一种用于检测心脏型脂肪酸结合蛋白的试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及体外诊断领域，具体涉及一种用于检测心脏型脂肪酸结合蛋白的试剂盒，包括试剂R1、试剂R2和校准品，试剂R1包括第一缓冲液、生物素标记的抗人H

A kit for detecting heart type fatty acid binding protein

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测心脏型脂肪酸结合蛋白的试剂盒


[0001]本专利技术涉及体外诊断领域，具体涉及一种用于检测心脏型脂肪酸结合蛋白的试剂盒。

技术介绍

[0002]急性冠脉综合症(ACS)是冠心病中重要的急性事件之一，它分为急性心肌梗死(AMI)、不稳定心绞痛(UA)和心源性猝死(SCD)。心脏标志物在ACS的诊断及预后过程中扮演重要的角色，由于ACS具有发病急、危害大的特点，因此选出特异性高的早期标志物，提早诊断及时治疗对于ACS患者具有重要意义。常用心脏标志物有肌钙蛋白(cTn)，包括(cTnI和cTnT)，肌红蛋白(MYO)以及肌酸激酶同工酶(CK
‑
MB)、心型脂肪酸结合蛋白(Heart
‑
Type Fatty Acid Binding Protein，H
‑
FABP)等。其中MYO特异性较差，出现较早；CK
‑
MB、cTnI在ACS的早期表现出灵敏度较低，出现时间较晚；心脏型脂肪酸结合蛋白(H
‑
FABP)具有高度心脏特异性，当心肌缺血性损伤出现后，H
‑
FABP在胸痛发作后1
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3h于血液中被发现，6
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8h达到峰值，在24
‑
30h内恢复正常，如此迅速恢复至正常水平得益于高肾清除率，因此，H
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FABP被认为更适合作为心肌损伤的早期标志物，同时还是理想的心肌梗死复发诊断标志物。尽管H
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FABP的释放特点与肌红蛋白相似，但其心肌特异性是肌红蛋白的15
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20倍，因此H
‑
FABP是更有效的心肌损伤标志物。
[0003]目前H
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FABP的检测方法主要有酶联免疫法、荧光免疫层析法、化学发光法、胶体硒标记法、邻位连接技术、胶体金、乳胶增强免疫比浊法等，其中酶联免疫法、荧光免疫层析法、化学发光法、胶体硒标记法、邻位连接技术、胶体金等存在灵敏度低、检测时间长、成本高、稳定性差等缺点；乳胶增强免疫比浊法是测定血清中H
‑
FABP浓度的常用方法，但是现在市场的的乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒灵敏度差、线性性不好等问题。因此有必要开发一种用于检测心脏型脂肪酸结合蛋白的试剂盒。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种用于检测心脏型脂肪酸结合蛋白的试剂盒，该试剂盒灵敏度高、准确度高、线性范围宽。
[0005]为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案是：
[0006]一种用于检测心脏型脂肪酸结合蛋白的试剂盒，所述试剂盒包括：
[0007]试剂R1，所述试剂R1包括第一缓冲液、生物素标记的抗人H
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FABP抗体、FITC标记的抗人H
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FABP抗体、第一稳定剂、第一防腐剂、表面活性剂；
[0008]试剂R2，所述试剂R2包括第二缓冲液、链霉亲和素修饰胶乳微球、anti
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FITC修饰胶乳微球、盐离子化合物、第二稳定剂、螯合剂、第二防腐剂；
[0009]校准品，所述校准品包括第三缓冲液、H
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FABP重组蛋白、第三稳定剂、第三防腐剂，所述H
‑
FABP重组蛋白的浓度梯度为160ng/ml、120ng/ml、60ng/ml、20ng/ml、10ng/ml、5ng/ml、0ng/ml。
[0010]作为一种改进的技术方案，所述第一缓冲液的pH为7.0
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8.0，浓度为20
‑
150mM；所述第一缓冲液为磷酸盐缓冲液、TRIS缓冲液、MES缓冲液、Hepes缓冲液、MOPSO缓冲液或DIPSO缓冲液；所述第二缓冲液的pH为6.5
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9.5，浓度为20
‑
100mM；所述第二缓冲液为磷酸盐缓冲液、巴比妥缓冲液、甘氨酸缓冲液、TRIS缓冲液、MES缓冲液、Hepes缓冲液、MOPSO缓冲液或DIPSO缓冲液；所述第三缓冲液的pH为6.5
‑
9.5，浓度为60
‑
150mM；所述第三缓冲液为磷酸盐缓冲液、巴比妥缓冲液、甘氨酸缓冲液、TRIS缓冲液、MES缓冲液、Hepes缓冲液、MOPSO缓冲液或DIPSO缓冲液。
[0011]作为一种改进的技术方案，所述第一稳定剂、第二稳定剂以及第三稳定剂分别为所述第一稳定剂、第二稳定剂以及第三稳定剂分别为山梨醇、乙二醇、乳糖、甘氨酸、肌氨酸、甘露醇、PVA、PVP、偏钒酸钠、氯化镨、亚精胺、CHAPS中的一种、两种或两种以上的组合；所述稳定剂的浓度为0.1
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5％w/v。
[0012]作为一种改进的技术方案，所述表面活性剂为聚乙二醇6000、乙基苯基聚乙二醇、吐温20、十二烷基硫酸钠、山梨醇酐单硬脂酸、聚乙二醇辛基苯基醚
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100、十二烷基羟丙基磷酸酯甜菜碱、烷基葡糖苷、脂肪酸山梨坦、十六烷基三甲基溴化铵中的一种、两种或两种以上的组合；所述表面活性剂的浓度为0.1
‑
5％w/v。
[0013]作为一种改进的技术方案，所述第一防腐剂、所述第二防腐剂以及所述第三防腐剂分别为叠氮钠、Proclin
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300、Krovin600、Kathon、庆大霉素中的一种、两种或两种以上的组合；所述第一防腐剂、第二防腐剂以及第三防腐剂的浓度为0.05
‑
5％w/v。
[0014]作为一种改进的技术方案，所述螯合剂为EDTA、乙二胺、草酸、山梨糖醇中的一种、两种或两种以上的组合，所述螯合剂的浓度为1
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10mM；所述盐离子化合物为氯化钠、氯化钙或者两者的组合，所述盐离子化合物的浓度为10
‑
50mM。
[0015]作为一种改进的技术方案，所述生物素标记的抗人HFABP抗体的浓度为1
‑
200μg/ml，FITC标记的抗人H
‑
FABP抗体的浓度为1
‑
200μg/ml。
[0016]作为一种改进的技术方案，链霉亲和素(SA)修饰胶乳微球的浓度为0.1
‑
1mg/mL，所述链霉亲和素(SA)修饰的胶乳微球粒径为200
‑
400nm；所述anti
‑
FITC修饰胶乳微球的浓度为0.1
‑
1mg/mL，所述anti
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FITC修饰的胶乳微球的球径为50
‑
200nm。
[0017]采用了上述技术方案后，本专利技术的有益效果是：
[0018](1)本专利技术引入了SA
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生物素
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抗体(抗原)
‑
抗原(抗体)
‑
抗体(抗原)
‑
FITC
‑
anti
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测心脏型脂肪酸结合蛋白的试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括：试剂R1，所述试剂R1包括第一缓冲液、生物素标记的抗人H
‑
FABP抗体、FITC标记的抗人H
‑
FABP抗体、第一稳定剂、第一防腐剂、表面活性剂；试剂R2，所述试剂R2包括第二缓冲液、链霉亲和素修饰胶乳微球、anti
‑
FITC修饰胶乳微球、盐离子化合物、第二稳定剂、螯合剂、第二防腐剂；校准品，所述校准品包括第三缓冲液、H
‑
FABP重组蛋白、第三稳定剂、第三防腐剂，所述H
‑
FABP重组蛋白的浓度梯度为160ng/ml、120ng/ml、60ng/ml、20ng/ml、10ng/ml、5ng/ml、0ng/ml。2.根据权利要求1所述的一种用于检测心脏型脂肪酸结合蛋白的试剂盒，其特征在于：所述第一缓冲液的pH为7.0
‑
8.0，浓度为20
‑
150mM；所述第一缓冲液为磷酸盐缓冲液、TRIS缓冲液、MES缓冲液、Hepes缓冲液、MOPSO缓冲液或DIPSO缓冲液；所述第二缓冲液的pH为6.5
‑
9.5，浓度为20
‑
100mM；所述第二缓冲液为磷酸盐缓冲液、巴比妥缓冲液、甘氨酸缓冲液、TRIS缓冲液、MES缓冲液、Hepes缓冲液、MOPSO缓冲液或DIPSO缓冲液；所述第三缓冲液的pH为6.5
‑
9.5，浓度为50
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150mM；所述第三缓冲液为磷酸盐缓冲液、巴比妥缓冲液、甘氨酸缓冲液、TRIS缓冲液、MES缓冲液、Hepes缓冲液、MOPSO缓冲液或DIPSO缓冲液。3.根据权利要求1所述的一种用于检测心脏型脂肪酸结合蛋白的试剂盒，其特征在于：所述第一稳定剂、第二稳定剂以及第三稳定剂分别为山梨醇、乙二醇、乳糖、甘氨酸、肌氨酸、甘露醇、PVA、PVP、偏钒酸钠、氯化镨、亚精胺、CHAPS中的一种或多种；所述稳定剂的浓度为0.1
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【专利技术属性】
技术研发人员：王庆国，张欣，高永亮，宿明明，
申请(专利权)人：潍坊三维生物工程集团有限公司，
类型：发明
国别省市：