RPS9蛋白在食蟹猴超数排卵良好应答预测中的应用制造技术

本发明专利技术为RPS9蛋白在食蟹猴超数排卵良好应答预测中的应用，属于超数排卵技术领域，通过蛋白质组学的方法对超数排卵成功组第1天、超数排卵成功组第5天、超数排卵失败组第1天以及超数排卵失败组第5天的血液样本蛋白进行生物信息分析，得到各组之间的差异蛋白。从蛋白质水平研究，对揭示超数排卵猴血液的蛋白表达变化进行了探讨。在食蟹猴超数排卵中，RPS9蛋白在超数排卵成功组中第5天表达，而在第5天超数排卵失败组中不表达。提示在超排失败组PRS9表达下调影响MAPK信号通路和NK

【技术实现步骤摘要】
RPS9蛋白在食蟹猴超数排卵良好应答预测中的应用


[0001]本专利技术涉及超数排卵
，更具体地，涉及RPS9蛋白在食蟹猴超数排卵良好应答预测中的应用。

技术介绍

[0002]超数排卵是指利用外源性激素刺激雌性动物的卵巢，促使卵巢内的多个卵泡同时生长发育，最终获得多个成熟卵母细胞的技术。食蟹猴在自然月经周期中仅有一个优势卵泡发育成熟和排卵。如果在月经期中使用超数排卵技术，则可以将每次排卵的卵母细胞数量由原来的1个增加至10～20个甚至更多。成熟的卵母细胞是用于开展人类疾病，基因工程以及胚胎工程研究的重要材料。但是，通过自然周期获取符合要求的卵母细胞数量极少，远不能满足实验需求，并且所需要的周期过长。超数排卵可以充分发掘母畜的生殖潜能，可以使卵巢中大量卵母细胞得到生长发育并成熟。因此，通过超数排卵技术来获取大量成熟的卵母细胞是有效可行的途径。
[0003]在不同的超排方案中，虽然都得到了多于正常自然周期的成熟卵母细胞，但是不同动物获取卵母细胞的数量上存在较大的差异。相对来说，体重大于5kg的肥胖食蟹猴以及体重小于3kg的食蟹猴超排效果均不太理想，体重在3～5kg的食蟹猴超数排卵中成熟卵母细胞的数量较多。在重复超排中，若猕猴在第一次超数排卵时，卵巢应答较差，则在后续的超数排卵中，其超排效果不理想。若选用上一次超数排卵时卵巢应答较好的猕猴进行重复超排，则在下一次超排中获得的卵母细胞数量及质量较为理想。此外，具有季节性繁殖的猕猴，若在非生殖季节进行超数排卵获得成熟卵母细胞的数量明显低于在生殖季节进行超数排卵获得的成熟卵母细胞数量。此外，月经周期紊乱，腹泻以及卵巢上有未退化的黄体也会导致超数排卵的效果不理想。
[0004]核糖体蛋白S9(RPS9)基因编码核糖体蛋白，该蛋白是40S亚基的一个组成部分，同时也是组装30S核糖体蛋白复合物必不可少的核糖体蛋白。该蛋白质属于核糖体蛋白的S4P家族它位于细胞质中，参与核糖体的产生。在牛泌乳周期中，与发情周期中卵巢的变化相比乳腺的特征是细胞和分子的变化。RPS9在牛乳腺中稳定表达，并作为合适的参考基因。牛卵巢在其不同的位置包含大量异质细胞群体，这些细胞群体在形态和分子水平上受发情周期和妊娠的影响。H3F3B和RPS9作为健康牛卵巢标准化的最佳参考基因。目前关于RPS9蛋白与超数排卵之间的研究还没有被报道，RPS9在超数排卵过程中与卵巢、卵母细胞等之间的相互作用尚未清楚。

技术实现思路

[0005]本专利技术为了克服现有技术中存在的上述问题，首先提供了RPS9蛋白在食蟹猴超数排卵良好应答预测中的应用。
[0006]本专利技术的目的通过以下技术方案实现：
[0007]RPS9蛋白在食蟹猴超数排卵良好应答预测中的应用。
[0008]超数排卵一直是辅助生殖技术研究的重点，在超数排卵中获得卵母细胞的数量、成熟度以及发育潜能至关重要。食蟹猴在正常超数排卵中可以获得十个甚至数十个成熟的MII期卵母细胞，然而在重复超排后，部分食蟹猴开始在超数排卵中产生应答，只能获得少量的GV期卵，并且在后续的超数排卵中都表现不佳。虽然卵巢中储备着大量的原始卵泡，但无法通过超数排卵进行有效的获取。尽管大量对超数排卵的研究证实了在超数排卵中存在抗体、体重、季节、年龄等影响因素，但是超数排卵是一个促性腺激素与卵母细胞之间的相关调控，是一个复杂的动态过程。因此，影响超数排卵的机制还未被阐明以及有效的解决方法还未被提出。由于蛋白质是生命活动中最终发挥作用的执行者，超数排卵过程中也是大量的蛋白在生命体中进行相关作用的结果。
[0009]在本次实验中采用的是DIA非标定量的技术，该技术将质谱整个扫描范围分为若干个窗口，并且高速、循环地对每个窗口中的所有离子进行选择、碎裂以及检测。因此，与传统的DDA技术相比，DIA可以将样本中的全部碎片信息都收集，数据利用度大大提高，缺失值少，具有较高的低丰度蛋白的检测率。本研究中，按超数排卵的结果对血液样本进行分组，通过蛋白质组学的方法对6只食蟹猴超数排卵的血液样品进行分析，共鉴定出1550个蛋白，其中对超数排卵成功组第1天、超数排卵成功组第5天、超数排卵失败组第1天以及超数排卵失败组第5天的样本蛋白进行生物信息分析，得到各组之间的差异蛋白。从蛋白质水平研究，对揭示超数排卵中血液的蛋白表达变化进行了探讨。尝试筛选出超数排卵中影响卵母细胞数量和质量的相关差异蛋白，对进一步改善超数排卵方案以及预测超数排卵结果提供了可能的分子标志物。
[0010]从蛋白质定性分析中可以得知，RPS9蛋白在超数排卵成功组中第5天表达，而在第5天超数排卵失败组中不表达。提示在超排失败组PRS9表达下调影响MAPK信号通路和NK
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κB通路的活化，从而使细胞凋亡、细胞周期阻滞并抑制增殖。PRS9表达下调可能引起p53的活化，从而导致细胞增殖受到抑制，从而影响了卵泡形成，导致超排应答失败。
[0011]优选的，RPS9蛋白作为食蟹猴超数排卵良好应答预测的正调控因子。
[0012]因此，在具体预测食蟹猴超数排卵的成功或者失败时，可以通过检测食蟹猴超排的第1天至第5天的血液样品中的RPS9蛋白存在与否来预测。
[0013]当然，食蟹猴超数排卵时，同样可以按照现有的方案给予激素，给予激素的方案包括但不限于以下三种：
[0014]第一种：雌性食蟹猴月经第1天皮下注射GnRH激动剂3.75mg。两到三周后，雌性食蟹猴皮下注射75IU/kg rhFSH，每隔72h注射三次，最后一次注射后60h静脉注射1200IU hCG。
[0015]第二种：雌性猴子在月经1～3天时，肌内注射60IU rhFSH每天两次连续6天，然后60IU肌内注射rhFSH和60IU rhLH每天两次连续3天，随后5小时后静脉注射1000IU的hCG。为了抑制过早排卵，从刺激rhFSH的第1天开始，每天注射0.25mg GnRH抑制剂，并持续到hCG当天。
[0016]第三种：在月经的第1天，对雌性食蟹猴进行GnRH激动剂3.75mg皮下注射。两到三周后，用A或B方法刺激卵泡生长。方法A：25IU/kg的rhFSH溶解在甘油/生理盐水(1:1)皮下注射9天，一天一次，36h后静脉注射1200IU hCG。方法B：雌性食蟹猴每隔3天皮下注射75IU/kg hFSH，最后一次处理间隔60h后静脉注射1200IU hCG。
[0017]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0018]本专利技术通过蛋白质组学的方法对超数排卵成功组第1天、超数排卵成功组第5天、超数排卵失败组第1天以及超数排卵失败组第5天的样本蛋白进行生物信息分析，得到各组之间的差异蛋白。从蛋白质水平研究，对揭示超数排卵中血液的蛋白表达变化进行了探讨。尝试筛选出超数排卵中影响卵母细胞数量和质量的相关差异蛋白，对进一步改善超数排卵方案以及预测超数排卵结果提供了可能的分子标志物。
[0019]在食蟹猴超数排卵中，RPS9蛋白在超数排卵成功组中第5天表达，而在第5天超数排卵失败组中不表达。提示本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.RPS9蛋白在食蟹猴超数排卵良好应答预测中的应用。2.根据权利要求1所述的应用...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨世华，侯润杰，赵鑫源，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
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