一种海水稻长毛谷成熟胚愈伤组织培养繁殖方法技术

本发明专利技术公开了一种海水稻长毛谷成熟胚愈伤组织培养繁殖方法，包括以下步骤：步骤1：筛选适合于海水稻长毛谷成熟胚组织培养的基本成分；步骤2：愈伤组织诱导培养；步骤3：愈伤组织继代培养；步骤4：愈伤组织诱导分化培养；步骤5：幼苗诱导生根培养；步骤6：苗的锻炼和移栽：苗至瓶盖顶部，就要及时开盖，加入适量无菌水，炼苗2

【技术实现步骤摘要】
天，然后洗去琼脂，移栽木村B营养液中，培养一个星期，然后移到土中继续培养。
[0014]优选的，所述愈伤组织诱导培养包括以下步骤：
[0015]步骤1：将籼稻成熟种子去壳后，先用3％Ca(OCl)2消毒2.5小时；
[0016]步骤2：用无菌水冲洗3遍，然后加入适量的无菌水，放在4℃冰箱过夜；
[0017]步骤3：第二天再用3％Ca(OCl)2消毒1小时，无菌水冲洗三遍，放在灭菌过的滤纸上吹干表面水分；
[0018]步骤4：将消毒的籼稻成熟胚接入到愈伤组织诱导培养基中，在30℃的暗环境下培养3
‑
4周左右，诱导愈伤组织。
[0019]优选的，所述愈伤组织继代培养包括以下步骤：
[0020]步骤1：将诱导出来的愈伤组织，挑取淡黄色、致密呈球状自然分裂的胚性愈伤组织，接种到继代培养基中；
[0021]步骤2：将继代培养基放在30℃暗环境下培养，继代培养周期为10
‑
15 天或可转移至暗处30℃继续培养1周。
[0022]优选的，所述愈伤组织诱导分化培养包括以下步骤：
[0023]步骤1：挑取颜色鲜黄的愈伤组织3
‑
5颗移入分化培养基平板上；
[0024]步骤2：将分化培养基平板放在4.5klux、30℃培养，待分化成苗(4
‑
5 周)。
[0025]优选的，所述幼苗诱导生根培养包括以下步骤：
[0026]步骤1：筛选苗长至2
‑
5厘米的幼苗，用剪刀从苗基部剪去老根和愈伤组织；
[0027]步骤2：放入装有生根培养基的带盖广口瓶中壮苗，培养1周。
[0028]优选的，所述适合于海水稻长毛谷成熟胚组织培养的基本成分包括：
[0029]N6大量元素：KNO3：2.830g/L；KH2PO4：0.400g/L；MgSO4
·
7H2O：0.185g/L； CaCl2
·
2H2O：0.166g/L；(NH4)2SO4：0.463g/L；
[0030]B5微量元素：KI：0.75mg/L；H3BO3：3mg/L；MnSO4
·
4H2O：10mg/L； ZnSO4
·
7H2O：2mg/L；Na2MoO4
·
2H2O：0.25mg/L；CoCl2
·
6H2O：0.025mg/L； CuSO4
·
5H2O：0.025mg/L
[0031]优选的，所述诱导培养基的配方为：
[0032]在N6大量元素和B5微量元素基础上，添加2，4
‑
D3 mg/L；L
‑
proline： 2.878g/L；L
‑
谷氨酸：0.5g/L；肌醇：0.1g/L；水解酪蛋白：0.3g/L；蔗糖： 30g/L；Phytagel：5g/L，pH值为5.8。
[0033]优选的，所述继代培养基配方为：
[0034]在N6大量元素和B5微量元素基础上，添加2，4
‑
D：3mg/L；L
‑
proline： 2.878g/L；L
‑
谷氨酸：0.5g/L；肌醇：0.1g/L；水解酪蛋白：0.3g/L；蔗糖： 30g/L；Phytagel：5g/L，pH值为5.8。
[0035]优选的，所述分化培养基配方为：
[0036]在MS培养基基本成分基础上，添加NAA：1mg/L；KT：1mg/L；肌醇：0.1g/L；水解酪蛋白：2g/L；蔗糖：30.0g/L；山梨醇：30g/L；Agar：12g/L，pH值为 5.8。
[0037]优选的，所述生根培养基配方为：
[0038]在1/2MS培养基基本成分基础上，添加肌醇：0.1g/L；蔗糖：20.0g/L； Phytagel：4.5g/L，pH值为5.8。
[0039]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：该海水稻长毛谷成熟胚愈伤组织培养繁
殖方法，操作简单，易于实施，可一次性培育出大量的长毛谷生长幼苗，能够有效的缩短育苗时间，且所用的培养基和试剂易配置，成本低，易大范围推广，同时无需大量使用光照设备提供光照，减少培育成本；
[0040]1、通过整体使用的培养基和试剂均为易配置型，适宜大范围推广使用，同时使用成本低，从而减少培育成本，易于实施，同时可一次性培育出大量的长毛谷生长幼苗；
[0041]2、通过愈伤组织诱导培养和愈伤组织继代培养均可在暗环境下进行培养，操作简单，也无需大量使用光照设备提供光照，减少培育成本；
[0042]3、通过整体步骤使用时间较短，能够较快地使愈伤组织培养称为幼苗进行生根，减少育苗使用时间，从而适宜大规模进行培育。
具体实施方式
[0043]下面将结合本专利技术实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0044]本专利技术提供一种技术方案：一种海水稻长毛谷成熟胚愈伤组织培养繁殖方法，包括以下步骤：步骤1：筛选适合于海水稻长毛谷成熟胚组织培养的基本成分；步骤2：愈伤组织诱导培养；步骤3：愈伤组织继代培养；步骤4：愈伤组织诱导分化培养；步骤5：幼苗诱导生根培养；步骤6：苗的锻炼和移栽：苗至瓶盖顶部，就要及时开盖，加入适量无菌水，炼苗2
‑
5天，然后洗去琼脂，移栽木村B营养液中，培养一个星期，然后移到土中继续培养。
[0045]愈伤组织诱导培养包括以下步骤：步骤1：将籼稻成熟种子去壳后，先用 3％Ca(OCl)2消毒2.5小时；步骤2：用无菌水冲洗3遍，然后加入适量的无菌水，放在4℃冰箱过夜；步骤3：第二天再用3％Ca(OCl)2消毒1小时，无菌水冲洗三遍，放在灭菌过的滤纸上吹干表面水分；步骤4：将消毒的籼稻成熟胚接入到愈伤组织诱导培养基中，在30℃的暗环境下培养3
‑
4周左右，诱导愈伤组织。
[0046]愈伤组织继代培养包括以下步骤：步骤1：将诱导出来的愈伤组织，挑取淡黄色、致密呈球状自然分裂的胚性愈伤组织，接种到继代培养基中；步骤2：将继代培养基放在30℃暗环境下培养，继代培养周期为10
‑
15天或转移至暗处30℃继续培养1周。
[0047]愈伤组织诱导分化培养包括以下步骤：步骤1：挑取颜色鲜黄的愈伤组织 3
‑
5颗移入分化培养基平板上；步骤2：将分化培养基平板放在4.5klux、30℃培养，待分化成苗(4
‑
5周)。
[0048]幼苗诱导生根培养包括以下步骤：步骤1：筛选苗长至2
‑
5厘米的幼苗，用剪刀从苗基部剪去老根和愈伤组织；步骤2：放入装有生根培养基的带盖广口瓶中壮苗，培养1周。
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种海水稻长毛谷成熟胚愈伤组织培养繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：筛选适合于海水稻长毛谷成熟胚组织培养的基本成分；步骤2：愈伤组织诱导培养；步骤3：愈伤组织继代培养；步骤4：愈伤组织诱导分化培养；步骤5：幼苗诱导生根培养；步骤6：苗的锻炼和移栽：苗至瓶盖顶部，就要及时开盖，加入适量无菌水，炼苗2
‑
5天，然后洗去琼脂，移栽木村B营养液中，培养一个星期，然后移到土中继续培养。2.根据权利要求1所述的一种海水稻长毛谷成熟胚愈伤组织培养繁殖方法，其特征在于：所述愈伤组织诱导培养包括以下步骤：步骤1：将籼稻成熟种子去壳后，先用3％Ca(OCl)2消毒2.5小时；步骤2：用无菌水冲洗3遍，然后加入适量的无菌水，放在4℃冰箱过夜；步骤3：第二天再用3%Ca(OCl)2消毒1小时，无菌水冲洗三遍，放在灭菌过的滤纸上吹干表面水分；步骤4：将消毒的籼稻成熟胚接入到愈伤组织诱导培养基中，在30 ℃的暗环境下培养3
‑
4周左右，诱导愈伤组织。3.根据权利要求1所述的一种海水稻长毛谷成熟胚愈伤组织培养繁殖方法，其特征在于：所述愈伤组织继代培养包括以下步骤：步骤1：将诱导出来的愈伤组织，挑取淡黄色、致密呈球状自然分裂的胚性愈伤组织，接种到继代培养基中；步骤2：将继代培养基放在30℃暗环境下培养，继代培养周期为10
‑
15天或可转移至暗处30℃继续培养1周。4.根据权利要求1所述的一种海水稻长毛谷成熟胚愈伤组织培养繁殖方法，其特征在于：所述愈伤组织诱导分化培养包括以下步骤：步骤1：挑取颜色鲜黄的愈伤组织3
‑
5颗移入分化培养基平板上；步骤2：将分化培养基平板放在4.5 klux、30℃培养，待分化成苗（4
‑
5周）。5.根据权利要求1所述的一种海水稻长毛谷成熟胚愈伤组织培养繁殖方法，其特征在于：所述幼苗诱导生根培养包括以下步骤：步骤1：筛选苗长至2
‑
5厘米的幼苗，用剪刀从苗基部剪去老根和愈伤组织；步骤2：放入装有生根培养基的带盖广口瓶中壮苗，培养1周。6.根据权利要求1所述的一种海水稻长毛谷成熟胚愈伤组织培养繁殖方法，其特征在于：所述适合于海水稻长毛谷成熟胚组织培养的基本成分包括：N6大量元素：KNO3：2.830g/L；KH...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈苗，周鸿凯，陈春花，吴湛云，吴佩阳，梁祥晶，林妙虹，谢玉玲，莫俊杰，杨善，杨少瑕，
申请(专利权)人：广东海洋大学，
类型：发明
国别省市：