一种用于检测血清糖化白蛋白的试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及体外诊断领域，具体涉及一种用于检测血清糖化白蛋白的试剂盒，包括试剂R1、试剂R2、校准品，试剂R1包括第一缓冲液、生物素标记的抗人糖化白蛋白抗体、FITC标记的抗人糖化白蛋白抗体、第一稳定剂、第一防腐剂以及第一表面活性剂；试剂R2包括第二缓冲液、链霉亲和素修饰胶乳微球、Anti

A kit for detection of serum glycosylated albumin

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测血清糖化白蛋白的试剂盒


[0001]本专利技术涉及体外诊断领域，具体涉及一种用于检测血清糖化白蛋白的试剂盒。

技术介绍

[0002]人体中的葡萄糖与血清蛋白的N
‑
末端发生非酶促的糖基化反应过程中，90％的葡萄糖与血清蛋白链内第189位赖氨酸结合形成高分子的酮胺结构，称为糖化血清蛋白，而其中90％以上为糖化白蛋白(Glycated Albumin,GA)，因此糖化白蛋白可以作为反映糖化血清蛋白的总体水平的标志。
[0003]白蛋白半衰期短(17
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20天)，GA反映测定前2
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3周血糖的平均水平。GA是在GSP(糖化血清蛋白)基础上进行定量测定，利用血清GA与血清白蛋白的百分比来表示GA的水平，去除血清白蛋白水平对检测结果的影响，因此较GSP更精确。GA临床应用于评价短期糖代谢控制情况，辅助鉴别应激性高血糖，筛查糖尿病。已有证据表明GA作为一种重要的糖基化产物，与糖尿病肾病、视网膜病变及动脉粥样硬化等慢性并发症具有良好相关性。
[0004]GA检测方法主要有阴离子交换层析法、高效液相色谱法、酶法等分析法。其中阴离子交换层析法、高效液相色谱法需要对GA进行复杂的样品前处理，同时仪器昂贵，耗资大，不适合临床常规分析。酶法虽好，但检测时需要两步酶解，而应用于全自动生化分析仪时却需要酶解率达到90％以上，这就要求加大酶量，但同时会使试剂粘度加大，出现检测灵敏度降低等影现象，响检测结果，同时还会使稳定性降低，使实际有效期缩短。因此针对上述问题，研发了一种用于检测血清糖化白蛋白的试剂盒。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种用于检测血清糖化白蛋白的试剂盒，该试剂盒灵敏度高、准确度高、稳定性好。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案是：
[0007]一种用于检测血清糖化白蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括：
[0008]试剂R1，所述试剂R1包括第一缓冲液、生物素标记的抗人糖化白蛋白抗体、FITC标记的抗人糖化白蛋白抗体、第一稳定剂、第一防腐剂以及第一表面活性剂；
[0009]试剂R2，所述试剂R2包括第二缓冲液、链霉亲和素修饰胶乳微球、Anti
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FITC修饰胶乳微球、第二稳定剂、螯合剂、第二防腐剂、第二表面活性剂、增溶剂以及促聚剂；
[0010]校准品，所述校准品包括第三缓冲液、人糖化白蛋白、第三稳定剂以及第三防腐剂。
[0011]作为一种改进的技术方案，所述第一缓冲液为磷酸盐缓冲液、TRIS缓冲液、CAPSO缓冲液、MOPS缓冲液、Hepes缓冲液，所述第一缓冲液的浓度为30
‑
500mM，pH为6.0
‑
9.5；所述第二缓冲液为TRIS缓冲液、硼砂
‑
氢氧化钠缓冲液、CAPSO缓冲液、MOPS缓冲液、Hepes缓冲液，所述第二缓冲液的浓度为30
‑
500mM，pH为6.0
‑
9.5；所述第三缓冲液为磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、CAPSO缓冲液、MOPS、Hepes缓冲液，所述第三缓冲液的浓度为30
‑
500mM，pH为
6.0
‑
9.5。
[0012]作为一种改进的技术方案，所述第一稳定剂、第二稳定剂以及第三稳定剂分别为牛血清白蛋白、甘油、乙二醇、丙氨酸、聚氧乙烯
‑8‑
辛基苯基醚、明胶、蔗糖、麦芽糖、海藻糖、硼酸、氮氧自由基哌啶醇中的一种或多种组合；所述第一稳定剂、第二稳定剂或第三稳定剂的浓度为0.01
‑
10％w/v。
[0013]作为一种改进的技术方案，所述第一防腐剂、第二防腐剂或第三防腐剂为叠氮钠、硫柳汞、Proclin
‑
300中的一种或多种，所述第一防腐剂、第二防腐剂或第三防腐剂的浓度为0.05
‑
3％w/v。
[0014]作为一种改进的技术方案，所述第一表面活性剂和第二表面活性剂为乙基苯基聚乙二醇(NP40)、吐温20、十二烷基硫酸钠(SDS)、山梨醇酐单硬脂酸(S
‑
40)、山梨醇酐单硬脂酸(S
‑
60)、聚乙二醇辛基苯基醚
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100、十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱中的一种或多种，所述第一表面活性剂或第二表面活性剂的浓度为0.1
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3.5％w/v。
[0015]作为一种改进的技术方案，所述增溶剂为聚氧乙烯多环苯醚，其浓度为0.5
‑
3.2％w/v；所述螯合剂为EDTA、EGTA、乙二胺、草酸、山梨糖醇中的一种或多种，所述螯合剂的浓度为0.05
‑
2.5％w/v；所述促聚剂为聚乙二醇
‑
6000、聚乙二醇
‑
8000、聚乙二醇
‑
10000、聚乙二醇
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20000中的一种或多种，所述促聚剂的浓度为0.5
‑
4％w/v。
[0016]作为一种改进的技术方案，所述第一防腐剂、所述第二防腐剂以及所述第三防腐剂分别为叠氮钠、硫柳汞、Proclin
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300、苯酚、Krovin600中的一种、两种或两种以上的组合；所述第一防腐剂、第二防腐剂以及第三防腐剂的浓度为0.05
‑
5％w/v。
[0017]作为一种改进的技术方案，所述生物素标记的抗人糖化白蛋白抗体的浓度为1
‑
200μg/ml，所述FITC标记的抗人糖化白蛋白抗体的浓度为1
‑
200μg/ml。
[0018]作为一种改进的技术方案，链霉亲和素(SA)修饰胶乳微球的浓度为0.1
‑
2mg/ml，链霉亲和素(SA)修饰的胶乳微球的粒径为50
‑
200nm；Anti
‑
FITC修饰胶乳微球的浓度为0.1
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2mg/ml，Anti
‑
FITC修饰的胶乳微球的粒径200
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400nm。
[0019]采用了上述技术方案后，本专利技术的有益效果是：
[0020](1)本专利技术引入了SA
‑
生物素
‑
抗体(抗原)
‑
抗原(抗体)
‑
抗体(抗原)
‑
FITC
‑
anti
‑
FITC多重级联放大系统，由于SA结合生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合，结合了胶乳微球的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应，其中一个抗体可以和多个生物素结合，一个生物素分子又可以和四个链霉亲和素分子结合，起到了多级放大作用，达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。FITC能很好的与各种抗体结合，不影响结合后的抗体与抗原结合的特异性，这样结合胶乳微球的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测血清糖化白蛋白的试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括：试剂R1，所述试剂R1包括第一缓冲液、生物素标记的抗人糖化白蛋白抗体、FITC标记的人糖化白蛋白抗体、第一稳定剂、第一防腐剂以及第一表面活性剂；试剂R2，所述试剂R2包括第二缓冲液、链霉亲和素修饰胶乳微球、Anti
‑
FITC修饰胶乳微球、第二稳定剂、螯合剂、第二防腐剂、第二表面活性剂、增溶剂以及促聚剂；校准品，所述校准品包括第三缓冲液、人糖化白蛋白、第三稳定剂以及第三防腐剂，所述人糖化白蛋白的浓度梯度为0g/L、2.87g/L、5.73g/L、11.46g/L、22.93g/L、45.86g/L、91.71g/L。2.根据权利要求1所述的一种用于检测血清糖化白蛋白的试剂盒，其特征在于：所述第一缓冲液为磷酸盐缓冲液、TRIS缓冲液、CAPSO缓冲液、MOPS缓冲液、Hepes缓冲液，所述第一缓冲液的浓度为30
‑
500mM，pH为6.0
‑
9.5；所述第二缓冲液为TRIS缓冲液、硼砂
‑
氢氧化钠缓冲液、CAPSO缓冲液、MOPS缓冲液、Hepes缓冲液，所述第二缓冲液的浓度为30
‑
500mM，pH为6.0
‑
9.5；所述第三缓冲液为磷酸盐缓冲液、甘氨酸缓冲液、CAPSO缓冲液、MOPS、Hepes缓冲液，所述第三缓冲液的浓度为30
‑
500mM，pH为6.0
‑
9.5。3.根据权利要求1所述的一种用于检测血清糖化白蛋白的试剂盒，其特征在于：所述第一稳定剂、第二稳定剂以及第三稳定剂分别为牛血清白蛋白、甘油、乙二醇、丙氨酸、聚氧乙烯
‑8‑
辛基苯基醚、明胶、半乳糖、蔗糖、麦芽糖、海藻糖、硼酸、氮氧自由基哌啶醇中的一种或多种；所述第一稳定剂、第二稳定剂或第三稳定剂的浓度为0.01
‑
10％w/v。4.根据权利要求1所述的一种用于检测血清糖化白蛋白的试剂盒，其特征在于：所述第一防腐剂、第二防腐剂或第三防腐剂为叠氮钠、硫柳汞、Proclin
‑
300中的一种、两种或两种以上的组合，所述第一防腐剂、第二防腐剂或第三防腐剂的浓度为0.05
‑
3％...

【专利技术属性】
技术研发人员：王庆国，张欣，高永亮，宿明明，
申请(专利权)人：潍坊三维生物工程集团有限公司，
类型：发明
国别省市：