基于新生儿血斑代谢物的胆道闭锁早期筛查标志物及其应用制造技术

本发明专利技术提供了生物标志物的用途，其特征在于：所述生物标志物选自如下特定生物标志物中的一种或几种：A.谷氨酸(Glutamicacid)；B.吲哚乙酸(Indoleaceticacid)；C.α

【技术实现步骤摘要】
基于新生儿血斑代谢物的胆道闭锁早期筛查标志物及其应用


[0001]本专利技术涉及医疗领域，具体地，涉及一种基于新生儿血斑代谢物的胆道闭锁早期筛查标志物、用途及其筛选方法。

技术介绍

[0002]胆道闭锁(Biliary atresia，BA)是婴幼儿时期的一种胆汁淤积性疾病，其特征为肝内外胆管进行性炎症、梗阻及快速肝纤维化，已成为小儿肝移植最主要原因[Hartley JL等，胆道闭锁。柳叶刀,2009,374(9702):1704
‑
1713]。胆道闭锁发病率为1:8000
‑
1:18000个存活出生婴儿，以亚洲报道的病例为多，我国胆道闭锁发病率约为西方国家的4
‑
5倍[Sokol RJ等，儿科胃肠病学与营养学,2003,37(1):4
‑
21；Sanchez
‑
Valle等。胆道闭锁：流行病学、遗传学、临床进展及公共卫生。儿科前沿,2017,64(1):285
‑
305]。在出生后60天内行肝门空肠吻合术(Kasai术)对胆道闭锁治疗效果好，术后黄疸消失率和5年自体肝生存率显著升高[Song Z等。对行Kasai手术时年龄小于60天的不同病因胆道闭锁婴儿预后的回顾性研究。医学(巴尔的摩)，2017,96(26):e7267]。由于缺乏有效的早期诊断标记物，患儿往往在60天内不能进行Kasai术，错过了最佳手术时间，导致了患儿预后差及生存率低下。胆道闭锁患儿早期的临床表现与其它婴幼儿胆汁淤积疾病存在重叠性，鉴别诊断困难且复杂，往往依赖肝活检和十二指肠管检查，而这些检查涉及的手术给患儿带来额外伤害。因此探索简单有效的诊断生物标志物对胆道闭锁的早期筛查和后续有效诊治具有重要意义。
[0003]目前诊断胆道闭锁潜在标志物有：
①
血清胆红素。新生儿血清总胆红素>2.0mg/dL或直接胆红素>1.0mg/dL满足胆道闭锁排查条件，但对于诊断胆道闭锁稳定性和特异性差[Sanjiv Harpava等，直接或结合胆红素筛查新生儿胆道闭锁的诊断率，美国医学会杂志，2020，323(12):1141
‑
1150]；
②
血清谷氨酰转移酶(GGT)。胆道闭锁患儿GGT血清含量明显高于其他胆汁淤积疾病患儿，但血清GGT在不同年龄患儿之间差异较大，诊断胆道闭锁准确性受限。[Chen X等，GGT与年龄结合诊断胆道闭锁的价值。儿科胃肠病学与营养学，2016,63(3):370
‑
373]；
③
血清基质金属蛋白酶
‑
7(MMP7)。胆道闭锁患儿MMP7血清含量明显高于健康患儿，但剂盒抗体效价，诊断阈值不统一，不能很好区分胆道闭锁与其他婴幼儿胆汁疾病，特异性受限[Yang L等，血清基质金属蛋白酶
‑
7对胆道闭锁的诊断价值，2018，68(6):2069
‑
2077；.Hung TM等，一种新的、拥有多种功能的物质
‑
基质金属蛋白酶
‑
7可以增加肝硬化风险。肝病学杂志，2009,50(4):1184
‑
1193]。另外，这些潜在诊断标志物都依赖于对婴幼儿进行抽血，风险高，实际操作比较困难，不能作为新生儿筛查标志物。
[0004]为了克服上述问题，在现有技术的研究中发现仍旧存在各种问题：
[0005]例如：现有技术中通过比较胆道闭锁及淤胆型婴儿肝炎综合征患儿的血清microRNA表达谱的差异，用于胆道闭锁的诊断，但microRNA不稳定容易降解。
[0006]还如：现有技术公开了磺酸化胆汁酸酶荧光毛细分析法及酶荧光定量试剂盒，适用于适用于新生儿期黄疸早期发现，但存在区分婴幼儿黄疸疾病亚型困难的问题。
[0007]还如：现有技术公开了血清中牛磺鹅去氧胆酸和鹅去氧胆酸的比值作为新生儿胆
道闭锁的诊断标志物，但区分胆道闭锁和其它婴儿胆汁淤积疾病特异性不高。
[0008]另外，现有的胆道闭锁潜在诊断标志物都依赖于大量血清。对症状不明显的新生儿或婴幼儿进行抽血可行性差且风险高。症状明显的患儿抽血检测往往错过了最佳治疗窗口期，不能进行新生婴儿早期筛查。

技术实现思路

[0009]本专利技术旨在克服上述缺陷，探索便捷、可靠的能够评估新生儿胆道闭锁风险的方法或途径，为临床新生儿胆道闭锁快速、高效地筛查和诊断提供可行方案。
[0010]在本专利技术中提出，基于新生儿出生血斑，通过检测胆道闭锁患儿及对照婴儿出生血斑中的代谢物，筛选出8种差异代谢物Glutamic acid，Indoleacetic acid,alpha
‑
Ketoisovaleric acid,Ketoleucine,2
‑
hydroxyglutaric acid,Taurohyocholic acid(THCA),Taurocholic acid(TCA)和glycocholic acid(GCA)。胆道闭锁血斑代谢物Glutamic acid(93.99
±
26.77μmol/Lvs.62.45
±
15.47μmol/L,p<0.0001)、2
‑
Hydroxyglutaric acid(14.84
±
5.743μmol/Lvs.9.955
±
2.668μmol/L,p＝0.0007)、THCA(1.332
±
1.289μmol/Lvs.0.3305
±
0.3538μmol/L，P<0.0001)、TCA(4.345
±
4.035μmol/Lvs.1.152
±
1.024μmol/L，P＝0.0013)和GCA(4.56
±
4.641μmol/Lvs.0.9019
±
0.9208μmol/L，P<0.0001)的含量较对照患儿血斑中的含量显著性升高.代谢物Ketoleucine(9.154
±
4.884μmol/Lvs.17.66
±
7.438μmol/L，P<0.0001)、Indoleacetic acid(0.8005
±
0.4069μmol/Lvs 1.31
±
0.5501μmol/L,P＝0.0004)和alpha
‑
Ketoisovaleric(0.7514
±
0.7646μmol/Lvs.1.691
±
0.9263μmol/L,P<0.0001)在胆道闭锁血斑中的含量显著性低于对照患儿组。代谢物Glutamic acid AUC达到0.861(95％CI＝(0.769
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.生物标志物的用途，其特征在于：所述生物标志物选自如下特定生物标志物中的一种或几种：A.谷氨酸(Glutamic acid)；B.吲哚乙酸(Indoleacetic acid)；C.α
‑
酮异戊酸(alpha
‑
Ketoisovaleric acid)；D.酮亮氨酸(Ketoleucine)；E.2
‑
羟基戊二酸(2
‑
hydroxyglutaric acid)；F.牛磺猪胆酸(THCA)；G.牛磺胆酸(TCA)；H.甘氨胆酸(GCA)；所述用途：用于制备检测新生儿胆道闭锁的试剂盒。2.如权利要求1所述的生物标志物的用途，其特征在于：包含血斑内代谢物定量检测试剂；所述血斑内代谢物定量检测试剂包括A
‑
H 8种差异代谢物代谢物质控品、内标准品、分散体系有机溶剂和血斑棉滤纸；其中，所述分散体系有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮、丙二醇和乙腈中之一种或几种的组合。3.如权利要求1所述的生物标志物的用途，其特征在于：用所述试剂盒评估新生儿胆道闭锁风险的试剂盒的方法为：S1.获取新生儿出生后3
‑
4天足底的离体血斑样本；S2.通过超高效液相色谱
‑
三重四极杆质谱定量测定血斑样本中代谢物标志物的表达水平；S3.分析血斑中差异代谢物的表达水平以进行风险评估，分析结合差异代谢物的准确性、灵敏性、特异性及截断值，选用1种或者多种差异代谢物组合用于检测对象胆道闭锁风险高低的评估；或选用1种或者多种差异代谢物以及任选地联合其他直接或间接对新生儿胆道闭锁有诊断能力的指标之一种或几种的组合来对检测对象胆道闭锁风险高低进行评估。4.如权利要求1所述的生物标志物的用途，其特征在于：所述用途还包括：应用于检测系统/设备中，具体使用方法如下：S1.对离体血样/干血斑进行色谱
‑
质谱分析，获取分析结果；S2.针对分析结果，筛选出特定生物标志物；当特定生物标志物符合预设的规则时，所述检测系统/设备的前端提示“存在隐患”。5.如权利要求1所述的生物标志物的用途，其特征在于：所述用途还包括：用于制备胆道闭锁早期筛查诊断试剂盒。6.如权利要求1所述的生物标志物的用途，其特征在于：所述用途还包括：用用于制备通过改变代谢物水平干预治疗胆道闭锁的靶向药物。7.一种获得生物标志物的方法，其特征在于：所述生物标志物为基于新生儿血斑代谢物的胆道闭锁早期筛查标志物；
具体的方法为：S1.收集新生儿血斑样本；S2.准备相关代谢物标准品；S3.对S1获取的血斑...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖永陶，蔡威，
申请(专利权)人：上海市儿科医学研究所，
类型：发明
国别省市：