用于N-MID骨钙素检测的组合物及应用和磁微球电化学发光免疫检测试剂盒与检测方法技术

本发明专利技术涉及电化学检测领域，特别涉及用于N

【技术实现步骤摘要】
用于N
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MID骨钙素检测的组合物及应用和磁微球电化学发光免疫检测试剂盒与检测方法


[0001]本专利技术涉及电化学检测领域，特别涉及用于N
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MID骨钙素(N
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MID Osteocalcin)检测的组合物，该组合物的应用，包含该组合物的磁微球电化学发光免疫检测试剂盒，以及基于该组合物或试剂盒的磁微球电化学发光免疫检测方法。

技术介绍

[0002]N
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MID骨钙素(N
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MID Osteocalcin)是成熟成骨细胞分泌的一种非胶原骨基质蛋白，占骨基质中非胶原蛋白成分的25％，骨总蛋白的2％。完整的骨钙素有49个氨基酸组成，相对分子质量为5800。血清中的骨钙素具有多样性，约1/3为完整骨钙素(即全段骨钙素)，1/3为骨钙素N端中分子(N
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MID)片段，1/3为氨基酸短肽。骨钙素是成骨细胞功能和骨质矿化的特殊标志物，作为骨转换标志物逐渐被临床应用。N
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MID是骨基质中重要的一种特异非胶原蛋白，与骨钙的结合作用依赖于维生素K，其含量与各种骨代谢紊乱中的骨转换率有关。N
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MID含量异常多见于骨质疏松、原发性或继发性甲状旁腺功能亢进等。
[0003]到目前为止，用于检测人体血清样本中N
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MID骨钙素(N
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MID Osteocalcin)的含量的方法主要有：酶联免疫法(ELISA)和酶促磁微粒化学发光。本专利技术采用方法为电化学发光法，采用吡啶钌作为化学发光标记物具有明显优势，主要表现在：灵敏度更好，稳定性更好，钌是金属离子，分子量小，不影响抗体的空间位阻。生产过程短，检测范围宽，重复性好。电化学发光反应可控，降低信号采集难度。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种用于N
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MID骨钙素(N
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MID Osteocalcin)检测的组合物及应用和磁微球电化学发光免疫检测试剂盒与检测方法，具有生产效率高、检测时间短、适用于全自动检测，具有更高的灵敏度、线性范围宽等优点。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了用于N
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MID骨钙素(N
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MID Osteocalcin)检测的组合物，包括N
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MID Osteocalcin试剂Ra、N
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MID Osteocalcin试剂Rb、链霉亲和素超顺磁微球；
[0007]所述N
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MID Osteocalcin试剂Ra包括含生物素标记的抗N
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MID Osteocalcin单克隆抗体；
[0008]所述N
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MID Osteocalcin试剂Rb包括含三联吡啶钌标记的抗N
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MID Osteocalcin单克隆抗体；
[0009]所述链霉亲和素超顺磁微球包括表面包裹带有链霉亲和素的超顺磁微球。
[0010]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述超顺磁微球的粒径在1.5～5.0μm。
[0011]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述N
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MID Osteocalcin试剂Ra中，每个抗体分子表面的生物素分子标记量为2～5个；所述N
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MID Osteocalcin试剂Rb中，每个抗体分子表面的钌分子标记量为2～10个。
[0012]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述N
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MID Osteocalcin试剂Ra的制备方法为：在缓冲液存在的条件下，取抗N
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MID Osteocalcin单克隆抗体与生物素混合，制得所述N
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MID Osteocalcin试剂Ra；所述缓冲液包括pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的磷酸盐缓冲液或pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的三羟甲基氨基甲烷缓冲液。
[0013]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述N
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MID Osteocalcin试剂Ra的制备方法为：取2.0mg的用于标记生物素N
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MID骨钙素(N
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MID Osteocalcin)抗体，使用脱盐柱PD10更换缓冲液为磷酸盐缓冲液(pH＝7.8)，使用超滤管浓缩后调整浓度为2.0mg/mL，加入80μg的生物素(使用DMF溶解)，混匀反应30分钟，使用脱盐柱PD10去除未标记的生物素。使用含1％的牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)稀释标记生物素的N
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MID骨钙素(N
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MID Osteocalcin)抗体到1mg/L，作为N
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MID Osteocalcin试剂Ra。
[0014]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述N
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MID Osteocalcin试剂Rb的制备方法为：在缓冲液存在的条件下，取抗N
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MID Osteocalcin单克隆抗体与三联吡啶钌混合，制得所述N
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MID Osteocalcin试剂Rb；所述缓冲液包括pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的磷酸盐缓冲液或pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的三羟甲基氨基甲烷缓冲液。
[0015]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述N
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MID Osteocalcin试剂Rb的制备方法为：取2.0mg的用于标记三联吡啶钌的N
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MID骨钙素(N
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MID Osteocalcin)抗体，使用脱盐柱PD10更换缓冲液为磷酸盐缓冲液(pH＝7.8)，使用超滤管浓缩后调整浓度为2.0mg/mL，加入30
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80μg的琥珀酰胺三联吡啶钌(使用DMF溶解)，混匀反应30分钟，使用脱盐柱PD10去除未标记的钌。使用含1％的牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)稀释标记钌的N
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MID骨钙素(N
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MID Osteocalcin)抗体到1mg/L，作为N
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MID Osteocalcin试剂Rb。
[0016]在本专利技术的一些具体实施方案中，本专利技术提供的组合物还包括定标品和/或清洗液；所述清洗液包括浓度150～200mmol/L的三丙胺和浓度200～400mmol/L的磷酸盐缓冲液；或浓度80～100mmol/L的二丁基乙醇胺和浓度200～400mmol/L的磷酸盐缓冲液。
[0017]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述清洗液包括但不限于三丙胺清洗液、二丁基乙醇胺清洗液、管路清洗液。
[0018]在本专利技术的一些更具体的实施方案中，所述清洗液包括浓度180mmol/L的三丙胺和浓度300mmol/L的磷酸盐缓冲液；或浓度90mmol/L的二丁基乙醇胺本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于N
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MID骨钙素(N
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MID Osteocalcin)检测的组合物，其特征在于，包括N
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MID Osteocalcin试剂Ra、N
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MID Osteocalcin试剂Rb、链霉亲和素超顺磁微球；所述N
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MID Osteocalcin试剂Ra包括含生物素标记的抗N
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MID Osteocalcin单克隆抗体；所述N
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MID Osteocalcin试剂Rb包括含三联吡啶钌标记的抗N
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MID Osteocalcin单克隆抗体；所述链霉亲和素超顺磁微球包括表面包裹带有链霉亲和素的超顺磁微球。2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述超顺磁微球的粒径在1.5～5.0μm。3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述N
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MID Osteocalcin试剂Ra中，每个抗体分子表面的生物素分子标记量为2～5个；所述N
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MID Osteocalcin试剂Rb中，每个抗体分子表面的钌分子标记量为2～10个。4.如权利要求1至3任一项所述的组合物，其特征在于，所述N
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MID Osteocalcin试剂Ra的制备方法为：在缓冲液存在的条件下，取抗N
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MID Osteocalcin单克隆抗体与生物素混合，制得所述N
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MID Osteocalcin试剂Ra；所述缓冲液包括pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的磷酸盐缓冲液或pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的三羟甲基氨基甲烷缓冲液。5.如权利要求1至3任一项所述的组合物，其特征在于，所述N
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MID Osteocalcin试剂Rb的制备方法为：在缓冲液存在的条件下，取抗N
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MID Osteocalcin单克隆抗体与三联吡啶钌混合，制得所述N
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MID Osteocalcin试剂Rb；所述缓冲液包括pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的磷酸盐缓冲液或pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的三羟甲基氨基甲烷缓冲液...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦军，谢元东，谢良思，马东钰，王晓宁，
申请(专利权)人：北京联众泰克科技有限公司，
类型：发明
国别省市：