载脂蛋白E受体模拟肽6KApoEp在制备治疗脑出血后继发性脑损伤药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了载脂蛋白E受体模拟肽6KApoEp在制备治疗脑出血后继发性脑损伤药物中的应用，并公开了载脂蛋白E受体模拟肽6KapoEp的蛋白序列、载脂蛋白E受体模拟肽6KapoEp的蛋白序列的构建方法，以及应用混合液的制备，应用6KApoEp后，可减少CypA的表达，通过抑制

【技术实现步骤摘要】
载脂蛋白E受体模拟肽6KApoEp在制备治疗脑出血后继发性脑损伤药物中的应用
本专利技术涉及一种载脂蛋白E受体模拟肽6KApoEp在制备治疗脑出血后继发性脑损伤药物中的应用，属于脑出血治疗

技术介绍
脑出血(IntracerebralhemorrhageICH)是脑卒中的第二种常见亚型，约占所有卒中的10％～20％，发病率为10～30人/10万/年，30天死亡率达40％，幸存的ICH患者有严重的神经功能缺陷，其中只有20％的患者在发病6个月后生活自理，且仍具有很高的再次出血和继发性卒中的风险，严重威胁病人的生命和健康。脑出血后的病理生理机制除了血液快速积累导致正常脑组织解剖结构的破坏和血肿对周围组织直接压迫产生的机械性损害外还包括继发性脑损害，脑出血后血液中的多个成分如：红细胞、白细胞、血小板等被释放到脑实质中，并通过不同途径激活小胶质细胞、星型胶质细胞和巨噬细胞，产生一系列炎性反应导致神经元坏死及血脑屏障(Blood-brainbarrier，BBB)损害如图1所示。当脑出血产生炎性反应后，细胞内依赖核转录因子-κB(nuclearfactorkappa-B,)产生的亲环素A(CyclophlinA,CypA)被分泌到细胞外环境中，并诱导单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和T细胞的趋化；在急性神经损伤中，CypA介导核易位和/或DNA的活性，促进AIF介导神经细胞死亡，加重脑损伤。过度分泌到细胞外的CypA可刺激炎性细胞因子如肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-α，TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)和基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase9，MMP-9)的产生，加重脑出血后炎性反应；通常NF-κB以p50和p65亚基的异源二聚体形式存在于细胞质中，脑出血后，NF-κB被激活导致p50和p65亚基向细胞核解离和易位，从而促进肿瘤坏死因子-α、白介素-1β、白介素-6(interleukin-6，IL-6)、诱导型一氧化氮合酶(inducednitricoxidesynthase，iNOS)、细胞间黏附因子-1(intercellularadhesionmolecule-1，ICAM-1)等转录，这些物质与脑出血后血脑屏障破坏、脑水肿和神经细胞坏死密切相关。作为NF-κB靶基因的MMP-9在炎性反应促发下，由白细胞、血管内皮细胞及胶质细胞等分泌到细胞外间隙，由凝血纤溶酶、血红蛋白降解产物等激活，NF-κB会消化血管周围基底膜成分(IV型胶原、层黏连蛋白、纤维连接蛋白)和紧密连接蛋白(Tightjunction，TJ)，内皮细胞间的紧密连接蛋白是BBB的形态基础，它形成一个连续的细胞间网络，在内皮细胞、上皮细胞和胶质组织中选择性调节水、离子和溶质。组成TJ结构所需要的跨膜蛋白中的闭合蛋白(claudin-5)是最重要的，它可影响TJ对离子的通透性；另一类跨膜蛋白为咬合蛋白(occludin)，它与激动蛋白丝的膜内链有关，并调节TJ结构亲水分子的扩散；此外闭合小环蛋白-1(Zonulaoccluden-1，ZO-1)可与闭合蛋白(claudin-5)、咬合蛋白(occludin)和肌动蛋白相互作用，对TJ结构的组装和稳定性具有重要。脑出血后的蛋白分解导致紧密连接蛋白结构破坏，功能减退导致血管完整性丧失、通透性的增加，从而促进血脑屏障的破坏，加快血液渗出的发展，导致血管源性水肿。载脂蛋白E(apolipoproteinE，ApoE)是由299个氨基酸组成的蛋白质，分子量为34kDa，它有三种不同蛋白亚型，分别为ApoE2、ApoE3和ApoE4，有2个功能区，N端区域的碱基序列主要为1-191，其中含有低密度脂蛋白受体结合区域，C端区域的碱基序列为223-229含有脂质结合位点，推测ApoE在中枢神经炎性反应中利大于弊，且可以作为抗炎介质应用临床，基因型ApoE4与基因型ApoE3相比具有促炎作用(披露的论文：WangP,HeitmanJ.Thecyclophilins[J].GenomeBiol,2005,6(7):226-226.)。由于ApoE的分子量大，不能透过脑屏障，难以进入中枢神经系统发挥作用，在中枢神经系统中的ApoE主要由星形胶质细胞和小胶质细胞合成、分泌和表达(披露的论文：Astaxanthinprotectsastrocytesagainsttrauma-inducedapoptosisthroughinhibitionofNKCC1expressionviatheNF-κBsignalingpathway[J].BMCNeurosci，以及LipoxinA4MethylEsterReducesEarlyBrainInjurybyInhibitionoftheNuclearFactorKappaB(NF-κB)-DependentMatrixMetallopeptidase9(MMP-9)PathwayinaRatModelofIntracerebralHemorrhage[J].MedSciMonit)。在小鼠小胶质细胞(BV2细胞)和人类单核细胞(THP-1)检测了6KApoEp抑制炎性因子TNF-α和IL-6产生的能力，结果发现6KApoEp可以显著性抑制LPS诱导的TNF-α和IL-6的产生(披露的论文：WangL,HouH,ZiD,HabibA,TanJ,SawmillerD.NovelapoEreceptormimeticsreduceLPS-inducedmicroglialinflammation[J].AmJTranslRes,2019,11(8):5076-5085)。由于TNF-α和IL-6是NF-κB的靶基因，故推测6KApoEp可以抑制NF-κB从而减少炎性因子的产生。虽然6KApoEp在炎症模型中的抗炎作用已经证实，但LPS诱导的炎性反应和脑出血后凝血酶诱导的炎性反应可能有所不同，而且细胞水平的研究和动物水平研究的结果也可能不同；改造后的6KApoEp是否能有效改善脑出血后BBB通透性，有效保护自发性脑出血继发性损伤，需要我们进一步进行客观研究，以及对ICH后BBB的破坏提供新的治疗策略和产品。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种载脂蛋白E受体模拟肽6KApoEp在制备治疗脑出血后继发性脑损伤药物中的应用。本专利技术通过以下技术方案得以实现。本专利技术提供的载脂蛋白E受体模拟肽6KApoEp在制备治疗脑出血后继发性脑损伤药物中的应用。载脂蛋白E受体模拟肽6KApoEp在制备治疗创伤性脑损伤或蛛网膜下腔出血或自发性脑出血的脑出血后继发性脑损伤药物中的应用。载脂蛋白E受体模拟肽6KApoEp在制备治疗脑出血后继发性脑损伤药物中的应用，是采用立体定向技术进行的局部给药的应用。所述载脂蛋白E受体模拟肽6KApoEp的氨基酸序列号为：KKKKKLRVRLASHLRKLRKRLLRDA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.载脂蛋白E受体模拟肽6KApoEp在制备治疗脑出血后继发性脑损伤药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.载脂蛋白E受体模拟肽6KApoEp在制备治疗脑出血后继发性脑损伤药物中的应用。


2.如权利要求1所述的应用是载脂蛋白E受体模拟肽6KApoEp在制备治疗脑出血后继发性脑损伤药物中的应用。


3.如权利要求1所述的应用是载脂蛋白E受体模拟肽6KApoEp在制备治疗脑出血后继发性脑损伤药物中的应用。


4.如权利要求1所述的应用是载脂蛋白E受体模拟肽6KApoEp在制备治疗创伤性脑损伤、脑出血的继发性脑损伤药物中的应用。


5.如权利要求1～4任一项所述的应用，是通过采用立体定向技术进行的局部给药的应用。


6.如权利要求1～4任一项所述的应用，其特征在于，所述载脂蛋白E受体模拟肽6KApoEp的氨基酸序列号为：
KKKKKLRVRLASHLRKLRKRLLRDA。


7.如权利要求1～4任一项所述的应用，其特征在于，包含：使用6KApoEp和生理盐水混合而成混合液进行的应用。


8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述混合液为25ug、50ug、100ug的6KApoEp分别和1Kg的生理盐水进行混合，得到浓度为25ug/kg、50ug/kg、100ug/kg的混合液。


9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述混合液每次用量为20ul。


10.如权利要求1～4任一项所述的应用中，其特征在于，所述载脂蛋白E受体模拟肽6KApoEp的构建方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：王丽琨，谭俊，伍国锋，任思颖，
申请(专利权)人：王丽琨，
类型：发明
国别省市：贵州;52