一种融合蛋白体外生物学活性的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种融合蛋白体外生物学活性的检测方法，该方法采用纤维蛋白或者明胶作为包被液，对细胞培养瓶进行包被，采用AlarmarBlue作为显色液，克服了原代细胞长势差、信噪比低、四参数曲线拟合不好等难点，有效提高了融合蛋白体外生物学活性的检测方法的准确度。

【技术实现步骤摘要】
一种融合蛋白体外生物学活性的检测方法
本专利技术涉及蛋白质医药生物工程与
，涉及一种VEGFR-Fc融合蛋白体外生物学活性的检测方法。
技术介绍
血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)是目前已知的专属性最高、活性最强的血管生成因子，其可以促进血管内皮细胞的增殖和迁移，而肿瘤的生长依赖新生血管为肿瘤细胞提供所需的营养，研究表明，VEGF在肿瘤的发展过程中全程表达，因此VEGF可作为肿瘤治疗的重要靶点之一。VEGFR-Fc融合蛋白是一种由人VEGF受体的胞外区序列与人IgG1Fc段融合形成的融合蛋白。VEGFR-Fc可以有效阻断新生血管的生成，从而使肿瘤组织由于缺乏血管的营养补给而不能正常生长。因此准确性好、灵敏度高的VEGFR-Fc融合蛋白类药物的生物学活性检测方法的建立是十分必要的。
技术实现思路
目前常用的VEGFR-Fc融合蛋白生物活性的检测方法有荧光素酶报告基因法以及HUVEC细胞法。报告基因法根据信号通路来模拟VEGF的作用原理进行实验设计，其不如HUVEC本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种VEGFR-Fc融合蛋白体外生物学活性的检测方法，该方法包括采用包被液对细胞培养瓶进行包被，使用AlarmarBlue进行显色，其中包被液是纤维蛋白或者明胶。/n

【技术特征摘要】
1.一种VEGFR-Fc融合蛋白体外生物学活性的检测方法，该方法包括采用包被液对细胞培养瓶进行包被，使用AlarmarBlue进行显色，其中包被液是纤维蛋白或者明胶。


2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
（1）包被：吸取包被液至细胞培养瓶，使其完全覆盖细胞培养瓶底；
（2）细胞复苏、培养和传代：取HUVEC细胞进行复苏，次日换液，进行传代培养，使用胰酶消化细胞，离心后重悬细胞并调整至合适的细胞密度，放入预先包被的细胞培养瓶中进行培养；
（3）细胞铺板、饥饿培养：将处于对数生长期的HUVEC细胞使用胰酶消化，离心后重悬细胞并计数调整至合适的细胞密度铺至96孔细胞培养板进行培养；
（4）参比品及供试品的制备：按照参比品和供试品溶液浓度进行稀释；
（5）rhVEGF165溶液的制备：将rhVEGF165稀释至一定的浓度；
（6）样品与rhVEGF165作用：吸取稀释后相应浓度的参比品和供试品分别与rhVEGF165等体积混匀，37℃±2℃，5%CO2培养箱中孵育；
（7）HUVEC细胞刺激：取上述作用后的样品与rhVEGF165混合物，分别吸取不同浓度梯度的混合溶液加至饥饿培养的96孔细胞培养板进行孵育；
（8）显色：每孔加入显色液，孵育一段时间；
（9）读板：取出96孔板，在适当波长下读数并根据得到的IC50值计算供试品的生物学活性。
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【专利技术属性】
技术研发人员：胡炳旭，何景昌，刘福星，王鑫，刘利波，
申请(专利权)人：北京泰德制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11