用于白细胞介素6检测的组合物及应用和磁微球电化学发光免疫检测试剂盒与检测方法技术

本发明专利技术涉及电化学检测领域，特别涉及用于白细胞介素6(IL‑6)检测的组合物及应用和磁微球电化学发光免疫检测试剂盒与检测方法。本发明专利技术采用方法为电化学发光法，采用吡啶钌作为化学发光标记物具有明显优势，主要表现在：灵敏度更好，稳定性更好，钌是金属离子，分子量小，不影响抗体的空间位阻。生产过程短，重复性好，检测范围宽。电化学发光反应可控，降低信号采集难度。

【技术实现步骤摘要】
用于白细胞介素6检测的组合物及应用和磁微球电化学发光免疫检测试剂盒与检测方法
本专利技术涉及电化学检测领域，特别涉及用于白细胞介素6(IL-6)检测的组合物，该组合物的应用，包含该组合物的磁微球电化学发光免疫检测试剂盒，以及基于该组合物或试剂盒的磁微球电化学发光免疫检测方法。
技术介绍
IL-6是一种功能广泛的多效性细胞因子。最初被称为β2-干扰素，浆细胞瘤生长因子和干细胞刺激因子。后来被称为人B细胞刺激因子2(BSF2)。通过大量的研究发现这种蛋白不仅对B细胞有生理活性作用，对T细胞、造血干细胞、肝细胞和脑细胞均有生理活性作用。IL-6为单基因表达，分子量约为22-27kDa。在发生内外伤、外科手术，应激反应，感染，脑死亡，肿瘤产生以及其他情况的急性炎症反应过程中IL-6会快速生成。手术病人的IL-6浓度能过预示是否会有手术并发症的产生。连续监测重症监护(ICU)病人血清或血浆中IL-6的水平能有效的评估系统性炎症反应综合征(SIRS)的严重程度，脓毒血症以及脓毒血症性休克的预后情况。IL-6还能作为脓毒血症的早期警告指标。IL-6并且在慢性炎症反应(如类风湿关节炎)中扮演着重要角色。到目前为止，用于检测人血清中IL-6的方法主要有：酶联免疫法(ELISA)和酶促磁微粒化学发光。本专利技术采用方法为电化学发光法，采用吡啶钌作为化学发光标记物具有明显优势，主要表现在：灵敏度更好，稳定性更好，钌是金属离子，分子量小，不影响抗体的空间位阻。生产过程短，检测范围宽，重复性好。电化学发光反应可控，降低信号采集难度。
技术实现思路
本专利技术提供了一种用于白细胞介素6(IL-6)检测的组合物及应用和磁微球电化学发光免疫检测试剂盒与检测方法，具有生产效率高、检测时间短、适用于全自动检测，具有更高的灵敏度、线性范围宽等优点。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了用于白细胞介素6(IL-6)检测的组合物，包括IL-6试剂Ra、IL-6试剂Rb、链霉亲和素超顺磁微球；所述IL-6试剂Ra包括含生物素标记的抗IL-6单克隆抗体；所述IL-6试剂Rb包括含三联吡啶钌标记的抗IL-6单克隆抗体；所述链霉亲和素超顺磁微球包括表面包裹带有链霉亲和素的超顺磁微球。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述超顺磁微球的粒径在1.5～5.0μm。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述IL-6试剂Ra中，每个抗体分子表面的生物素分子标记量为2～5个；所述IL-6试剂Rb中，每个抗体分子表面的钌分子标记量为2～10个。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述IL-6试剂Ra的制备方法为：在缓冲液存在的条件下，取抗IL-6单克隆抗体与生物素混合，制得所述IL-6试剂Ra；所述缓冲液包括pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的磷酸盐缓冲液或pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的三羟甲基氨基甲烷缓冲液。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述IL-6试剂Ra的制备方法为：取2.0mg的用于标记生物素白细胞介素6(IL-6)抗体，使用脱盐柱PD10更换缓冲液为磷酸盐缓冲液(pH＝7.8)，使用超滤管浓缩后调整浓度为2.0mg/mL，加入80μg的生物素(使用DMF溶解)，混匀反应30分钟，使用脱盐柱PD10去除未标记的生物素。使用含1％的牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)稀释标记生物素的白细胞介素6(IL-6)抗体到1mg/L，作为IL-6试剂Ra。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述IL-6试剂Rb的制备方法为：在缓冲液存在的条件下，取抗IL-6单克隆抗体与三联吡啶钌混合，制得所述IL-6试剂Rb；所述缓冲液包括pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的磷酸盐缓冲液或pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的三羟甲基氨基甲烷缓冲液。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述IL-6试剂Rb的制备方法为：取2.0mg的用于标记三联吡啶钌的白细胞介素6(IL-6)抗体，使用脱盐柱PD10更换缓冲液为磷酸盐缓冲液(pH＝7.8)，使用超滤管浓缩后调整浓度为2.0mg/mL，加入30-80μg的琥珀酰胺三联吡啶钌(使用DMF溶解)，混匀反应30分钟，使用脱盐柱PD10去除未标记的钌。使用含1％的牛血清白蛋白的磷酸盐缓冲液(pH＝7.4)稀释标记钌的白细胞介素6(IL-6)抗体到1mg/L，作为IL-6试剂Rb。在本专利技术的一些具体实施方案中，本专利技术提供的组合物还包括定标品和/或清洗液；所述清洗液包括浓度150～200mmol/L的三丙胺和浓度200～400mmol/L的磷酸盐缓冲液；或浓度80～100mmol/L的二丁基乙醇胺和浓度200～400mmol/L的磷酸盐缓冲液。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述清洗液包括但不限于三丙胺清洗液、二丁基乙醇胺清洗液、管路清洗液。在本专利技术的一些更具体的实施方案中，所述清洗液包括浓度180mmol/L的三丙胺和浓度300mmol/L的磷酸盐缓冲液；或浓度90mmol/L的二丁基乙醇胺和浓300mmol/L的磷酸盐缓冲液。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述IL-6试剂Ra、所述IL-6试剂Rb与所述链霉亲和素超顺磁微球的体积比为(50～80)：(50～80)：(20～40)。在上述研究的基础上，本专利技术还提供了所述的组合物在制备白细胞介素6(IL-6)的磁微球电化学发光免疫检测试剂盒中的应用。本专利技术还提供了白细胞介素6(IL-6)的磁微球电化学发光免疫检测试剂盒，包括所述的组合物以及检测可接受的试剂。本专利技术还提供了白细胞介素6(IL-6)的磁微球电化学发光免疫检测方法，该方法基于所述的组合物或所述的试剂盒，包括如下步骤：步骤1：取样本，依次加入IL-6试剂Ra和IL-6试剂Rb，于37℃孵育8～12min，最后加入链霉亲和素超顺磁微球，于37℃孵育8～12min，获得反应液；其中，样本、IL-6试剂Ra、IL-6试剂Rb与链霉亲和素超顺磁微球的体积比为15：(50～80)：(50～80)：(20～40)；步骤2：将所述反应液用磁铁吸附；步骤3：取清洗液，清洗未结合到超顺磁微球上的标记钌的抗体和样本，通电，在所述清洗液存在的条件下三联吡啶钌发光；步骤4：记录发光值，建立标准曲线，根据建立的标准曲线，获得样本中IL-6的浓度。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述孵育为于37℃孵育9min。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述检测方法具体为：步骤1：取样本30μl加入反应管中，再依次加入IL-6试剂Ra75μl和IL-6试剂Rb65μl，于37℃孵育9min，最后加入链霉亲和素超顺磁微球30μl，于37℃孵育9min；步骤2：将孵育反应完成的反应管通过吸液钢针吸入电化学流通池，并被流通池的磁铁吸附；步骤3：吸液钢针吸取清洗液(三丙胺或DBAE)，未结合到超顺磁微球上的标记钌的抗体和样本被清洗后，流通池加电，在三丙胺或D本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于白细胞介素6(IL-6)检测的组合物，其特征在于，包括IL-6试剂Ra、IL-6试剂Rb、链霉亲和素超顺磁微球；/n所述IL-6试剂Ra包括含生物素标记的抗IL-6单克隆抗体；/n所述IL-6试剂Rb包括含三联吡啶钌标记的抗IL-6单克隆抗体；/n所述链霉亲和素超顺磁微球包括表面包裹带有链霉亲和素的超顺磁微球。/n

【技术特征摘要】
1.用于白细胞介素6(IL-6)检测的组合物，其特征在于，包括IL-6试剂Ra、IL-6试剂Rb、链霉亲和素超顺磁微球；
所述IL-6试剂Ra包括含生物素标记的抗IL-6单克隆抗体；
所述IL-6试剂Rb包括含三联吡啶钌标记的抗IL-6单克隆抗体；
所述链霉亲和素超顺磁微球包括表面包裹带有链霉亲和素的超顺磁微球。


2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述超顺磁微球的粒径在1.5～5.0μm。


3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述IL-6试剂Ra中，每个抗体分子表面的生物素分子标记量为2～5个；所述IL-6试剂Rb中，每个抗体分子表面的钌分子标记量为2～10个。


4.如权利要求1至3任一项所述的组合物，其特征在于，所述IL-6试剂Ra的制备方法为：在缓冲液存在的条件下，取抗IL-6单克隆抗体与生物素混合，制得所述IL-6试剂Ra；所述缓冲液包括pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的磷酸盐缓冲液或pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的三羟甲基氨基甲烷缓冲液。


5.如权利要求1至3任一项所述的组合物，其特征在于，所述IL-6试剂Rb的制备方法为：在缓冲液存在的条件下，取抗IL-6单克隆抗体与三联吡啶钌混合，制得所述IL-6试剂Rb；所述缓冲液包括pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的磷酸盐缓冲液或pH＝7.4～7.8、20mM～200mM的三羟甲基氨基甲烷缓冲液。


6.如权利要求1至3任一项所述的组合物，其特征在于，还包括定标品和/或清洗液...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦军，谢元东，谢良思，林晓纯，王晓宁，
申请(专利权)人：北京联众泰克科技有限公司，江苏优尼泰克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11