一种用于母猪早期妊娠诊断的蛋白生物标志物及其用于母猪早期妊娠诊断方法技术

本发明专利技术公开了一种用于母猪早期妊娠诊断的蛋白生物标志物，其特征在于：蛋白生物标志物为下列蛋白标志物之一：FLNC蛋白，其序列号为<210>1；ADIPOQ蛋白，其序列号为<210>2；HP蛋白，其序列号为<210>3；TERF2蛋白，其序列号为<210>4；母猪早期妊娠诊断方法，其特征在于：具体步骤如下：

A protein biomarker for early pregnancy diagnosis of sows and its application in early pregnancy diagnosis of sows

【技术实现步骤摘要】
一种用于母猪早期妊娠诊断的蛋白生物标志物及其用于母猪早期妊娠诊断方法


[0001]本专利技术属于生物技术诊断领域，具体涉及一种用于母猪早期妊娠诊断的蛋白生物标志物及其用于母猪早期妊娠诊断方法。

技术介绍

[0002]随着我国国民经济的快速发展以及越来越严格的环保要求，养猪方式迅速由散养向集约化转变。由于对优良品种的需求增加，繁殖已成为养猪业中最重要的一环。母猪配种后，及时且准确的妊娠诊断是母猪繁殖效率最大化的关键一环。母猪早期妊娠诊断可以确认配种后母猪的妊娠状态，对于已经妊娠的母猪及时采取保胎措施和相应的孕期管理，对于未妊娠的母猪及时采取复配措施、缩短其空怀期，对于屡配不孕的母猪则要及时淘汰。早期妊娠诊断可以降低母猪非生产天数降低饲养成本、提高母猪使用效率、提高母猪年生产力。
[0003]传统的妊娠诊断方法如试情法、外部观察法、超声波诊断法、阴道检查法等，有着各自的缺陷，诊断时间天数较长、症状诊断不明确、受使用者的经验程度影响等，误诊、漏诊均有不同程度的存在。鉴于传统妊娠诊断方法存在的缺陷，我们急需找到一种更为精准简便的早期妊娠诊断方法应用于生产管理。
[0004]因此，本申请提出了一种用于母猪早期妊娠诊断的蛋白生物标志物及其用于母猪早期妊娠诊断方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术提出了一种快捷高效诊断母猪早期妊娠诊断的蛋白生物标志物及母猪早期妊娠诊断方法。
[0006]蛋白质作为基因表达的最终产物，直接反映了机体生命的复杂和多变性。对蛋白质进行分析，才能更好地解释细胞活动或其行使功能的过程。生物标志物是指可以明确标识系统、器官等结构或功能的改变的生化指标，如DNA、RNA、蛋白质等都可以作为生物标志物用于研究。现代生物标志物的研发一般分为三个阶段：发现阶段、验证阶段和确认阶段。在发现阶段蛋白质组学的技术方法已经在生物标志物的发现和诊断中得到广泛应用。目前较为主流的一种基于串联质谱方法的蛋白质定量技术——iTRAQ(isobaric tag for relative and absolute quantitation)，该技术通过对蛋白质酶解后肽段进行标记，利用串联质谱方法，对肽段进行精确鉴定和定量。目前关于母猪早期妊娠蛋白的研究较少，仍然缺乏准确可靠的蛋白生物标志物用于母猪早期妊娠诊断，急需开发一些具有早期诊断价值的母猪早期妊娠诊断蛋白生物标志物。理想的蛋白生物标志物需在母猪妊娠早期就能特异且灵敏的从外周血液中检出。目前，尚未公开用于母猪早期妊娠诊断的蛋白生物标志物。
[0007]本专利技术的目的之一在于提供一种用于母猪早期妊娠诊断的蛋白生物标志物。
[0008]本专利技术的目的之二在于通过检测该种蛋白生物标志物在母猪早期妊娠阶段的表
达水平，可以判断母猪是否妊娠，从而为母猪早期妊娠诊断提供一种新的方法。
[0009]本专利技术的目的之三在于提供一种母猪早期妊娠诊断方法。
[0010]本专利技术技术方案如下：
[0011]本专利技术提供一种用于母猪早期妊娠诊断的蛋白生物标志物，所述蛋白生物标志物为：FLNC，其序列号为<210>1；ADIPOQ，其序列号为<210>2；HP，其序列号为<210>3；TERF2，其序列号为<210>4，上述蛋白生物标志物应用于母猪早期妊娠诊断。
[0012]一种母猪早期妊娠诊断方法，在母猪配种15天后采集外周血样，采用ELISA酶联免疫吸附反应技术检测血液中FLNC、ADIPOQ、HP及TERF2蛋白的表达水平，若检测显著低表达，则该母猪应当及时进行下一次人工授精配种，以达到缩短胎次间隔，进而有效降低母猪非生产天数，提高养猪企业的经济效益。
[0013]通过以下步骤实现：
[0014]①
、采集血样：采集配种后15天的母猪外周血；
[0015]②
、血样处理：对
①
步骤的血样进行分离血清或血浆处理：
[0016]③
、试剂盒检测：选用ELISA试剂盒对
②
步骤处理后的血样进行检测，检测FLNC蛋白、ADIPOQ蛋白、HP蛋白及TERF2蛋白的含量
[0017]所述ELISA试剂盒是如下的一种：端粒重复结合因子2(TERF2)的ELISA试剂盒、结合珠蛋白(HP)的ELISA试剂盒、脂联素(ADIPOQ)的ELISA试剂盒和细丝蛋白C(FLNC)的ELISA试剂盒。
[0018]即端粒重复结合因子2(TERF2)的ELISA试剂盒用于检测TERF2蛋白；
[0019]结合珠蛋白(HP)的ELISA试剂盒用于检测HP蛋白；
[0020]脂联素(ADIPOQ)的ELISA试剂盒用于检测ADIPOQ蛋白；
[0021]细丝蛋白C(FLNC)的ELISA试剂盒用于检测FLNC蛋白。
[0022]收集配种后15天母猪外周血液样本，在配种后25天进行B超妊娠诊断，35天妊娠复检，以区分妊娠组与未妊娠母猪组。分离蛋白，采用iTRAQ技术结合系统的生物信息学分析方法，筛选在妊娠早期差异表达的蛋白，最终获得了4个与母猪早期妊娠密切相关的外周血液中的蛋白质，即FLNC、ADIPOQ、HP及TERF2，在配种后15天妊娠与非妊娠母猪外周血液样本中表达量均存在显著差异并通过ELISA验证，最终证明本专利技术提供的差异表达蛋白即FLNC、ADIPOQ、HP及TERF2与母猪早期妊娠高度相关，能够作为快速进行母猪早期妊娠诊断的生物标志物，该种蛋白生物标志物具有良好的诊断指标的特性。
[0023]所述FLNC、ADIPOQ、HP及TERF2蛋白在配种后15天妊娠组母猪外周血液中表达量显著高于非妊娠组，进而FLNC、ADIPOQ、HP及TERF2蛋白能够作为母猪早期妊娠的蛋白生物标志物用于母猪早期妊娠诊断。
[0024]本专利技术原理：FLNC、ADIPOQ、HP及TERF2蛋白在妊娠早期母猪外周血液中相对于配种未妊娠母猪表达量显著升高，所以本专利技术重点分析了早期妊娠母猪外周血液中FLNC、ADIPOQ、HP及TERF2蛋白的表达情况，首次发现FLNC、ADIPOQ、HP及TERF2蛋白可以单独使用或者联合使用作为快速诊断母猪早期妊娠蛋白分子标志物，并进行应用。
[0025]本专利技术获得的有益效果：
[0026]本专利技术针对母猪早期妊娠诊断，筛选蛋白质分子，通过收集15天配种后妊娠与未妊娠母猪外周血液样本，从而对妊娠与未妊娠母猪样本中差异表达的蛋白质进行筛选和检
测，获得4个在妊娠与未妊娠差异显著且妊娠15天后显著升高的蛋白质，最终得到与母猪早期妊娠相关的差异表达蛋白，即：FLNC、ADIPOQ、HP及TERF2蛋白，从而证明4个蛋白质可以用于母猪早期妊娠诊断。
[0027]本专利技术提供蛋白生物标志物FLNC、ADIPOQ、HP及TERF2中的一种在母猪早期妊娠诊断中的应用，在母猪配种15天采集本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于母猪早期妊娠诊断的蛋白生物标志物，其特征在于：蛋白生物标志物为下列蛋白标志物之一：FLNC蛋白，其序列号为<210>1；ADIPOQ蛋白，其序列号为<210>2；HP蛋白，其序列号为<210>3；TERF2蛋白，其序列号为<210>4。2.一种用于母猪早期妊娠诊断的蛋白生物标志物在母猪妊娠检测中的应用，其特征在于：母猪早期妊娠诊断中应用如权利要求1所述的蛋白标志物。3.一种母猪早期妊娠诊断方法，其特征在于：具体步骤如下：
①
、采集血样：采集配种后15天的母猪外周血；
②
、血样处理：对
①
步骤的血样进行分离血清或血浆处理...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄涛，祁梦凡，谢苏，高若男，孙义姗，孙晓梅，公红斌，和军飞，卢世豪，李清春，陈鑫，王衠萱，黎明国，何凡，
申请(专利权)人：石河子大学，
类型：发明
国别省市：