【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及动物模型构建，尤其涉及一种儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型及建立方法。
技术介绍
1、非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fatty liver disease，nafld)是一种与胰岛素抵抗和遗传易感性密切相关的代谢性肝损伤。儿童非酒精性脂肪性肝病是指18周岁以下儿童或青少年，除外饮酒及其他明确致病因素导致肝脏脂肪蓄积的临床病理综合征，其进展形式可表现为非酒精性脂肪性肝炎(nonalcoholic steatohepatitis，nash)及其相关肝纤维化和肝硬化。目前世界范围内，健康儿童nafld发病率为3-10％，而在肥胖儿童中可达到60％，已成为儿童慢性肝病的主要病因。
2、儿童和成人nash的肝脏在临床病理学方面存在一定的差异。在儿童nash中，肝脏病理表现为脂肪变性，但气球样变较少见，肝门静脉汇管区炎症和纤维化更明显。而成人nash中，肝脏病理主要表现为大泡性脂肪变性，肝细胞气球样变，小叶炎症和窦周纤维化。目前对儿童非酒精性脂肪性肝病的了解尚不全面，造成这些组织学差异的原因尚待进一步深入研究，其中缺乏合适的动物模型是目前该领域存在的巨大挑战。
3、nafld相关的动物模型中包括饮食诱导模型，化学物质诱导模型以及基因突变模型。在饮食诱导模型中，包括高脂肪/高碳水的西方饮食诱导模型和营养缺乏饮食模型。营养缺乏饮食诱导的nash模型小鼠虽然达到nash阶段成模时间短(12周)，但并不会诱导出现肥胖和胰岛素抵抗及代谢综合征，与人类疾病表型不符。而单纯喂养高脂肪/高碳水的西方饮食的
技术实现思路
1、有鉴于现有技术的上述缺陷，本专利技术所要解决的技术问题是如何提供一种可缩短nash模型动物成模周期、符合疾病演变的过程、缩短常规高脂饮食方法成模周期的儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型。
2、为实现上述目的，本专利技术一方面提供了一种儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型建立方法，通过向雄性小鼠饲喂西方饮食饲料和高糖饮水、联合注射ccl4溶液的方式获得模型。
3、优选地，所述雄性小鼠为3周龄野生型雄性小鼠，背景品系为c57bl/6j，体重为10-12g。3周龄c57bl/6j雄性小鼠属于幼鼠，利用其构建儿童非酒精性脂肪性肝炎模型，符合儿童nash的发病年龄。本专利技术根据儿童nash的发病年龄，疾病成因和病理特征，以3周龄雄性c57bl/6j幼鼠为对象，进行模型构建。其中特别发现通过西方饮食、高糖饮水和四氯化碳腹腔注射剂量的特定配合，共同诱导，可在5周后建立理想的儿童nash疾病模型。如果仅仅喂养西方饮食和高糖饮水，则成模时间最短需要16周，试验周期较长，并且小鼠此时已经完全发育成熟，不符合儿童脂肪肝的发病年龄。
4、通过检测小鼠体重，肝重以及血脂变化情况，观察小鼠肝脏代谢指标和肝脏病理变化，对其肝脏脂质代谢，炎症，以及纤维化发展进行评估和分析，进行儿童nash模型鉴定。该模型成功率较高，与儿童nash疾病发展高度相似，可用于儿童nash的发病机制探究和治疗药物的筛选。
5、优选地，所述饲喂的方式为自由饮食，自由饮水。
6、优选地，所述西方饮食饲料为包含40％脂肪供能、0.15％胆固醇、34％蔗糖含量的饲料。
7、优选地，所述高糖饮水包括23.1g/l果糖和/或18.9g/l葡萄糖。
8、优选地，所述ccl4溶液为含ccl4量为5％的溶液，由ccl4与玉米油1：19混合制备而成。
9、优选地，所述注射ccl4溶液的方式为腹腔注射，注射剂量为每只小鼠注射ccl4溶液4μl/g，每周注射一次，每次间隔7日。
10、优选地，模型造模还设置对照组，所述对照组注射方式为腹腔注射玉米油，注射剂量为每只小鼠注射玉米油4μl/g，每周注射一次，每次间隔7日。
11、优选地，模型造模周期为5周。
12、优选地，模型造模的饲养环境为spf级，恒温22-26℃，恒湿45-55％，每天12小时的昼夜循环。
13、优选地，在饲喂饲料期结束后，分别麻醉小鼠，收集空腹血清及小鼠肝脏组织进行血液指标检测和肝脏病理分析以判断模型构建效果。
14、本专利技术另一方面提供了一种儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型，通过前述任一所述的儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型建立方法造型而成。
15、和现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：
16、(1)本专利技术的儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型的建立方法结合西方饮食，高糖饮水喂养和四氯化碳腹腔注射两种方式，使模型的表型更接近人类儿童nash更接近，病理变化显著。
17、(2)本专利技术的儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型建立方法造模方法简单，不需要转基因动物，造模周期短，造模成功率高，成本较低，具有良好的应用前景。同时本专利技术在幼龄小鼠期造模，造模结束后小鼠仍未至成年周龄，更符合儿童nash临床发病年龄。
18、(3)本专利技术的儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型，更符合儿童nafld的临床病理特征，可以用于研究儿童nafld的发生发展机制以及评价相关药物治疗效果，对预防和治疗儿童nafld的发生发展，具有重要意义。
19、(4)本专利技术实验组小鼠均表现出典型的nash特征，儿童nash模型构建成功率100％，血脂及血生化指标alt/ast升高明显，肝脏病理显示肝细胞脂肪变，肝门汇管区炎症细胞浸润并伴有肝纤维化，病理改变稳定。
20、以下将结合附图对本专利技术的构思、具体结构及产生的技术效果作进一步说明，以充分地了解本专利技术的目的、特征和效果。
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1.一种儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型建立方法，其特征在于，通过向雄性小鼠饲喂西方饮食饲料和高糖饮水、联合注射CC14溶液的方式获得模型。
2.根据权利要求1所述的儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型建立方法，其特征在于，所述雄性小鼠为3周龄野生型雄性小鼠，背景品系为C57BL/6J，体重为10-12g。
3.根据权利要求1或2所述的儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型建立方法，其特征在于，所述饲喂的方式为自由饮食，自由饮水。
4.根据权利要求1～3任一所述的儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型建立方法，其特征在于，所述西方饮食饲料为包含40％脂肪供能、0.15％胆固醇、34％蔗糖含量的饲料。
5.根据权利要求1～3任一所述的儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型建立方法，其特征在于，所述高糖饮水包括23.1g/L果糖和/或18.9g/L葡萄糖。
6.根据权利要求1～3任一所述的儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型建立方法，其特征在于，所述CC14溶液由CC14与玉米油1∶19混合制备而成。
7.根据权利要求1～3任一所述的儿童非酒精性脂肪
8.根据权利要求1～3任一所述的儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型建立方法，其特征在于，模型造模还设置对照组，所述对照组注射方式为腹腔注射玉米油，注射剂量为每只小鼠注射玉米油4μl/g，每周注射一次，每次间隔7日。
9.根据权利要求1～8任一所述的儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型建立方法，其特征在于，模型造模周期为5周。
10.根据权利要求1～8任一所述的儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型建立方法，其特征在于，模型造模的饲养环境为SPF级，恒温22-26℃，恒湿45-55％，每天12小时的昼夜循环。
11.根据权利要求1～10任一所述的儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型建立方法，其特征在于，在饲喂饲料期结束后，分别麻醉小鼠，收集空腹血清及小鼠肝脏组织进行血液指标检测和肝脏病理分析以判断模型构建效果。
12.一种儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型，其特征在于，通过权利要求1～11任一所述的儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型建立方法造型而成。
...【技术特征摘要】
1.一种儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型建立方法，其特征在于，通过向雄性小鼠饲喂西方饮食饲料和高糖饮水、联合注射cc14溶液的方式获得模型。
2.根据权利要求1所述的儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型建立方法，其特征在于，所述雄性小鼠为3周龄野生型雄性小鼠，背景品系为c57bl/6j，体重为10-12g。
3.根据权利要求1或2所述的儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型建立方法，其特征在于，所述饲喂的方式为自由饮食，自由饮水。
4.根据权利要求1～3任一所述的儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型建立方法，其特征在于，所述西方饮食饲料为包含40％脂肪供能、0.15％胆固醇、34％蔗糖含量的饲料。
5.根据权利要求1～3任一所述的儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型建立方法，其特征在于，所述高糖饮水包括23.1g/l果糖和/或18.9g/l葡萄糖。
6.根据权利要求1～3任一所述的儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型建立方法，其特征在于，所述cc14溶液由cc14与玉米油1∶19混合制备而成。
7.根据权利要求1～3任一所述的儿童非酒精性脂肪性肝炎动物模型建立方法...
【专利技术属性】
技术研发人员：姜璐，徐清扬，范建高，蔡威，
申请(专利权)人：上海市儿科医学研究所，
类型：发明
国别省市：
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