一种超敏心肌肌钙蛋白I检测方法和试剂盒技术

本发明专利技术涉及一种超敏心肌肌钙蛋白I(cTnI)检测方法和试剂盒。具体地，本发明专利技术提供了心肌肌钙蛋白I检测试剂盒，其包括用于检测来自受试者样品中心肌肌钙蛋白I的第一组抗体和第二组抗体，其中第一组抗体为标记抗体，第二组抗体为包被抗体，所述抗体选自特异性结合下述cTnI片段的抗体：抗体1:27

【技术实现步骤摘要】
一种超敏心肌肌钙蛋白I检测方法和试剂盒


[0001]本专利技术涉及蛋白检测领域。具体而言，本专利技术涉及超敏心肌肌钙蛋白I的检测方法和试剂盒。

技术介绍

[0002]血液心肌肌钙蛋白I(cTnI:cardiac troponin I)的升高对诊断心肌损伤/坏死(myocardial necrosis)具有非常高的敏感性和特异性。目前cTnI已成为心梗的临床诊断，治疗，监测必不可少的标志物。
[0003]心肌肌钙蛋白在正常人微量存在，但在心肌梗死发生时，心肌细胞毁损造成cTnI释放入血，无论ST段是否抬高，cTnI都会急剧升高，在24小时左右达到高峰，7-10天后下降至正常水平。cTnI升高的幅度与心肌细胞坏死程度有一定程度的关联。如果病人血中cTnI在下降过程中再次升高，意味着心肌再次损伤/坏死。cTnI浓度的变化与AC(Acute Coronary Syndrome)危险程度、治疗决策和预后明确相关。
[0004]hs-cTnI(超敏肌钙蛋白)检测的标准为：正常人第99百分位点处变异系数(CV)≤10％，临床可接受标准为≤20％，表观正常人检出率≥50％。所以和常规cTnI检测相比，hs-cTnI的灵敏度要求非常高，cTnI灵敏度的增加提高了早期AMI检测的检出率。但是在检验灵敏性提高的同时也增加了AMI和其他一些疾病中引起cTnI升高的阳性率，尤其是对于那些可能存在慢性心肌损伤的结构性心脏病患者。然而在大多数案例中，这种慢性心肌损伤一般不会表现出显著hs-cTnI的动态改变。所以，通过系列cTnI检测来判断随着时间变化的ΔcTnI可以有效鉴别AMI和结构性心脏病患者。市面上也不断地涌入大量的POCT产品，而这些产品的性能普遍又达不到超敏的要求，比如检出率低、不能监测病情的发展趋势、灵敏度特异性不够等。因此，专利技术一种能够提高检出率，且能够随时监测心肌梗塞患者血液中cTnI含量的检测方法和试剂盒，对基层医院或者病房尤其重要。

技术实现思路

[0005]专利技术人经过大量理论研究和实验摸索，充分考虑心肌肌钙蛋白I的结构特性，对各种待测超敏肌钙蛋白抗原区间和捕获抗体进行分析研究，并通过大量交叉实验和筛选，获得了能够用于心肌肌钙蛋白I检测的心肌肌钙蛋白I抗原区域组合。专利技术人已经证明针对所选抗原表位区域的抗体出乎意料的能够相互组合用于hs-cTnI的高灵敏度和特异性检测。专利技术人还令人吃惊地发现针对所选抗原表位区域的抗体能够相互补充各自检测的不足，提高检出率，并能够用于动态监测病情的发展趋势，能够随时监测受试者如心肌梗塞患者的cTnI含量，这对基层医院或者病房尤其重要。
[0006]在一些实施方案中，本专利技术可以包括下述一项或多项：
[0007]1.一种心肌肌钙蛋白I检测试剂盒，其包括用于检测来自受试者样品中心肌肌钙蛋白I的第一组抗体和第二组抗体，其中第一组抗体为标记抗体，第二组抗体为包被抗体，其中第一组抗体包括抗体1至抗体4之中的一种、两种或三种的抗体，第二组抗体包括抗体1
至抗体4中除了第一组抗体之外的抗体，其中抗体1至抗体4分别为特异性结合心肌肌钙蛋白I的下述氨基酸片段的抗体：
[0008]抗体1：特异性结合心肌肌钙蛋白I的第27-39位氨基酸片段；
[0009]抗体2：特异性结合心肌肌钙蛋白I的第41-49位氨基酸片段；
[0010]抗体3：特异性结合心肌肌钙蛋白I的第83-92位，优选第87-91位或第85-92位氨基酸片段；
[0011]抗体4：特异性结合心肌肌钙蛋白I的第169-178位氨基酸片段。
[0012]2.项目1所述的试剂盒，其中第一组抗体和第二组抗体选自下组：
[0013]1)第一组抗体包括抗体1，并且第二组抗体包括抗体2、抗体3和抗体4；
[0014]2)第一组抗体包括抗体2，并且第二组抗体包括抗体1、抗体3和抗体4；
[0015]3)第一组抗体包括抗体3，并且第二组抗体包括抗体1、抗体2和抗体4；
[0016]4)第一组抗体包括抗体4，并且第二组抗体包括抗体1、抗体2和抗体3。
[0017]3.项目1或2所述的试剂盒，其中所述抗体的反应效价高于105，包括例如高于106，例如高于107。
[0018]4.项目1-3任一项所述的试剂盒，其中所述标记抗体用可检测标记物标记，例如金属粒子，如胶体金，荧光标记，发色团标记，电子致密标记，化学发光标记，放射性标记，酶标记，例如放射性同位素，荧光团，罗丹明，荧光素酶，荧光素，辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶，葡糖淀粉酶，溶菌酶，糖类氧化酶，葡萄糖氧化酶，半乳糖氧化酶，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，生物素/抗生物素蛋白，生物素/链霉抗生物素蛋白，自旋标记，噬菌体标记，例如吖啶酯标记，例如通过接头如生物素-抗生物素蛋白或生物素-链霉抗生物素蛋白添加荧光标记如吖啶酯标记。
[0019]5.项目1-4任一项所述的试剂盒，其中所述包被抗体连接至固相，例如磁性颗粒，胶乳粒子、微量滴定板、硝酸纤维素膜或微流控芯片，任选地所述试剂盒包括免疫层析试纸条或检测卡。
[0020]6.项目1-5任一项所述的试剂盒，其中所述样品包括健康或病理状态的生物组织、细胞或体液，例如血液样品，例如血浆、血清、血制品。
[0021]7.针对心肌肌钙蛋白I的第一组抗体和第二组抗体的组合，其中第一组抗体和第二组抗体为根据项目1-6中任一项定义的抗体。
[0022]8.项目7所述的第一组抗体和第二组抗体的组合在制备检测心肌肌钙蛋白I的试剂盒中的用途，优选地，其中所述试剂盒用于1)对心肌肌钙蛋白含量进行动态检测，例如用于进行实时监测，和/或2)诊断早期急性心肌损伤，包括例如排除或预测早期急性心肌损伤。
[0023]9.一种制备抗体的方法，所述方法包括：
[0024]1)使用下述氨基酸片段1-4作为抗原或半抗原免疫动物：
[0025]片段1：心肌肌钙蛋白I的第27-39位氨基酸片段；
[0026]片段2：心肌肌钙蛋白I的第41-49位氨基酸片段；
[0027]片段3：心肌肌钙蛋白I的第83-92位，优选第87-91位或第85-92位氨基酸片段；
[0028]片段4：心肌肌钙蛋白I的第169-178位氨基酸片段；和
[0029]2)从所述动物获得分别特异性结合所述片段1-4的抗体。
[0030]10.心肌肌钙蛋白I的第27-39位氨基酸片段，心肌肌钙蛋白I的第41-49位氨基酸片段；心肌肌钙蛋白I的第83-92位，优选第87-91位或第85-92位氨基酸片段和/或心肌肌钙蛋白I的第169-178位氨基酸片段在制备检测心肌肌钙蛋白I的试剂或试剂盒中的应用。
[0031]在一些实施方案中，本专利技术的试剂盒包括心肌肌钙蛋白I(hs-cTnI)检测试剂卡(试纸条)。在一些实施方案中，可以利用免疫荧光技术，将抗体标记在可检测标记如荧光素上，利用双抗夹心法原理检测受试者例如AMI患者中的cTnI。在一些实施方案中，本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种心肌肌钙蛋白I检测试剂盒，其包括用于检测来自受试者样品中心肌肌钙蛋白I的第一组抗体和第二组抗体，其中第一组抗体包括抗体1至抗体4之中的至少一种，第二组抗体包括除第一组抗体之外的抗体，其中抗体1至抗体4分别为特异性结合心肌肌钙蛋白I的下述氨基酸片段的抗体：抗体1：特异性结合心肌肌钙蛋白I的第27-39位氨基酸片段；抗体2：特异性结合心肌肌钙蛋白I的第41-49位氨基酸片段；抗体3：特异性结合心肌肌钙蛋白I的第83-92位，优选第87-91位或第85-92位氨基酸片段；抗体4：特异性结合心肌肌钙蛋白I的第169-178位氨基酸片段。2.权利要求1所述的试剂盒，其中第一组抗体和第二组抗体选自下组：1)第一组抗体包括抗体1，并且第二组抗体包括抗体2、抗体3和抗体4；2)第一组抗体包括抗体2，并且第二组抗体包括抗体1、抗体3和抗体4；3)第一组抗体包括抗体3，并且第二组抗体包括抗体1、抗体2和抗体4；4)第一组抗体包括抗体4，并且第二组抗体包括抗体1、抗体2和抗体3；优选地第一组抗体为标记抗体，第二组抗体为包被抗体。3.权利要求1或2所述的试剂盒，其中所述抗体的反应效价高于105，包括例如高于106，例如高于107。4.权利要求1-3任一项所述的试剂盒，其中所述标记抗体用可检测标记物标记，例如金属粒子，如胶体金，荧光标记，发色团标记，电子致密标记，化学发光标记，放射性标记，酶标记，例如放射性同位素，荧光团，罗丹明，荧光素酶，荧光素，辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶，葡糖淀粉酶，溶菌酶，糖类氧化酶，葡萄糖氧化酶，半乳糖氧化酶，葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，生物素/抗生物素蛋白，生物素/链霉抗生物素蛋白，自旋标记，噬菌体标记...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘丽萍，于鸫，李斌，迟晨，何智丹，黄春连，王凯，李文静，覃素妮，卢盛萍，李然，
申请(专利权)人：广东唯实生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：