本申请公开了一种从人外周血红细胞分离或提纯的DNA。本申请还提供一种从人外周血红细胞分离或提纯的DNA的方法、用于对受试者进行癌症检测的系统以及用途。本申请所述的从人外周血红细胞分离或提纯的DNA以及方法，由于癌细胞DNA释放至血液后，除了存在于血浆外，也可能被其它细胞吸收，如血液中的红细胞。血液中吸收来源于癌细胞DNA的红细胞。因此针对上述问题，本申请提出一种从人外周血红细胞分离或提纯的DNA及其制备方法和用途，通过从受试者的红细胞中提取DNA，通过对红细胞吸收的癌细胞DNA进行检测，实现对癌症的筛查和诊断。实现对癌症的筛查和诊断。
【技术实现步骤摘要】
从人外周血红细胞分离或提纯的DNA及其制备方法和用途
[0001]本申请涉及生物医学
，具体而言，涉及从人外周血红细胞分离或提纯的DNA及其制备方法和用途。
技术介绍
[0002]在癌症的发生、发展过程中，往往伴随有癌细胞DNA的改变，如DNA甲基化，碱基序列的改变，染色体结构变异，基因融合等。通过对癌症DNA甲基化、基因突变、基因融合，染色体结构变异的检测，可以实现癌症的筛查，诊断。通常，用于癌症筛查、诊断的DNA最初来源于癌细胞，或癌前病变的细胞。通过活体取材技术，如穿刺等对病灶部位取材，取到受检材料，进一步对受检材料提取DNA或RNA，进行DNA甲基化、基因突变、基因融合，染色体结构变异的检测和分析。
[0003]在癌细胞分裂，生长过程中，部分癌症细胞会因各种原因，如受到免疫细胞的清除作用，死亡或者凋亡等。癌细胞死亡或凋亡后，DNA被碎片化，随着其它细胞成分释放至血液中。对癌症DNA的检测，除了直接对病灶部位取材，也可以通过静脉采集外周血，实现对癌症DNA甲基化、基因突变、基因融合，染色体结构变异的检测。
[0004]外周血中肿瘤的DNA，被称作循环肿瘤DNA，即ctDNA（circulating tumor DNA）。通常采集受试者外周血，分离无细胞的血浆，对血浆游离DNA，即cfDNA(cell
‑
free DNA)进行提取分离，ctDNA存在于cfDNA中。通过对包含ctDNA的cfDNA进行检测，实现对癌症的筛查或者诊断。血浆cfDNA的片段分布呈现为一个核小体单位的167bp主峰及2个核小体的340bp次峰。
[0005]但是由于癌细胞DNA改变多样，在血浆中容易分解变化，因此只是通过检测血浆中的DNA，来判断受试者是否患癌，会导致结果不太准确。
技术实现思路
[0006]由于癌细胞DNA释放至血液后，除了存在于血浆外，也可能被其它细胞吸收，如血液中的红细胞。血液中吸收来源于癌细胞DNA的红细胞。因此针对上述问题，本申请提出一种从人外周血红细胞分离或提纯的DNA及其制备方法和用途，通过从受试者的红细胞中提取DNA，通过对红细胞吸收的癌细胞DNA进行检测，实现对癌症的筛查和诊断。
[0007]本申请提供如下技术方案。
[0008]1、一种从人外周血红细胞分离或提纯的DNA。
[0009]2、根据项1所述的DNA，其特征在于，所述DNA进行亚硫酸盐转化后用于通过基因的甲基化水平来检测癌症或癌症患病风险。
[0010]3、根据项2所述的DNA，其特征在于，所述癌症为包括肝癌、结直肠癌、胃癌、食管癌、肺癌、宫颈癌、胰腺癌、乳腺癌或头颈癌。
[0011]4、一种从人外周血红细胞分离或提纯的DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：提供人外周血样品；
向所述人外周血样品中加入红细胞稳定剂；离心分离获得含有少量粒细胞的红细胞样品；在含有少量粒细胞的红细胞样品中加入红细胞裂解液，从而获得含有红细胞DNA和血红蛋白的混合液；在所述含有红细胞DNA和血红蛋白的混合液中加入结合液，从而获得含有红细胞DNA的混合液；洗涤所述含有红细胞DNA的混合液，获得所述DNA。
[0012]5、根据项4所述的方法，其特征在于，向所述人外周血样品中加入红细胞稳定剂后放置一段时间。
[0013]6、根据项4所述的方法，其特征在于，所述人外周血样品与所述红细胞稳定剂的体积比为10
‑
20：1，优选为10:1；优选地，所述红细胞稳定剂选自EDTA、柠檬酸盐、氟化钠、原矾酸钠、甘油磷酸钠、焦磷酸钠、四咪唑盐酸盐、苯甲基磺酰氟、胃蛋白酶抑制剂、EDTA
‑
Na2、甲醛聚合物、乙醛聚合物、丙醛聚合物、碱性盐、盐酸、Tris中的一种或两者以上的组合。
[0014]7、根据项4所述的方法，其特征在于，通过直接离心或密度梯度离心法将所述人外周血中的红细胞、白细胞、血浆粗分离，获得含有少量粒细胞的红细胞样品。
[0015]8、根据项4所述的方法，其特征在于，采用红细胞裂解液特异性地破坏红细胞的细胞膜，使红细胞中的DNA和血红蛋白释放至裂解液中，然后通过离心除去粒细胞和其他沉淀物质；所述红细胞裂解液选自NH4Cl、KHCO3、EDTA
‑
Na2或Tris中的一种或两种以上的组合；优选地，所述红细胞与红细胞裂解液的体积比为1:1
‑
10，优选为1:2。
[0016]9、根据项4所述的方法，其特征在于，所述结合液用于结合血红蛋白，从而将红细胞中的DNA和血红蛋白分离，获得含有红细胞DNA的混合液。
[0017]10、根据项4或9所述的方法，其特征在于，所述结合液包括硫氰酸胍、盐酸胍、碘化钠、尿素或作用于蛋白的酶中的一种或两种以上的组合，优选为硫氰酸胍和蛋白酶K；所述结合液与所述红细胞DNA和血红蛋白的混合液的体积比为1:1
‑
10，优选为1:1。
[0018]11、根据项4所述的方法，其特征在于，使用乙醇、异丙醇或正丁醇洗涤所述含有红细胞DNA的混合液。
[0019]12、一种用于对受试者进行癌症检测的系统，其特征在于，包括：对受试者红细胞的DNA进行亚硫酸盐转化的构件；以及检测甲基化的构件。
[0020]13、根据项12所述的系统，其特征在于，所述检测甲基化的构件为Septin 9基因甲基化检测试剂盒。
[0021]14、根据项12或13所述的系统，其特征在于，还包括：获取受试者红细胞DNA的构件，所述构件包括样品单元，所述样品单元用于提供人外周血样品；稳定单元，所述稳定单元用于稳定人外周血样本中红细胞状态；
分离单元，所述分离单元用于离心分离获得含有少量粒细胞的红细胞样品；裂解单元，所述裂解单元用于在含有少量粒细胞的红细胞样品中加入红细胞裂解液，从而获得含有红细胞DNA和血红蛋白的混合液；结合单元，所述结合单元用于在所述含有红细胞DNA和血红蛋白的混合液中加入结合液，从而获得含有红细胞DNA的混合液；洗涤单元，所述洗涤单元用于洗涤所述含有红细胞DNA的混合液，获得所述DNA。
[0022]15、根据项14所述的系统，其特征在于，在所述稳定单元中，所述人外周血样品与红细胞稳定剂混合、放置一端时间，以提高所述人外周血样品中的红细胞的稳定性，便于后续分离。
[0023]16、根据项14所述的系统，其特征在于，在所述分离单元中，通过直接离心或密度梯度离心法将所述人外周血中的红细胞、白细胞、血浆粗分离，获得含有少量粒细胞的红细胞样品。
[0024]17、根据项14所述的系统，其特征在于，在所述裂解单元中，采用红细胞裂解液特异性地破坏红细胞的细胞膜，使红细胞中的DNA和血红蛋白释放至裂解液中，然后通过离心弃去粒细胞和其他沉淀；所述红细胞裂解液选自NH4Cl、KHCO3、EDTA
‑
Na2或Tris中的一种或两种以上的组合；所述红细胞与红细胞裂解液的体积比为1:1
‑...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种从人外周血红细胞分离或提纯的DNA，所述DNA进行亚硫酸盐转化后用于通过基因的甲基化水平来检测癌症或癌症患病风险。2.根据权利要求1所述的DNA，其特征在于，所述癌症包括肝癌、结直肠癌、胃癌、食管癌、肺癌、宫颈癌、胰腺癌、乳腺癌或头颈癌。3.一种从人外周血红细胞分离或提纯的DNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：提供人外周血样品；向所述人外周血样品中加入红细胞稳定剂；离心分离获得含有少量粒细胞的红细胞样品；在含有少量粒细胞的红细胞样品中加入红细胞裂解液从而获得含有红细胞DNA和血红蛋白的混合液；在所述含有红细胞DNA和血红蛋白的混合液中加入结合液，从而获得含有红细胞DNA的混合液；洗涤所述含有红细胞DNA的混合液，获得所述DNA。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，向所述人外周血样品中加入红细胞稳定剂后放置一段时间；所述人外周血样品与所述红细胞稳定剂的体积比为10
‑
20：1；所述红细胞稳定剂选自EDTA、柠檬酸盐、氟化钠、原矾酸钠、甘油磷酸钠、焦磷酸钠、四咪唑盐酸盐、苯甲基磺酰氟、胃蛋白酶抑制剂、EDTA
‑
Na2、甲醛聚合物、乙醛聚合物、丙醛聚合物、碱性盐、盐酸、Tris中的一种或两种以上的组合。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，通过直接离心或密度梯度离心法将所述人外周血中的红细胞、白细胞、血浆粗分离，获得含有少量粒细胞的红细胞样品。6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，采用红细胞裂解液特异性地破坏红细胞的细胞膜，使红细胞中的DNA和血红蛋白释放至裂解液中，然后通过离心除去粒细胞和其他沉淀物质 ；所述红细胞裂解液选自NH4Cl、KHCO3、EDTA
‑
Na2或Tris中的一种或两种以上的组合；所述红细胞与红细胞裂解液的体积比为1:1
‑
10。7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述结合液用于结合血红蛋白，从而将红细胞中的DNA和血红蛋白分离，获得含有红细胞DNA的混合液；所述结合液包括硫氰酸胍、盐酸胍、碘化钠、尿素或作用于蛋白的酶中的一种或两种以上的组合；所述结合液与所述红细胞DNA和血红蛋白的混合液的体积比为1:1
‑
10。8.一种用于对受试者进行癌症检测的系统，其特征在于，包括：对受试者红细胞的DNA进行亚硫酸盐转化的构件；以及检测所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：郝少东，王晶，郭强强，吴振，朱真毓，韩晓亮，
申请(专利权)人：博尔诚北京科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。