【技术实现步骤摘要】
一种DNA连接的方法及其应用
[0001]本专利技术是关于一种DNA连接的方法及其应用,具体是关于一种特别适用于痕量DNA连接的方法、DNA定量测定与测序文库的构建,属于DNA检测领域。
技术介绍
[0002]在核酸的研究中,常需要将两个或两个以上的核酸片段链接,例如在DNA分子上连接接头,接头一般为一段短的平末端或粘性末端的人工合成核苷酸片段。接头和核苷酸的连接效率直接影响测序文库构建的质量,目前对痕量DNA的连接无可行的方法。
[0003]精确定量DNA拷贝数是现代分子生物学和医学的重要应用之一。常见的DNA定量手段主要有紫外分光光度法、荧光染料法、聚合酶链式反应等。紫外分光光度法定量操作简单,对设备的要求也低,缺点是灵敏度和特异性都较低,且易受样品中其他杂质的干扰。荧光染料法是基于荧光染料与核酸分子结合发出荧光信号的强度与结合的核酸分子数成正比的原理,灵敏度和特异性都较高,但仍然受DNA浓度的限制,无法准确检测或检测不到微量DNA,且会受到其他类型核酸的干扰。紫外分光光度法和荧光染料法均无法检测DNA中特定序列模板的拷贝数。近年来,荧光定量PCR和数字PCR常用于微量DNA及特定序列模板拷贝数的定量。但荧光定量PCR和数字PCR都是基于荧光信号的有无和高低来反应DNA或特定模板的量,无法直接读取DNA序列,其准确性和可靠性都基于引物和探针的设计,结果的准确性可能会受到非特异性扩增的影响,并且其灵敏度普遍较低,不足够用于微量或痕量DNA的定量检测。此外,在很多研究中,还利用了磁球技术、DNA探针标记物等方 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】 【专利技术属性】
1.一种DNA连接用片段,其包括第一DNA片段和/或第二DNA片段,其中:第一DNA片段具有式I所示核苷酸序列:X1
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X2
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X3
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X4
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式I其中,X1为12
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50个任意核酸N;X2选自SEQ ID No.1~SEQ ID No.3中的任一序列;X3为6
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15个T碱基;X4选自SEQ ID No.4~SEQ ID No.6中的任一序列;第二DNA片段具有式II所示核苷酸序列:X5
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X6
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X7
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X8
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式II其中,X5选自SEQ ID No.7~SEQ ID No.9中的任一序列;X6为6
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15个T碱基;X7选自SEQ ID No.10~SEQ ID No.12中的任一序列;X8为12
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50个任意核酸N。2.根据权利要求1所述的DNA连接用片段,其中:第一DNA片段选自如下所示核苷酸序列形成的多核苷酸片段:X1
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BAGATCGTCGTGTAGGGAAAGAGTGTGCAT
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X3
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ATGCACACTCTTTCCCTACACGACGATCT,X1
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BAGATCGGAAGAGCACACGTCTGAAC
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X3
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GTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCT,或X1
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BAGATCGGAAGAGCGTCGTGTAGGGA
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X3
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TCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT;第二DNA片段选自如下所示核苷酸序列形成的多核苷酸片段:TCTAGTGTGCAGACTTGAGGTCAGTGGCAT
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X6
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ATGCCACTGACCTCAAGTCTGCACACTAGAB
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X8,TCTAGCCTTCTCGCAGCACATCCC
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X6
技术研发人员:杨神州,万成,任军,
申请(专利权)人:序康医疗科技苏州有限公司,
类型:发明
国别省市:
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