一种肿瘤载药微颗粒制剂及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种肿瘤载药微颗粒制剂及其制备方法，包括源自肿瘤干细胞凋亡释放的细胞囊泡和被包裹在所述细胞囊泡内作为有效成分的化疗药；用三维软纤维蛋白胶与肿瘤细胞于培养基中混合培养制得。本发明专利技术提供的载药微颗粒更有利于在肿瘤组织高度富集、肿瘤深部穿透及更易被普通肿瘤细胞和肿瘤干细胞有效摄取，提高化疗药物对普通肿瘤细胞和肿瘤干细胞的杀伤，能够解决普通肿瘤细胞来源的载药微颗粒不能渗透至肿瘤深部以杀伤较多肿瘤干细胞的问题，同时降低化疗药物对机体的毒副作用。

【技术实现步骤摘要】
一种肿瘤载药微颗粒制剂及其制备方法本申请是申请号2017111565930，申请日2017年11月20日，专利技术名称一种肿瘤载药微颗粒制剂及其制备方法的分案申请。
本专利技术涉及药物靶向载体
，尤其涉及一种肿瘤载药微颗粒制剂及其制备方法。
技术介绍
恶性肿瘤严重危害人类健康，化疗是其治疗的重要手段之一。但传统化疗药物主要针对普通肿瘤细胞，而缺氧的肿瘤深部存在一群数量极少的具有自我更新能力、多向分化潜能、体内成瘤能力强的肿瘤干细胞(或称肿瘤起始细胞、肿瘤再生细胞)，由于其高表达抗凋亡蛋白和ABC转运蛋白、极强的DNA修复能力等而具有高度耐药性，是导致肿瘤复发和转移的主要原因。纳米载药系统由于具有EPR效应，能够提高肿瘤靶向性、增强化疗药物疗效并降低毒副作用而被广泛用于肿瘤治疗。目前已有报道利用人工合成纳米载体负载抗肿瘤药物或肿瘤干细胞信号通路(如WNT,TGF-β,Notch,Hedgehog)抑制剂来杀伤肿瘤干细胞。由于纳米材料是外源性物质，其本身对生物机体存在一定的毒副作用，同时很多纳米材料的生产及工艺要求高，成本大，不利于临床推广应用。胞外囊泡(extracellularvesicles，EVs)是释放到细胞外的膜性小囊泡，在生理或病理条件下发挥重要作用，且囊泡具有低免疫原性、优良的体内循环稳定性及高细胞靶向性等特点。微颗粒(Microparticles)是细胞在相关信号的刺激下触发细胞膜下的骨架变化，导致细胞膜在局部向外膨出，包裹细胞内容物，并以囊泡的形式释放到细胞外所产生的一类胞外囊泡，其粒径在100-1000nm。肿瘤细胞来源载药微颗粒能有效杀伤肿瘤细胞且能逆转肿瘤干细胞的耐药性，为肿瘤生物治疗开辟了新的途径。但这种肿瘤细胞来源的载药微颗粒不能更深地渗透到肿瘤深部且更多地杀伤肿瘤干细胞。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有技术中存在普通肿瘤细胞来源的载药微颗粒不能渗透至肿瘤深部以杀伤较多肿瘤干细胞的问题，提供一种肿瘤载药微颗粒制剂及其制备方法。本专利技术提供的一种肿瘤载药微颗粒制剂，包括源自肿瘤干细胞凋亡释放的细胞囊泡和被包裹在所述细胞囊泡内作为有效成分的化疗药。大量研究表明，纳米特征，如粒径、表面电位、软硬度等深刻影响纳米药物体内过程，进而影响其抗肿瘤效果。与硬的纳米粒相比，软纳米粒血液循环中的液动力使其更容易变形，不易于被网状内皮系统吞噬，因而有利于其体内长循环，增加到达肿瘤组织的机会而有助于肿瘤富集。肿瘤干细胞相对于分化的肿瘤细胞更软，所分泌的囊泡也更软，更加容易变形并高效摄取干细胞来源的载药微颗粒，更利于其在体内血液长循环、靶向性更强，更深入的穿透至肿瘤深部，于肿瘤处富集，从而增强对肿瘤干细胞的杀伤作用，提高抗肿瘤效果。优选地，所述肿瘤干细胞是用三维软纤维蛋白胶与肿瘤细胞于培养基中混合培养制得。三维软纤维蛋白胶培养得到的肿瘤干细胞增殖良好、细胞存活率较高。优选地，所述肿瘤细胞与三维软纤维蛋白胶在培养基中的含量比为1～1.5×104个:1.5～2mg。本专利技术是基于机械力学筛选肿瘤干细胞，优选的配比是最合适的机械力形成条件，在此条件下，能更多的形成肿瘤干细胞。优选地，所述肿瘤细胞源自于急性白血病、淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、绒毛膜上皮癌、子宫颈癌、肝癌、膀胱癌或皮肤癌中的肿瘤细胞；所述化疗药包括治疗急性白血病、淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、绒毛膜上皮癌、子宫颈癌、肝癌、膀胱癌、皮肤癌及多种其他实体肿瘤的化疗药中的一种或多种。所述化疗药的最高量取决于所使用的化疗药在微颗粒中的最大饱和度，故在最高范围内可以得到不同规格的药剂。用于包裹化疗药的微颗粒可以是与所要治疗的肿瘤细胞不同种来源，也可以是同种来源，优选与所要治疗的肿瘤细胞同种的肿瘤干细胞。所述载药微颗粒制剂的剂型可为注射制剂或口服制剂。优选地，所述载药微颗粒制剂的粒度为200～600nm。所述载药微颗粒制剂为纳米尺寸，更有利于载药微颗粒制剂在肿瘤部位富集、穿过肿瘤血管并渗透肿瘤深部、更有效地被普通肿瘤细胞和肿瘤干细胞摄取来杀伤普通肿瘤细胞及肿瘤干细胞，对正常组织不会产生任何损伤，避免使用外源性材料作为载体而对机体产生的毒害作用。本专利技术还提供了一种肿瘤载药微颗粒制剂的制备方法，包括以下步骤：S1：肿瘤干细胞的筛选：用含三维软纤维蛋白胶的培养基培养肿瘤细胞，筛选出肿瘤干细胞克隆球，即得到肿瘤干细胞；S2：将化疗药物处理所述肿瘤干细胞使之凋亡，收集凋亡细胞所释放的载药微颗粒，该载药微颗粒即为细胞囊泡包裹化疗药后形成的所述肿瘤载药微颗粒制剂；或使用紫外线照射所述肿瘤干细胞使之细胞凋亡，收集凋亡细胞所释放的细胞囊泡，然后将所述细胞囊泡与化疗药进行孵育，使化疗药物被所述细胞囊泡包裹，收集载药微颗粒，即得到所述肿瘤载药微颗粒制剂。优选地，所述步骤S1中，肿瘤干细胞的筛选具体步骤为：预先将肿瘤细胞用培养基培养稀释至1～1.5×104个/mL，得到肿瘤细胞悬液，再与1.5～2mg/mL的三维软纤维蛋白胶以体积比1:1混合，向其中加入凝血酶混匀得到混合液后加入培养基中进行培养，将形成的肿瘤干细胞克隆球挑选出，即得到肿瘤干细胞。所述培养基可根据肿瘤来源不同而采用不同的培养基，优选RPMI1640培养基，在将混合液加入RPMI1640培养基中培养前，可先将1μL的凝血酶(0.1U/μL)加入预冷的96孔板中，再加入至肿瘤细胞悬液和三维软纤维蛋白胶混合的50μL混合物中得到混合液，再将所述混合液加入200μLRPMI1640完全培养基中培养。本专利技术是基于机械力学筛选肿瘤干细胞，优选的配比是最合适的机械力形成条件，在此条件下，能更多的形成肿瘤干细胞。优选地，在加入所述RPMI1640培养基之前，将所述混合液于37℃的温度下孵育10～15min。优选的时间是保证三维软纤维蛋白胶更好的固化形成合适的机械力。优选地，在使所述肿瘤干细胞克隆球凋亡之前还包括用肿瘤干细胞培养基对肿瘤干细胞进行扩大培养的步骤；所述肿瘤干细胞培养基为：含2g/mL的HLA-B27(属于HLA抗原)、20ng/mL小鼠表皮细胞生长因子和1g/mL的谷氨酰胺的DMEM-F12培养基。优选的肿瘤干细胞培养基是使经三维软纤维蛋白胶筛选形成的干细胞能在保持干性特征的情况下大量扩增。优选地，所述步骤S2中，在4～6℃低温下、以200～20000g的离心力收集载药微颗粒。优选地离心条件可以将肿瘤干细胞分泌的粒径在200～600nm的囊泡更有效的富集。本专利技术的技术方案具有如下有益效果：(1)将源自经过含三维软纤维蛋白胶的培养基中培养后的肿瘤干细胞来源的微颗粒作为本专利技术的药物制剂的载体，解决了外源载体给药对机体的毒副作用，同时使作为有效成分的化疗药在肿瘤部位富集、肿瘤深部穿透及被肿瘤细胞摄取，使本专利技术的载药微颗粒在降低化疗药对正常细胞的毒副作用的同时，提高了化疗药对肿瘤细胞的杀伤效果。(2)通过含三维软纤维蛋白胶的培养基培养得到的肿瘤干细胞，其凋亡释放得到的微颗粒作为载体，相较于普通肿瘤细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肿瘤载药微颗粒制剂，其特征在于，包括源自肿瘤干细胞凋亡释放的细胞囊泡和被包裹在所述细胞囊泡内作为有效成分的化疗药。/n

【技术特征摘要】
1.一种肿瘤载药微颗粒制剂，其特征在于，包括源自肿瘤干细胞凋亡释放的细胞囊泡和被包裹在所述细胞囊泡内作为有效成分的化疗药。


2.如权利要求1所述的肿瘤载药微颗粒制剂，其特征在于，所述肿瘤干细胞是用三维软纤维蛋白胶与肿瘤细胞于培养基中混合培养制得。


3.如权利要求2所述的肿瘤载药微颗粒制剂，其特征在于，所述肿瘤细胞与三维软纤维蛋白胶在培养基中的含量比为1～1.5×104个:1.5～2mg。


4.如权利要求1所述的肿瘤载药微颗粒制剂，其特征在于，所述肿瘤干细胞源自于急性白血病、淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、绒毛膜上皮癌、子宫颈癌、肝癌、膀胱癌或皮肤癌中的肿瘤干细胞；所述载药微颗粒制剂中所包含的化疗药为含有治疗肿瘤作用的化疗药；所述化疗药包括治疗急性白血病、淋巴瘤、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、绒毛膜上皮癌、子宫颈癌、肝癌、膀胱癌、皮肤癌及多种其他实体肿瘤的化疗药中的一种或多种。


5.如权利要求1所述的肿瘤载药微颗粒制剂，其特征在于，所述载药微颗粒制剂的粒径为200～600nm。


6.一种如权利要求1～5任一项所述的肿瘤载药微颗粒制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：肿瘤干细胞的筛选：用三维软纤维蛋白胶与肿瘤细胞于培养基中混合培养，筛选出肿瘤干细胞克隆球，即得到肿瘤干细胞；
S2：将化疗药物处理所述肿瘤干细胞使之凋亡，收集凋亡细胞所释放的载药微颗粒，该载药微颗粒即...

【专利技术属性】
技术研发人员：甘璐，杨祥良，梁清乐，别娜娜，
申请(专利权)人：华中科技大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42