一种SARS-Cov-2检测方法和试剂盒技术

本发明专利技术涉及一种SARS

【技术实现步骤摘要】
一种SARS
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Cov
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2检测方法和试剂盒
[0001]优先权声明
[0002]本申请要求申请号为202111064565.2，申请日为2021年9月10日，专利技术名称为“一种SARS
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Cov
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2检测方法和试剂盒”的中国专利技术专利申请的优先权，其全部内容通过引用并入本文中。


[0003]本专利技术涉及蛋白检测领域。具体而言，本专利技术涉及SARS
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Cov
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2的检测方法和试剂盒。

技术介绍

[0004]目前确诊新型冠状病毒感染的主要检测方法有核酸检测和基于抗原
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抗体免疫检测方法；核酸检测方法主要为荧光RT
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PCR技术，抗原
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抗体免疫检测的方法分为针对病毒抗体的检测和针对病毒抗原的检测。抗体检测试剂是检测血清中由病毒进入人体后刺激人体产生的IgM或IgG抗体，IgM抗体出现较早，IgG抗体出现较晚。病毒抗原检测主要是检测病毒表面的一些蛋白质如S蛋白。如何找到特异性的抗原表位肽对于检测开发基于抗体的新冠检测方法至关重要。
[0005]核酸检测具有早期诊断、灵敏度和特异性高等特点，是确诊新型冠状病毒感染的“金标准”。但是受样本采集、RNA提取及检测设备条件要求较高的影响，容易出现假阴性，因此急需快捷的免疫学检测方法作为核酸检测的补充。有研究表明，新冠总抗体和核酸协同检测可显著提高新冠病毒感染早期诊断的灵敏度，可以有效弥补核酸检测假阴性容易造成漏诊的缺点。
[0006]SARS
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Cov
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2的结构基因组29883bp，基因组中包括了14个ORF框，较大的蛋白分子包括以下蛋白的区域，N：核衣壳蛋白(简称N蛋白)；S：Spike蛋白；M：膜蛋白；HE：血凝素酯酶；E：包膜蛋白。N蛋白也是新冠病毒感染过程中最丰富的病毒结构蛋白，感染后人细胞会产生强烈的免疫反应性，且基因序列相对保守稳定，与S蛋白比较，N蛋白上随着时间推移产生的突变较少，因为其良好的稳定性，国内外诊断(IVD)公司开发的以N蛋白做为主要靶标的抗原检测试剂盒，用于病例筛查和疫情监控；但由于流行的突变株上的N蛋白上也出现了位点突变，作为新冠抗原检测试剂盒的主靶标，N蛋白上发生的变异可能对试剂盒灵敏度造成检出率影响，因此，补充靶标位点，而非变异株的区段位点，目前看流行性突变株的位点突变，试剂盒主靶标位点均不受影响，且还能补充一部分灵敏度，提高病毒的检出率。

技术实现思路

[0007]本专利技术提供一种抗体组合，包含第一组抗体和第二组抗体，所述第一组抗体包括选自结合SARS
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Cov
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2的N蛋白氨基酸片段44
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180的抗体1，所述第二组抗体包括选自结合SARS
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Cov
‑
2的N蛋白氨基酸片段44
‑
180的抗体2，所述抗体1和所述抗体2可以是相同的抗体也可以是不同的抗体。
[0008]可选地，所述第一组抗体还包括抗体3
‑
抗体6中的至少一种。
[0009]可选地，所述第二组抗体还包括抗体3
‑
抗体6中的至少一种。
[0010]可选地，所述第一组抗体还包括抗体4或抗体5，第二组抗体还包括抗体6。
[0011]抗体3：结合N蛋白氨基酸片段50
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107；
[0012]抗体4：结合N蛋白氨基酸片段1
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43；
[0013]抗体5：结合N蛋白氨基酸片段248
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361；
[0014]抗体6：结合N蛋白氨基酸片段74
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105。
[0015]可选地，所述抗体的反应效价高于105。
[0016]可选地，所述第一组抗体用于标记，第二组抗体用于包被；或第二组抗体用于标记，第一组抗体用于包被。
[0017]可选地，所述用于标记的抗体用可检测标记物标记，例如金属粒子，如胶体金，荧光标记，发色团标记，电子致密标记，化学发光标记，放射性标记，酶标记，例如放射性同位素，荧光团，罗丹明，荧光素酶，荧光素，辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，β
‑
半乳糖苷酶，葡糖淀粉酶，溶菌酶，糖类氧化酶，葡萄糖氧化酶，半乳糖氧化酶，葡萄糖
‑6‑
磷酸脱氢酶，生物素/抗生物素蛋白，自旋标记，噬菌体标记，例如吖啶酯标记，例如通过接头如生物素
‑
亲和素添加荧光标记如吖啶酯标记。
[0018]可选地，所述用于包被的抗体连接至固相，例如磁性颗粒，胶乳粒子、ELISA板、微量滴定板、硝酸纤维素膜或微流控芯片。
[0019]可选地，所述抗体1的重链互补决定区VH
‑
CDR1包括SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列，重链互补决定区VH
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CDR2包括SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列，重链互补决定区VH
‑
CDR3包括SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列；所述抗体1的轻链互补决定区VL
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CDR1包括SEQ ID NO:10所示的氨基酸序列，轻链互补决定区VL
‑
CDR2包括SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列，轻链互补决定区VL
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CDR3包括SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列。
[0020]可选地，所述抗体1重链可变区包括SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列，所述抗体1轻链可变区包括SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列。
[0021]可选地，所述抗体1重链包括SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列，所述抗体1轻链包括SEQ ID NO:20所示的氨基酸序列。
[0022]可选地，所述抗体1与表位1结合，所述表位1与包含SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:16的重链可变区以及SEQ ID NO:17的轻链可变区的抗体或者与包含SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:19的重链以及SEQ ID NO:20的轻链的抗体所结合的表位相同。
[0023]可选地，所述抗体2的重链互补决定区VH
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CDR1包括SEQ ID NO:21或SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列，重链互补决定区VH
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CDR2包括SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列，重链互补决定区VH
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CDR3包括SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列；所述抗体2的轻链互补决定区VL
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CDR1包括SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:28所示的氨基酸序列，轻链互补决定区VL
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CDR2包括SEQ ID NO:25所示的氨基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗体组合，其特征在于，包含第一组抗体和第二组抗体，所述第一组抗体包括选自结合SARS
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Cov
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2的N蛋白氨基酸片段44
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180的抗体1，所述第二组抗体包括选自结合SARS
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Cov
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2的N蛋白氨基酸片段44
‑
180的抗体2，抗体1和抗体2可以是相同的抗体也可以是不同的抗体；优选地，所述第一组抗体还包括抗体3
‑
抗体6中的至少一种；优选地，所述第二组抗体还包括抗体3
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抗体6中的至少一种；优选地，所述第一组抗体或所述第二组抗体还包括抗体3；优选地，所述第一组抗体还包括抗体4或抗体5，所述第二组抗体还包括抗体6；抗体3结合N蛋白氨基酸片段50
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107；抗体4结合N蛋白氨基酸片段1
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43；抗体5结合N蛋白氨基酸片段248
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361；抗体6结合N蛋白氨基酸片段74
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105。2.根据权利要求1所述的抗体组合，其特征在于，所述抗体的反应效价高于105。3.根据权利要求1或2所述的抗体组合，其特征在于，所述第一组抗体用于标记，第二组抗体用于包被；或第二组抗体用于标记，第一组抗体用于包被。4.根据权利要求3所述的抗体组合，其特征在于，所述用于标记的抗体用可检测标记物标记，所述标记物包括：金属粒子，如胶体金，荧光标记，发色团标记，电子致密标记，化学发光标记，放射性标记，酶标记，例如放射性同位素，荧光团，罗丹明，荧光素酶，荧光素，辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶，β
‑
半乳糖苷酶，葡糖淀粉酶，溶菌酶，糖类氧化酶，葡萄糖氧化酶，半乳糖氧化酶，葡萄糖
‑6‑
磷酸脱氢酶，生物素/抗生物素蛋白，自旋标记，噬菌体标记，例如吖啶酯标记，例如通过接头如生物素
‑
亲和素添加荧光标记如吖啶酯标记中的一种或多种。5.根据权利要求3所述的抗体组合，其特征在于，所述用于包被的抗体连接至固相；所述固相为：磁性颗粒，胶乳粒子、ELISA板、微量滴定板、硝酸纤维素膜或微流控芯片中的一种。6.根据权利要求1
‑
5任一项所述的抗体组合，其特征在于，所述抗体1选自以下(1)至(4)所述抗体的任一种：(1)所述抗体1的重链互补决定区VH
‑
CDR1包括SEQ ID NO：7或SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列，重链互补决定区VH
‑
CDR2包括SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列，重链互补决定区VH
‑
CDR3包括SEQ ID NO：9或SEQ ID NO:14所示的氨基酸序列；所述抗体1的轻链互补决定区VL
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CDR1包括SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列，轻链互补决定区VL
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CDR2包括SEQ ID NO：11所示的氨基酸序列，轻链互补决定区VL
‑
CDR3包括SEQ ID NO：12所示的氨基酸序列；(2)所述抗体1的重链可变区包括SEQ ID NO：15或SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列，所述抗体1的轻链可变区包括SEQ ID NO：17所示的氨基酸序列；(3)所述抗体1重链包括SEQ ID NO：18或SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列，所述抗体1轻链包括SEQ ID NO：20所示的氨基酸序列；(4)所述抗体1与表位1结合，所述表位1与(2)或(3)所述的抗体所结合的表位相同。7.根据权利要求1
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5任一项所述的抗体组合，其特征在于，所述抗体2选自以下(a)至(d)所述抗体的任一种：(a)所述抗体2的重链互补决定区VH
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CDR1包括SEQ ID NO：21或SEQ ID NO:27所示的氨
基酸序列，重链互补决定区VH
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CDR2包括SEQ ...

【专利技术属性】
技术研发人员：卢盛萍，李婷，刘丽萍，刘春艳，易嘉乐，
申请(专利权)人：广东唯实生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：