
‑
3所示的特异性引物对进行PCR扩增。
[0025]优选地，所述PCR扩增的反应程序为：94
‑
98℃预变性2
‑
10min，94
‑
98℃变性10
‑
40s，56℃退火10
‑
30s，72℃延伸20
‑
50s，25
‑
40个循环，最后72℃延伸2
‑
10min。
[0026]优选地，所述PCR扩增的25μl反应体系包括：序列如SEQ ID NO.2
‑
3所示的引物(浓度10pmol/L)各0.5μl，2
×
Taq PCR Mix 12.5μl，DNA模板100ng，ddH2O补足25μl。
[0027]上述方法中，在进行PCR扩增后，根据PCR产物判断鸡种的快慢羽性状：若PCR扩增的产物中存在455bp的产物，则所述待测鸡种为慢羽鸡，若不存在455bp的产物，则所述待测鸡种为快羽鸡。
[0028]上述方法中，用于PCR扩增的模板可采用鸡种的血液或组织样本提取基因组DNA。
[0029]上述方法中，对于PCR扩增产物的检测可采用本领域常规的技术手段，例如：电泳检测、DNA测序等。
[0030]作为本专利技术的一种实施方式，所述鉴别鸡种快慢羽性状的方法包括如下步骤：
[0031](1)样品采集：通过翅下静脉对成年鸡种进行血液样品采集，并提取鸡基因组DNA。
[0032](2)PCR扩增：以步骤(1)提取的鸡基因组DNA为模板，使本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.与鸡种快慢羽性状相关的分子标记，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的分子标记，其特征在于，所述分子标记通过序列如SEQ ID NO.2
‑
3所示的特异性引物对扩增得到。3.用于鉴定权利要求1或2所述的分子标记的特异性引物对，其特征在于，其序列如SEQ ID NO.2
‑
3所示。4.含有权利要求3所述的特异性引物对的试剂盒。5.权利要求1或2所述的分子标记或权利要求3所述的特异性引物对或权利要求4所述的试剂盒在鸡种快慢羽性状鉴定或辅助鉴定中的应用。6.权利要求1或2所述的分子标记或权利要求3所述的特异性引物对或权利要求4所述的试剂盒在鸡的雌雄鉴别或快慢羽自别雌雄配套系构建中的应用。7.权利要求1或2所述的分子标记或权利要求3所述的特异性引物对或权利要求4所述的试剂盒在鸡的遗传育种中的应用。8.一种鉴定鸡种快慢羽性状的方法，其特征在于，包括：以待测鸡种的基因组为模板，利用序列如SEQ ID NO.2
‑
3...

【专利技术属性】
技术研发人员：曲鲁江，张昕烨，朱涛，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：