本发明专利技术提供了诊断或者辅助诊断哺乳动物急性缺血性脑卒中的生物标志物C/EBPβ。发明专利技术人研究结果发现，脑缺血小鼠以及AIS患者急性期外周血浆中C/EBPβ蛋白表达水平相比正常生理状态时显著降低，且AIS外周血浆中C/EBPβ表达水平可以单独或联合预测患者不良结局风险。对比传统的临床模型，加入外周血浆C/EBPβ蛋白表达水平因素后，能够显著提升的诊断效能。此外，C/EBPβ蛋白以外泌体的形式存在于血浆中。综上所述，血浆中C/EBPβ是判断AIS患者预后效果的生物标志物。这种血液检查方法容易被受检者接受，更可成为AIS患者的早诊、病情进展的判断以及预后评估的有效手段。的判断以及预后评估的有效手段。的判断以及预后评估的有效手段。
【技术实现步骤摘要】
C/EBP
β
在制备诊断或辅助诊断急性缺血性脑卒中产品中的应用
[0001]本专利技术涉及生物医学领域中C/EBPβ在制备诊断或辅助诊断急性缺血性脑卒中产品中的应用。
技术介绍
[0002]转录因子CCAAT/增强子结合蛋白β(CCAAT/enhancer binding protein beta,C/EBPβ)是属于C/EBP家族成员的一个重要的转录因子，该家族的成员与神经变性病或脑损伤的炎症反应相关，这些转录调节活化的小胶质细胞基因，结合多种细胞因子或促炎基因的启动子区、增强子区。C/EBPβ在正常生理状态下参与调节细胞生长、分化等功能，而在脑损伤及神经变性病的病理过程中，C/EBPβ主要表达于小胶质细胞中，可介导小胶质细胞失调并引发炎症反应，在加快神经系统疾病的病程进展中起着重要作用。
[0003]由于血管危险因素的负担日益加重以及突出的人口老龄化问题，导致神经血管疾病的发生越来越普遍。其中，急性缺血性脑卒中占到所有卒中比例的87％，因其发病率高、复发率高、死亡率高、致残率高，是世界公认严重威胁人类健康的重大疾病。超早期或早期(发病6小时内)、个体化治疗对于急性脑卒中患者的预后至关重要。目前存在以下几个问题：(1)急性缺血性脑卒中是通过临床评估和神经影像学诊断的，需要的时间较长；(2)许多短暂性缺血发作的患者在到达医院时已经无症状，无法进行准确的神经功能评估；(3)即使患者在卒中时的基本特征相似，预后也可能存在较大差异。这些因素都会延误对患者的诊断和针对性的治疗，导致错过最佳的治疗时间。虽然血液生物标志物已经在其它血管疾病的诊断中使用了很多年，但是尚未见有关于卒中的生物标志物应用于临床，而目前报道的生物标志物的准确性远远低于临床实践的要求。
[0004]所以，开发快速、便捷的急性缺血性脑卒中患者血液生物标志物诊断指标对于卒中的早期诊断及后续治疗具有重要的提示作用。
技术实现思路
[0005]本专利技术所要解决的技术问题是如何诊断或辅助诊断急性缺血性脑卒中。
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提供了诊断或者辅助诊断哺乳动物急性缺血性脑卒中的生物标志物，所述生物标志物为转录因子CCAAT/增强子结合蛋白β(C/EBPβ)。
[0007]本专利技术还提供检测样品中上述生物标志物含量的物质的下列任一应用：
[0008]U1、在制备诊断或辅助诊断哺乳动物急性缺血性脑卒中产品中的应用；
[0009]U2、在制备预测哺乳动物急性缺血性脑卒中预后的产品中的应用；
[0010]U3、在制备筛查或辅助筛查哺乳动物急性缺血性脑卒中患者产品中的应用。
[0011]上述应用中，所述样品是外周血浆。
[0012]上述应用中，所述检测样品中上述C/EBPβ含量的物质可包括检测上述C/EBPβ含量的试剂和/或仪器，如通过ELISA的方法检测上述C/EBPβ含量所需的试剂和仪器。
[0013]为解决上述技术问题，本专利技术还提供了产品，其为下列任一产品：
[0014]V1、诊断或辅助诊断哺乳动物急性缺血性脑卒中产品；
[0015]V2、预测哺乳动物急性缺血性脑卒中预后的产品；
[0016]V3、筛查或辅助筛查哺乳动物急性缺血性脑卒中患者的产品；
[0017]所述产品包含检测上述生物标志物含量的试剂和/或仪器。
[0018]上述产品中，所述样品是外周血浆。
[0019]上述任一所述哺乳动物可为人或小鼠。
[0020]专利技术人首次发现，C/EBPβ蛋白在健康人和急性缺血性脑卒中(Acute ischemic stroke,AIS)患者外周血浆中表达，且血浆中C/EBPβ蛋白的表达水平可以提高传统模型对卒中患者的3个月预后和治疗效果的预测能效。
附图说明
[0021]图1为本专利技术实施例1中ELISA检测小鼠外周血浆中C/EBPβ蛋白表达水平。检测对象分别为正常小鼠的外周血浆，以及MCAO模型小鼠脑缺血后3天的外周血浆。所示数据表示为平均值
±
标准差，***代表脑缺血后3天的小鼠与正常小鼠比较显著性分析结果为P<0.001。
[0022]图2为本专利技术实施例2中ELISA检测健康人和AIS患者血浆中C/EBPβ蛋白的表达水平。AIS患者为急性缺血性脑卒中患者。所示数据表示为平均值
±
标准差，*代表AIS患者与健康人比较显著性分析结果为P<0.05。
[0023]图3为本专利技术实施例2中AIS患者以mRS≤2二分类比较两组患者外周血浆中C/EBPβ蛋白表达水平。所示数据表示为平均值
±
标准差，**代表mRS>2与mRS≤2的AIS患者比较显著性分析结果为P<0.01。
[0024]图4为本专利技术实施例3中健康人和AIS患者血浆外泌体中检测C/EBPβ蛋白表达。图4的A图为外泌体的纳米颗粒示踪分析。图4的B图为透射电镜的外泌体形态鉴定，标尺＝200nm。图4的C图为Westernblot检测外泌体蛋白标志物；分别表示阳性对照及血浆中提取出的外泌体。图4的D图为Westernblot检测健康人和AIS患者外泌体中C/EBPβ蛋白表达水平。
具体实施方式
[0025]下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。以下提供的实施例可作为本
普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本专利技术的限制。
[0026]下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均为常规生化试剂，可从商业途径得到。
[0027]以下实施例中的C57BL/6J雄性小鼠为标准品系，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物许可证号：SCXK(京)2019
‑
0009。
[0028]以下实施例中的定量试验，结果取平均值。
[0029]实施例1、脑缺血小鼠外周血浆中C/EBPβ蛋白表达变化
[0030]实验对象：将C57BL/6J雄性小鼠(10～12周龄，体重为22～24g，清洁级别为无特定
病原体级(Specific pathogen free，SPF级)随机分为MCAO模型小鼠组和正常对照小鼠组，每组10只，具体各组处理如下：
[0031]MCAO模型小鼠组：小鼠手术前一晚禁食，但不禁水，利用线栓法制作小鼠大脑中动脉闭塞模型(Middle cerebral artery occlusion，MCAO)。具体手术如下：小鼠称重后用4％恩氟烷诱导麻醉，应用小动物呼吸机麻醉机，1％～2％恩氟烷混合70％N2O和30％O2维持麻醉。术中监测肛温、血糖、血气，保证各项指标维持在正常范围。模型制作过程中，用激光多普勒(PERIMED，PF5001)监测小鼠大脑中动脉分布区的血流量。将小鼠仰卧于手术台上，取颈部正中切口，分本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.诊断或者辅助诊断哺乳动物急性缺血性脑卒中的生物标志物，所述生物标志物为C/EBPβ。2.根据权利要求1所述的生物标志物，其特征在于，所述哺乳动物为人或小鼠。3.检测样品中权利要求1或2所述生物标志物含量的物质的下列任一应用：U1、在制备诊断或辅助诊断哺乳动物急性缺血性脑卒中产品中的应用；U2、在制备哺乳动物急性缺血性脑卒中预后或辅助预后产品中的应用；U3、在制备筛查或辅助筛查哺乳动物急性缺血性脑卒中患者产品中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述样品是外周血浆。5....
【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书一页说明书八页附图二页，
申请(专利权)人：首都医科大学宣武医院，
类型：发明
国别省市：
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