用于GhERF14基因抗病研究的引物组制造技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，公开了用于GhERF14基因抗病研究的引物组，包括如下引物中的一种或是多种：GhPR1，GhPR2，GhPR3，GhPR5，GhICS1，GhEDS1，GhNPR1，GhPAD4，GhWRKY70，GhPDF1.2，GhJAZ1，GhAOS，GhAOC4，GhEIN2，GhEIN3，GhACO，GhPAL，GhC4H1，GhERF1，GhF5H2，Gh4CL，GhCCR1，GhCCoAOMT，GhSOD，GhPOD，GhCAT，GhUBQ7。本发明专利技术可用于GhERF14基因在棉花对枯萎病的抗性反应的研究中，可用于探究该基因的功能，可用于探究该基因调控茉莉酸、水杨酸、乙烯通路相关基因和木质素合成相关基因以及参与病程相关蛋白合成的相关基因的相对表达量的影响的研究。的影响的研究。的影响的研究。

【技术实现步骤摘要】
NO：12，所述GhACO4的引物序列具体见SEQ ID NO：13，所述GhEIN2的引物序列具体见SEQ ID NO：14，所述GhEIN3的引物序列具体见SEQ ID NO：15，所述GhACO的引物序列具体见SEQ ID NO：16，所述GhPAL的引物序列具体见SEQ ID NO：17，所述GhC4H1的引物序列具体见SEQ ID NO：18，所述GhERF1的引物序列具体见SEQ ID NO：19，所述GhF5H2的引物序列具体见SEQ ID NO：20，所述Gh4CL的引物序列具体见SEQ ID NO：21，所述GhCCR1的引物序列具体见SEQ ID NO：22，所述GhCCoAOMT的引物序列具体见SEQ ID NO：23，所述GhSOD的引物序列具体见SEQ ID NO：24，所述GhPOD的引物序列具体见SEQ ID NO：25，所述GhCAT的引物序列具体见SEQ ID NO：26，所述GhUBQ7的引物序列具体见SEQ ID NO：27。
[0007]进一步的，还包括扩增GhERF14基因干扰片段GhERF14
‑
CO的引物，所述GhERF14
‑
CO的引物序列具体见SEQ ID NO：28。
[0008]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术可用于GhERF14基因在棉花对枯萎病的抗性反应的研究中，可用于探究该基因的功能，可用于探究该基因调控茉莉酸、水杨酸、乙烯通路相关基因和木质素合成相关基因以及参与病程相关蛋白合成的相关基因的表达的研究。
附图说明
[0009]图1为本专利技术的实施例的VIGS载体构建结果图；
[0010]图2为本专利技术的实施例的GhERF14基因沉默效率(A)与叶片白化情况(B)结果图；
[0011]图3为本专利技术的实施例的抗病相关基因的表达结果图；
[0012]图4为本专利技术的实施例的防御酶活性及过氧化氢和丙二醛含量的测定结果图；
[0013]图5为本专利技术的实施例的台盼蓝组织化学染色结果图；
[0014]图6为本专利技术的实施例的沉默植株和对照植株接菌后不同时间的表型结果图；
[0015]图7为本专利技术的实施例的病情指数分析结果图；
[0016]图8为本专利技术的实施例棉花茎段恢复培养结果图；
[0017]图9为本专利技术的GhERF14基因序列及推定的氨基酸序列(下划线AP2结构域)图。
具体实施方式
[0018]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例和附图，对本专利技术作进一步的详细说明，本专利技术的示意性实施方式及其说明仅用于解释本专利技术，并不作为对本专利技术的限定。
[0019]实施例：
[0020]本实施例通过构建GhERF14基因的VIGS载体，研究GhERF14基因的沉默对棉花抗枯萎病的影响以及对抗病相关基因的调控作用，进一步了解该基因的功能，为培育抗枯萎病的棉花品种提供新的基因资源，本实施例的GhERF14基因的序列及推定的氨基酸序列(下划线AP2结构域)见附图9，专利技术人选取了GhERF14基因中的部分序列(非保守区段作为干扰片段)进行研究。
[0021]本实施例所选用的仪器如下：大肠杆菌DH5α、DNA提取试剂盒、RNA提取试剂盒购于天根生物公司；胶回收试剂盒、质粒小提试剂盒、T4 DNA连接酶、EasyTaq DNA聚合酶、反转录试剂盒、pMD19
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T购于TaKaRa生物公司；pTRV1、pTRV2、pTRV2
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GhCLA1、GV3101由石河子大
学棉花分子育种实验室保存。本实施例采用的植物材料由本实验室提供，试剂以及菌株均购买于生物试剂公司。
[0022]本实施例通过ORF Finder和SMART(HTTP://smart.Spielberg.DE)软件分析预测棉花GhERF14基因的开放阅读(ORF)和AP2/ERF结构域，为了探究该基因的功能，选择在该基因的保守结构域外区段(Conservative outside:CO)设计引物，引物序列如下：
[0023]F:GGGGTACCTGGCTATTCTTAATTTCCCGCAG；
[0024]R:CGGGATCCCCTTTCCTTGTTTTTCTCTTCATTTTCAA；具体可见SEQ ID NO：28。
[0025]为了探究GhERF14基因沉默后茉莉酸、水杨酸、乙烯合成及信号通路相关基因和木质素合成相关基因以及病程相关蛋白合成的相关基因的表达，分别设计合成了基因的引物，具体见下表：
[0026]表 引物设计
[0027][0028]上述引物可用于GhERF14基因的抗病研究，研究过程中可使用上述引物中的任意一种或是多种引物。
[0029]所述GhPR1的引物序列具体见SEQ ID NO：1；所述GhPR2的引物序列具体见SEQ ID NO：2；所述GhPR3的引物序列具体见SEQ ID NO：3，所述GhPR5的引物序列具体见SEQ ID NO：4，所述GhICS1的引物序列具体见SEQ ID NO：5，所述GhEDS1的引物序列具体见SEQ ID NO：
6，所述GhNPR1的引物序列具体见SEQ ID NO：7，所述GhPAD4的引物序列具体见SEQ ID NO：8，所述GhWRKY70的引物序列具体见SEQ ID NO：9，所述GhPDF1.2的引物序列具体见SEQ ID NO：10，所述GhJAZ1的引物序列具体见SEQ ID NO：11，所述GhAOS的引物序列具体见SEQ ID NO：12，所述GhACO4的引物序列具体见SEQ ID NO：13，所述GhEIN2的引物序列具体见SEQ ID NO：14，所述GhEIN3的引物序列具体见SEQ ID NO：15，所述GhACO的引物序列具体见SEQ ID NO：16，所述GhPAL的引物序列具体见SEQ ID NO：17，所述GhC4H1的引物序列具体见SEQ ID NO：18，所述GhERF1的引物序列具体见SEQ ID NO：19，所述GhF5H2的引物序列具体见SEQ ID NO：20，所述Gh4CL的引物序列具体见SEQ ID NO：21，所述GhCCR1的引物序列具体见SEQ ID NO：22，所述GhCCoAOMT的引物序列具体见SEQ ID NO：23，所述GhSOD的引物序列具体见SEQ ID NO：24，所述GhPOD的引物序列具体见SEQ ID NO：25，所述GhCAT的引物序列具体见SEQ ID NO：26，所述GhUBQ7的引物序列具体见SEQ ID NO：27；所述GhERF14
‑
CO的引物序列具体见SEQ ID NO：28。本实施例通过以下实验利用上述引物进行了相关研究，具体研究过程见下文。
[0030]棉苗的种植：以陆地棉抗病品种
‘
中棉所12
’
为材料，浓硫酸脱绒后，选择籽粒饱满的种子，用10％过氧化氢浸泡3h，无菌水冲洗5～6次本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于GhERF14基因抗病研究的引物组，其特征在于，包括如下引物中的一种或是多种：GhPR1，GhPR2，GhPR3，GhPR5，GhICS1，GhEDS1，GhNPR1，GhPAD4，GhWRKY70，GhPDF1.2，GhJAZ1，GhAOS，GhAOC4，GhEIN2，GhEIN3，GhACO，GhPAL，GhC4H1，GhERF1，GhF5H2，Gh4CL，GhCCR1，GhCCoAOMT，GhSOD，GhPOD，GhCAT，GhUBQ7；所述GhPR1的引物序列具体见SEQ ID NO：1；所述GhPR2的引物序列具体见SEQ ID NO：2；所述GhPR3的引物序列具体见SEQ ID NO：3，所述GhPR5的引物序列具体见SEQ ID NO：4，所述GhICS1的引物序列具体见SEQ ID NO：5，所述GhEDS1的引物序列具体见SEQ ID NO：6，所述GhNPR1的引物序列具体见SEQ ID NO：7，所述GhPAD4的引物序列具体见SEQ ID NO：8，所述GhWRKY70的引物序列具体见SEQ ID NO：9，所述GhPDF1.2的引物序列具体见SEQ ID NO：10，所述GhJAZ1的引物序列具体见SEQ ID NO：11，所述GhAOS的引物序列具体见SEQ ID ...

【专利技术属性】
技术研发人员：张薇，赵龙飞，赵曾强，朱金成，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：