SARS-CoV-2检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及病毒检测技术领域，具体而言，涉及一种SARS-CoV-2检测试剂盒；所述试剂盒包括a)与固相支持物偶联的RBD特异性配体，b)偶联有吖啶类荧光团的标记物的RBD重组蛋白，以及：用于溶解a组分的第一缓冲液，pH＝5.5～6.5；用于溶解b组分的第二缓冲液，pH＝5.5～8.5；用于裂解样本以释放病毒中的RBD抗原的第三缓冲液，pH＝3.0～4.5。该试剂盒操作方便，且具有较高的检出率和准确性。具有较高的检出率和准确性。具有较高的检出率和准确性。

【技术实现步骤摘要】
SARS-CoV-2检测试剂盒


[0001]本专利技术涉及病毒检测
，具体而言，涉及一种SARS-CoV-2检测试剂盒。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒(SARS-CoV-2，亦被称为2019-nCoV、HCoV-19)属于β属的冠状病毒，颗粒呈圆形或椭圆形直径60nm～140nm，基因特征与SARS具有明显的区别，且相比于SARS具有更高的感染能力。基于流行病学调查，COVID-19 的潜伏期为1～14天，多为3～7天，症状以发热、干咳、乏力为主，重症患者多在发病一周后出现呼吸困难和/或低氧血症，严重者可快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出现凝血功能障碍及多器官功能衰竭等。因此，如何快速确诊疑似病例，以及如何有效监控疾病进程，将为治疗COVID-19，打好疫情攻坚战的重点。
[0003]据《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第六版)》中规定，目前确诊COVID-19 的方法为使用实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性，或病毒基因测序与已知的新型冠状病毒高度同源。但疫情发展至今，核酸检测试剂的漏检问题一再暴露，阳性检出率只有30％～50％，主要是由于检测方式的局限性造成的。核酸检测，一般是通过收集鼻咽拭子、疑似患者的痰、血液、粪便，提取其中的 RNA片段进行荧光RT-PCR，采样过程中会混入大量人体细胞、细菌，进而造成待测RNA丰度低，检测系统无法检测，最终导致假阴性的产生。同时，除抽血外，其余采样方式均会造成采样人员暴露于可能含有病原体的环境中，有潜在的感染风险。而且核酸检测样品的制备过程，需要步骤多、操作时间长，对检测人员的技术水平要求高。

技术实现思路

[0004]本专利技术涉及一种SARS-CoV-2检测试剂盒，其包括a)与固相支持物偶联的 RBD特异性配体，b)偶联有吖啶类荧光团的标记物的RBD重组蛋白，以及：
[0005]用于溶解a组分的第一缓冲液，pH＝5.5～6.5；
[0006]用于溶解b组分的第二缓冲液，pH＝5.5～8.5；
[0007]用于裂解样本以释放病毒中的RBD抗原的第三缓冲液，pH＝3.0～4.5。
[0008]本专利技术所提供的试剂盒采用RBD重组蛋白与样本中的RBD蛋白竞争与固相支持物偶联的RBD特异性配体，再检测RBD重组蛋白上的吖啶类荧光团即可进行定量分析。
[0009]本试剂第一缓冲液pH略偏酸性，能够将经过第三缓冲液处理的样品中pH 调整至抗原与包被于固相支持物上的RBD特异性配体结合的合适pH条件，适合于吖啶类荧光团的发光检测，提高检出率和准确性。在检测过程中，无需对样品进行RNA提取操作，检测步骤较少，操作时间缩短，可避免因RNA丰度低导致的假阴性结果。而且可配合使用自动的化学发光测定仪，减少了人员与可能携带病原体样本的接触，最大程度上降低感染几率。同时，化学发光技术本身检测灵敏，检测速度快，远远优于核酸检测。
附图说明
[0010]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0011]图1为本专利技术一个实施例中转染后的细胞样品WB图。
具体实施方式
[0012]现将详细地提供本专利技术实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本专利技术。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本专利技术进行多种修改和变化而不背离本专利技术的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。
[0013]因此，旨在本专利技术覆盖落入所附权利要求的范围及其等同范围中的此类修改和变化。本专利技术的其它对象、特征和方面公开于以下详细描述中或从中是显而易见的。本领域普通技术人员应理解本讨论仅是示例性实施方式的描述，而非意在限制本专利技术更广阔的方面。
[0014]本专利技术涉及一种SARS-CoV-2检测试剂盒，其包括a)与固相支持物偶联的 RBD配体，b)偶联有吖啶类荧光团的标记物的RBD重组蛋白，以及：
[0015]用于溶解a组分的第一缓冲液，pH＝5.5～6.5；还可以选择5.7、5.9、6.0、6.1、 6.3；
[0016]用于溶解b组分的第二缓冲液，pH＝5.5～8.5；还可以选择6.0、6.5、7.0、7.5、 8.0；
[0017]用于裂解样本以释放病毒中的RBD抗原的第三缓冲液，pH＝3.0～4.5，还可以选择3.5、3.8、4.0、4.2。
[0018]第三缓冲液是通过研究证实的，在保证抗原活性的情况下，将其从样本中分离出来最优条件。
[0019]如本文使用的术语“缓冲液”指水溶液或组合物，当酸或碱加入该溶液或组合物中时，所述水溶液或组合物抵抗pH中的变化。这种对pH变化的抗性是由于此类溶液的缓冲性质。因此，显示出缓冲活性的溶液或组合物被称为缓冲液或缓冲溶液。缓冲液一般不具有无限的维持溶液或组合物的pH的能力。相反，它们一般能够维持在特定范围内的pH，例如pH 3～pH 9。一般地，缓冲液能够维持在其pKa上和下一个对数内的pH(参见例如，Mohan，Buffers，A guide for thepreparation and use of buffers in biological systems，CALBIOCHEM，1999)。缓冲液和缓冲溶液一般由缓冲盐或优选非离子缓冲液组分如TRIS和HEPES制备。可以在本专利技术的方法中使用的缓冲液优选选自磷酸盐缓冲液(PB)、磷酸盐缓冲盐水缓冲液(PBS)、2-氨基-2羟甲基-1,3-丙二醇(TRIS)缓冲液、2-(N-吗啉代) 乙磺酸(MES)、TRIS缓冲盐水溶液(TBS)和TRIS/EDTA(TE)。
[0020]在一些实施方式中，所述第一缓冲液中的缓冲组分主要为MES，浓度为20 mM～100mM，还可以选择40mM、60mM、80mM。
[0021]在一些实施方式中，所述第二缓冲液中的缓冲组分主要是PBS，浓度为10 mM～
50mM，还可以选择20mM、30mM、40mM。
[0022]在一些实施方式中，所述b组分溶解于所述第二缓冲液中，且浓度为1ug/mL ～400ug/mL。
[0023]在本专利技术中，若无特别强调，则浓度一般为工作浓度。
[0024]在一些实施方式中，所述第三缓冲液中的缓冲组分主要是柠檬酸盐与有机酸的混合组分；有机酸可以更好的提供缓冲效果。
[0025]在一些实施方式中，所述有机酸选自乙酸、乙二酸、苹果酸和水杨酸中的至少一种；
[0026]在一些实施方式中，所述第三缓冲液中的缓冲组分主要是柠檬酸盐10mM ～50mM，还可以为20mM、30mM、40mM；乙酸0.5mM～2mM，还可以为1mM本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种SARS-CoV-2检测试剂盒，其包括a)与固相支持物偶联的RBD特异性配体，b)偶联有吖啶类荧光团的标记物的RBD重组蛋白，以及：用于溶解a组分的第一缓冲液，pH＝5.5～6.5；用于溶解b组分的第二缓冲液，pH＝5.5～8.5；用于裂解样本以释放病毒中的RBD抗原的第三缓冲液，pH＝3.0～4.5。2.根据权利要求1所述的SARS-CoV-2检测试剂盒，所述第一缓冲液中的缓冲组分主要为MES，浓度为20mM～100mM。3.根据权利要求1所述的SARS-CoV-2检测试剂盒，所述第二缓冲液中的缓冲组分主要是PBS，浓度为10mM～50mM；可选的，所述b组分溶解于所述第二缓冲液中，且浓度为1ug/mL～400ug/mL。4.根据权利要求1所述的SARS-CoV-2检测试剂盒，所述第三缓冲液中的缓冲组分主要是柠檬酸盐与有机酸的混合组分；可选的，所述有机酸选自乙酸、乙二酸、苹果酸和水杨酸中的至少一种；可选的，所述第三缓冲液中的缓冲组分主要是柠檬酸盐10mM～50mM，乙酸0.5mM～2mM；可选的，所述第三缓冲液中的用于裂解的成分选自Tween和/或Triton；可选的，所述Tween选自Tween-20和/或Tween-80；可选的，所述Tween的浓度为0.1％～...

【专利技术属性】
技术研发人员：程方明，龚育清，钱纯亘，黄婕，胡鹍辉，
申请(专利权)人：深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：