用于血清半乳糖凝集素-3检测的磁微球电化学发光免疫检测试剂盒及其该试剂盒制备制造技术

本发明专利技术涉及电化学检测领域，特别涉及用于血清半乳糖凝集素

【技术实现步骤摘要】
用于血清半乳糖凝集素
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3检测的磁微球电化学发光免疫检测试剂盒及其该试剂盒制备


[0001]本专利技术涉及电化学检测领域，特别涉及用于血清半乳糖凝集素
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3检测的磁微球电化学发光免疫检测试剂盒及其该试剂盒制备。

技术介绍

[0002]慢性心力衰竭(chronicheartfailure，CHF)是一种以心室射血功能严重受损、外周血流分布异常为主要特征的临床综合征，其病理过程主要表现为心脏重塑和心肌纤维化，因其发病率高、预后不良导致该病死亡率较高。
[0003]血清Gal
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3是可溶性β
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半乳糖苷结合凝集素，是一个相对分子质量为30kDa、与G
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半乳糖苷结合的蛋白，参与多种生物活性，主要已知的是其介导肿瘤生长，侵袭和转移，同时它也与年龄的增长，糖尿病肾病，纤维变性疾病如肝纤维化、肾纤维化、特发性肺纤维化和慢性胰腺炎相关。与心脏纤维化和心肌重构相关，能促进心脏成纤维细胞增殖，胶原沉积和心室功能障碍。
[0004]Gal
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3作为炎性反应的重要介质，在心肌重构和心力衰竭的病理发展过程中有重要作用，心力衰竭患者血浆Gal
‑
3水平表达越高，越易进展为心力衰竭恶化，住院率与病死率也越高。血清Gal
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3能促进心肌巨噬细胞的活化和迁移，加速成纤维细胞增殖以及胶原蛋白沉积，导致心脏重塑以及心肌纤维化，而心脏重塑和心肌纤维化正是影响慢性心力衰竭的重要决定性因素。血清Gal
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3在人体组织器官中表达的普遍性，使血清Gal
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3产生不受特定条件的限制。因此近年来，国内外逐渐将血清Gal
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3作为心力衰竭的重要诊断指标。目前，Gal
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3已成为欧美国家临床诊断与评估心力衰竭患者近期预后的重要指标。除此之外，Gal
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3还可用于各种脏器的纤维化，包括且不限于：心脏、肾脏、肝脏等。
[0005]到目前为止，虽然认为Gal
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3可用于动态或急性心衰患者的附加风险分层，但迄今为止，Gal
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3很少用于常规临床患者检查。用于检测人血清中血清半乳糖凝集素
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3(Gal
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3)的方法主要有：酶联免疫法(ELISA)和酶促磁微粒化学发光。Gal
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3分子量较小，且在各个组织器官中都有，正常人当中也有，因此其检测数据基础数据较高，现有技术及产品检测的重复性、灵敏度、特异性、稳定性和检测时间长等不能满足商业化的临床诊断的需要。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术提供了用于血清半乳糖凝集素
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3检测的磁微球电化学发光免疫检测试剂盒及其该试剂盒制备。本专利技术提供了组合物及其在制备血清半乳糖凝集素
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3(Gal
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3)磁微粒电化学发光检测试剂盒中的应用。本专利技术通过实验发现将抗体
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抗原反应的高度特异性与三联吡啶钌发光的高度灵敏性结合起来，利用三联吡啶钌在DBAE下产生的光子以检测产物浓度，具有灵敏度更高、反应时间短、操作简单、抗干扰性高的特点。
[0007]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0008]本专利技术提供了组合物，包括含有生物素标记的可特异性结合Gal
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3的抗体、含有三
联吡啶钌标记的可特异性结合Gal
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3的抗体和链霉亲和素超顺磁微球；
[0009]所述链霉亲和素超顺磁微球的粒径包括1.0～6.0μm。
[0010]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述可特异性结合Gal
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3的抗体包括抗Gal
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3单克隆抗体。
[0011]在本专利技术的一些具体实施方案中，可特异性结合Gal
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3的抗体分子表面的生物素分子标记量包括2～5个。
[0012]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述可特异性结合Gal
‑
3的抗体包括抗Gal
‑
3单克隆抗体。
[0013]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述可特异性结合Gal
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3的抗体分子表面的钌分子标记量包括2～10个。
[0014]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述链霉亲和素超顺磁微球的粒径包括3μm。
[0015]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述组合物还包括缓冲液；
[0016]所述缓冲液包括：
[0017]20mmol/L～200mmol/L磷酸盐缓冲液，pH＝7.4；和/或
[0018]20mmol/L～200mmol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液，pH＝7.4。
[0019]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述组合物还包括第一清洗液；
[0020]所述第一清洗液包括2
‑
N
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二丁氨基乙醇；
[0021]所述第一清洗液还包括磷酸盐缓冲液。
[0022]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述第一清洗液包括浓度90mmol/L的二丁基乙醇胺，其中含浓度300mmol/L的磷酸盐缓冲液。
[0023]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述组合物还包括稳定剂；
[0024]所述稳定剂包括甘氨酸、蛋氨酸、PEG20000、葡聚糖200000、普鲁兰多糖或聚乙烯比咯烷酮360中的一种或多种。
[0025]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述稳定剂包括：
[0026][0027]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述稳定剂与所述缓冲液的体积比为5：100。
[0028]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述组合物还包括第二清洗液；
[0029]所述第二清洗液包括清洗液1、清洗液2、清洗液3和/或清洗液4；
[0030]所述清洗液1包括聚合度为14的异辛醇聚氧基乙烯醚、聚合度为9的月桂醇聚氧乙烯醚和/或Proclin950；
[0031]所述清洗液2包括氢氧化钠、氯化钠和/或次氯酸钠溶液；
[0032]所述清洗液3包括聚合度为14的异辛醇聚氧基乙烯醚、聚合度为9的月桂醇聚氧乙烯醚和/或氢氧化钾；
[0033]所述清洗液4包括85wt％的磷酸、二氯乙酰胺、聚合度为14的异辛醇聚氧基乙烯醚、聚合度为9的月桂醇聚氧乙烯醚、磷酸二氢钾和/或2
‑
N
‑
二丁氨基乙醇。
[0034]在本专利技术的一些具体实施方案中，所述清洗液1包括：
[0035]聚合度为14的异辛醇聚氧基乙烯醚
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1.0g/L
[0036]聚合度为9的月桂醇聚氧乙烯醚
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10g/L
[0037]Proclin950
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.组合物，其特征在于，包括含有生物素标记的可特异性结合Gal
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3的抗体、含有三联吡啶钌标记的可特异性结合Gal
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3的抗体和链霉亲和素超顺磁微球；所述链霉亲和素超顺磁微球的粒径包括1.0～6.0μm。2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述链霉亲和素超顺磁微球的粒径包括3μm。3.如权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，还包括缓冲液；所述缓冲液包括：20mmol/L～200mmol/L磷酸盐缓冲液，pH＝7.4；和/或20mmol/L～200mmol/L三羟甲基氨基甲烷缓冲液，pH＝7.4。4.如权利要求1至3任一项所述的组合物，其特征在于，还包括第一清洗液；所述第一清洗液包括2
‑
N
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二丁氨基乙醇；所述第一清洗液还包括磷酸盐缓冲液。5.如权利要求1至4任一项所述的组合物，其特征在于，还包括稳定剂；所述稳定剂包括甘氨酸、蛋氨酸、PEG20000、葡聚糖200000、普鲁兰多糖或聚乙烯比咯烷酮360中的一种或多种。6...

【专利技术属性】
技术研发人员：李传保，秦军，汪芳，谢元东，赵敏迪，唐磊，王晓宁，
申请(专利权)人：北京联众泰克科技有限公司，
类型：发明
国别省市：