Reg4蛋白及其在抵抗肠炎伤寒沙门氏菌感染中的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种活性因子的用途，其特征在于：所述活性因子为Reg4，或与其相差不多于三个氨基酸序列的物质；所述用途包含如下用途中的至少一种：用途A.用于制备治疗和/或缓解基于伤寒沙门氏菌感染引发的病症的药物；用途B.用于制备治疗和/或缓解基于伤寒沙门氏菌感染引发的并发症的药物。

【技术实现步骤摘要】
Reg4蛋白及其在抵抗肠炎伤寒沙门氏菌感染中的应用
本专利技术涉及一种活性因子，具体地，涉及Reg4蛋白及其在抵抗肠炎伤寒沙门氏菌感染中的应用。
技术介绍
沙门氏菌是重要的人畜共患传染病原菌，其感染是引起世界性胃肠疾病的主要因素，临床上主要以伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)和副伤寒沙门氏菌为主。沙门氏菌是引起儿童出现细菌感染性腹泻的最主要致病菌。文献报道显示，沙门氏菌感染在腹泻患儿粪便病原学检测中阳性率高达5.5％。沙门氏菌感染极易导致患儿出现发热、呕吐和腹泻等全身不适症状，严重影响患儿身心健康。沙门氏菌感染具有传染性，可能呈流行性爆发趋势。使用抗生素是治疗肠炎沙门氏菌感染的重要手段。但近年来，随着抗生素的大量使用和滥用，沙门氏菌耐药问题愈发严峻。环丙沙星是临床上治疗沙门氏菌感染的主要药物之一，但目前已经存在大量沙门氏菌对环丙沙星产生耐药性。而且，抗生素残留与年龄存在相关性，由于儿童免疫系统发育不完善，免疫功能弱，导致抗生素在儿童体内残留较高，并且残留抗生素的种类繁多，对儿童的生长发育非常不利。因此，目前迫切需要开发不易产生耐药性、活性高、安全可靠的新型抗沙门氏菌感染的药物。抗菌肽是抗生素的理想代替品之一。抗菌肽是一类小分子多肽，在动植物体内分布广泛，是机体先天性免疫系统的重要组成部分。天然抗菌肽和常规的抗生素不同，是某个特定基因编码的蛋白产物，因此具有独特的抗菌机制和广谱抗细菌、真菌、病毒、螺旋体、寄生虫的活性，而且具有不易产生耐药性的特性。
技术实现思路
本专利技术经研究表明Reg4蛋白能够有效治疗肠炎伤寒沙门氏菌感染，故而，提出了Reg4蛋白作为抗菌肽用于治疗伤寒沙门氏菌感染所致急性胃肠炎的方法。本专利技术提供了一种活性因子的用途，其特征在于：上述活性因子选自如下S1-S2中的一种或几种：S1.上述活性因子为重组人Reg4，其氨基酸序列如SEQIDNO:1所示；S2.上述活性因子为重组鼠Reg4，其氨基酸序列如SEQIDNO:2所示；上述用途包含如下用途中的至少一种：用途A.用于制备治疗和/或缓解基于伤寒沙门氏菌感染引发的病症的药物；用途B.用于制备治疗和/或缓解基于伤寒沙门氏菌感染引发的并发症的药物。进一步地，本专利技术提供的一种活性因子的用途，其特征在于：上述用途包括如下用途中的至少一种：用途1.用于制备治疗伤寒沙门氏菌感染所致急性胃肠炎的药物；用途2.用于制备缓解伤寒沙门氏菌感染引起体重降低情况的药物；用途3.用于制备提高基于伤寒沙门氏菌感染致死的存活率的药物；用途4.用于制备治疗和/或缓解伤寒沙门氏菌引起的肠道损伤的药物；用途5.用于制备治疗和/或缓解伤寒沙门氏菌引起的肠道损伤的药物；用途6.用于制备治疗和/或缓解伤寒沙门氏菌对各脏器的侵袭的药物。进一步地，本专利技术提供的一种活性因子的用途，其特征在于：上述活性因子的用量为药物总重量的10-8-100％。进一步地，本专利技术提供的一种活性因子的用途，其特征在于：上述药物的剂型为经胃肠道以外给药途径剂型或经胃肠道给药剂型。进一步地，本专利技术提供的一种活性因子的用途，其特征在于：上述药物的给药途径剂型选自注射给药剂型、呼吸道给药剂型、滴鼻剂、皮肤给药剂型、黏膜给药剂型或腔道给药剂型、散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬剂；上述注射给药剂型的输注方式选自静脉内输注、腹膜内注射、皮下输注、肌肉输注。进一步地，本专利技术提供的一种活性因子的用途，其特征在于：上述Reg4蛋白的表达与纯化方法如下所示：S1.pET-28-Reg4(NM_026328-6His)和pET-28-Reg4(NM_001159352-6His)载体构建；S2.获得含重组表达质粒的表达菌种；S3.Reg4蛋白诱导表达及鉴定；S4.Reg4蛋白纯化；S5.蛋白脱盐；S6.超滤法浓缩蛋白。进一步地，本专利技术提供的一种活性因子的用途，其特征在于：上述人Reg4的原核表达质粒如SEQIDNO.3所示。进一步地，本专利技术提供的一种活性因子的用途，其特征在于：上述鼠Reg4的原核表达质粒如SEQIDNO.4所示。进一步地，本专利技术提供的一种活性因子的用途，其特征在于：上述Reg4蛋白在大肠杆菌BL21菌株中进行表达。本专利技术的作用和效果：本专利技术公开的Reg4蛋白抗菌活性较强，具有分子质量小、抗蛋白酶降解、抗菌谱广、抗菌机制异于传统抗生素，对抗生素产生的超级耐药菌株具有较好的抗菌活性等特性。本专利技术公开的Reg4蛋白属于人体抗菌肽中的一种，不会引起机体排异反应，且无药物残留等风险。本专利技术公开的Reg4蛋白有望替代传统抗生素，成为今后治疗肠炎伤寒沙门氏菌感染的最佳药物。附图说明图1.琼脂电泳图；其中，图A为鼠Reg4全长RCR扩增产物的琼脂电泳图；图B为人Reg4全长PCR扩增产物的琼脂电泳图。图2.考马斯亮蓝染色图；其中，图A为纯化的重组人Reg4蛋白考马斯亮蓝染色图；图B为纯化的鼠Reg4蛋白考马斯亮蓝染色图。图3.体外抑菌实验菌落数目测定结果；其中，图3A和图3B为重组鼠Reg4蛋白抑制鼠伤寒沙门氏菌生长的作用；图3C和图3D为重组人Reg4蛋白抑制肠沙门氏菌亚种肠炎血清型生长的作用。图4A.小鼠体重变化结果；图4B.存活率变化结果；图5.盲肠HE病理及评分；其中，图5A为盲肠HE染色光镜(各组放大倍数：×100)；图5B为各组小鼠盲肠炎症病理学评分。图6.盲肠及粪便中鼠伤寒沙门氏菌菌落检测结果；其中，图6A为重组鼠Reg4蛋白对盲肠和粪便中伤寒沙门氏菌含量的影响；图6B为各组小鼠盲肠组织中鼠伤寒沙门氏菌含量的比较；图6C为各组小鼠盲肠组织中鼠伤寒沙门氏菌含量的比较。图7.鼠伤寒沙门氏菌在体内脏器定值分布数量检测结果；其中，图7A为各组小鼠肝脏、脾脏和肠系膜淋巴结中鼠伤寒沙门氏菌的含量；图7B为各组小鼠肝脏中鼠伤寒沙门氏菌含量的比较；图7C为各组小鼠脾脏中鼠伤寒沙门氏菌含量的比较；图7D为各组小鼠肠系膜淋巴结中鼠伤寒沙门氏菌含量的比较。具体实施方式1.Reg4蛋白表达与纯化1.1主要试剂(1)pET-28载体：CV205，上海吉凯基因化学技术有限公司(2)BL21(DE3)化学感受态细胞:：C504-03，南京诺唯赞生物科技股份有限公司(3)卡那霉素：E004000-5G，上海元象医疗器械有限公司(4)异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)/Isopropylβ-D-thiogalctoside：MB3026，上海源祉生物科技有限公本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种活性因子的用途，其特征在于：/n所述活性因子选自如下S1-S2中的一种或几种：/nS1.所述活性因子为重组人Reg4，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；/nS2.所述活性因子为重组鼠Reg4，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示；/n所述用途包含如下用途中的至少一种：/n用途A.用于制备治疗和/或缓解基于伤寒沙门氏菌感染引发的病症的药物；/n用途B.用于制备治疗和/或缓解基于伤寒沙门氏菌感染引发的并发症的药物。/n

【技术特征摘要】
1.一种活性因子的用途，其特征在于：
所述活性因子选自如下S1-S2中的一种或几种：
S1.所述活性因子为重组人Reg4，其氨基酸序列如SEQIDNO:1所示；
S2.所述活性因子为重组鼠Reg4，其氨基酸序列如SEQIDNO:2所示；
所述用途包含如下用途中的至少一种：
用途A.用于制备治疗和/或缓解基于伤寒沙门氏菌感染引发的病症的药物；
用途B.用于制备治疗和/或缓解基于伤寒沙门氏菌感染引发的并发症的药物。


2.如权利要求1所述的一种活性因子的用途，其特征在于：
所述用途包括如下用途中的至少一种：
用途1.用于制备治疗伤寒沙门氏菌感染所致急性胃肠炎的药物；
用途2.用于制备缓解伤寒沙门氏菌感染引起体重降低情况的药物；
用途3.用于制备提高基于伤寒沙门氏菌感染致死的存活率的药物；
用途4.用于制备治疗和/或缓解伤寒沙门氏菌引起的肠道损伤的药物；
用途5.用于制备治疗和/或缓解伤寒沙门氏菌引起的肠道损伤的药物；
用途6.用于制备治疗和/或缓解伤寒沙门氏菌对各脏器的侵袭的药物。


3.如权利要求1所述的一种活性因子的用途，其特征在于：
所述活性因子的用量为药物总重量的10-8-100％。


4.如权利要求1所述的一种活性因子的用途，其特征在于：
所述药物的剂型为经胃...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖永陶，王伟鹏，蔡威，
申请(专利权)人：上海市儿科医学研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31