【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于抗肿瘤药物领域，具体涉及半叶马尾藻岩藻聚糖的制备方法及在制备抗肝癌药物中的应用。
技术介绍
1、肿瘤是当今世界最严重的一种疾病之一，它是由于机体被多种致癌因素影响，致使局部某一个细胞在基因水平上发生了非正常生长，从而发生异常增生而形成了肿瘤。肿瘤的治疗手段通常是化疗，其有很严重的副作用，因此发展一种毒副作用小的天然药物至关重要。
2、大量实验事实证明，岩藻聚糖硫酸酯(fucoidan)作为一种含有硫酸基团的阴离子多糖，主要存在于褐藻及一些海洋无脊椎动物中，在抗肿瘤、免疫调节和抗衰老等方面具有良好的应用前景，而且毒副作用小。因此，在马尾藻多糖中寻找高效低毒抗肿瘤药物是当前肿瘤研究的热点，具有一定的理论和现实意义。
3、近年来，已有马尾藻多糖被证实具有抗肿瘤作用。马尾藻属的藻类资源十分丰富，我国北起辽东半岛南至雷州半岛均有分布。不同种类马尾藻中多糖的理化特性和生物活性有一定差别。目前已有文献主要集中于马尾藻提取以及活性方面的应用。对于马尾藻岩藻聚糖在细胞内作用靶点的报道很少、对于不同肿瘤治疗具有高活性的马尾藻岩藻聚糖的报道较少。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供具有抗肿瘤活性的半叶马尾藻岩藻聚糖的制备方法以及提供半叶马尾藻岩藻聚糖在制备抗肝癌药物中的应用，以解决上述现有技术存在的问题。本专利技术实验结果表明，半叶马尾藻岩藻聚糖(fb)对hepg2肝癌细胞具有较强的抑制作用，且显著强于亨氏马尾藻多糖(fh)和羊栖菜多糖(sfps)对hepg2
2、本专利技术的第一个目的是提供一种半叶马尾藻岩藻聚糖的制备方法，包括以下步骤：
3、s1.半叶马尾藻经粉碎过筛，加水浸提，经超声和浓缩后醇沉，除脂肪，sevage除蛋白，透析并真空冷冻干燥，得到半叶马尾藻岩藻聚糖(fb)；
4、s2.将半叶马尾藻岩藻聚糖(fb)溶解于蒸馏水成质量分数0.1％的水溶液，装在deae-52纤维素柱上，先用蒸馏水进行洗脱，然后用0.2～1.8m氯化钠水溶液以1ml/min的流速进行线性梯度洗脱，洗脱液在试管中使用自动收集器收集，收集0.6m和1.5m氯化钠水溶液的洗脱馏分，分别为f1和f2；分别进行透析、浓缩和冻干；
5、s3.采用过氧化氢和抗坏血酸分别降解f1和f2，分别离心得到混合物；将上清液透析、浓缩、冻干，最后，用separose cl-6b凝胶柱纯化，分别得到半叶马尾藻岩藻聚糖df1和半叶马尾藻岩藻聚糖df2。
6、优选，所述的步骤s1为：半叶马尾藻经粉碎过孔径0.18mm筛，以半叶马尾藻与水为1g∶30ml的比例加水，然后在80℃恒温水浴锅中浸提3.5h，60℃、350w下超声50min，4000r/min离心20min浓缩，向浓缩后获得的浓缩液中加入无水乙醇，浓缩液与无水乙醇的体积比为7∶3，充分混匀，24h后离心得到上清液，继续加无水乙醇至上清液的体积分数为80％，充分混匀，24h后离心，得到沉淀；用丙酮和无水乙醇交替洗涤沉淀各2次；用少量水溶解沉淀得多糖溶液，向多糖溶液中加入sevage，多糖溶液与sevage的体积比为5∶1，剧烈振荡1h，于分液漏斗中静置分层后，除去沉淀；重复上述步骤6次，直至没有变性蛋白出现；所述的sevage是将正丁醇与氯仿以体积比1∶4混合得到的；透析48h并真空冷冻干燥，得到半叶马尾藻岩藻聚糖(fb)。
7、优选，所述的步骤s2中，所述的deae-52纤维素柱规格为2.6×50cm，cl-形式。
8、优选，所述的步骤s3中，所述的采用过氧化氢和抗坏血酸分别降解f1和f2，包括以下步骤：将f1和f2用蒸馏水配制成15g/l浓度的的水溶液，置于30℃恒温水浴中，以所用的f1或f2原料质量计，每0.3g f1或f2原料加入0.2590g抗坏血酸，边搅拌边加入1ml体积分数5％过氧化氢水溶液，搅拌反应2h。
9、优选，所述的separose cl-6b凝胶柱规格为1.6×80cm。
10、本专利技术还提供半叶马尾藻岩藻聚糖在制备抗肝癌药物中的应用。
11、优选，所述的半叶马尾藻岩藻聚糖为半叶马尾藻岩藻聚糖df1和半叶马尾藻岩藻聚糖df2，是根据所述的制备方法制备得到的。
12、优选，所述的半叶马尾藻岩藻聚糖为半叶马尾藻岩藻聚糖df2。
13、优选，所述的应用，为半叶马尾藻岩藻聚糖在制备通过死亡受体途径和线粒体途径诱导肿瘤细胞凋亡的抗肝癌药物中的应用。
14、本专利技术还提供一种抗肝癌药物，含有所述的半叶马尾藻岩藻聚糖df1和/或半叶马尾藻岩藻聚糖df2及药物可接受的载体。
15、本专利技术采用超声波辅助热水浸提、乙醇分级沉淀、sevage法脱蛋白后提取三种马尾藻多糖组分fh(亨氏马尾藻多糖)、fb(半叶马尾藻岩藻聚糖)和sfps(羊栖菜多糖)。进一步对其化学含量进行了分析，发现fh、fb和sfps均是含有硫酸基并伴有部分糖醛酸的杂多糖。fb的总糖(75.33±3.99)％是三种马尾藻多糖中最高的，且l-岩藻糖(15.63±3.37)％和硫酸基的含量(29.16±0.86)％均高于fh。进一步红外光谱分析表明，组分fh、fb和sfps都含有多糖的特征吸收峰，且都含有羧基和硫酸基，表明均为含有糖醛酸的硫酸多糖。数据表明fh、fb和sfps的硫酸根都是连接在c2或c3位处于平伏键位置的。此外，三种马尾藻多糖对hepg2肝癌细胞均具有一定的抑制作用，其中fb对hepg2肝癌细胞的作用最强。进一步分析其抑制hepg2肝癌细胞增殖的机理发现，df1、df2(半叶马尾藻岩藻聚糖)处理hepg2肝癌细胞后，通过外源性途径(死亡受体途径)和内源性途径(线粒体途径)相互联系、共同参与，最终诱导细胞凋亡。因此，半叶马尾藻岩藻聚糖具有较强的抗肿瘤作用，可以用于制备抗肝癌药物。
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1.一种半叶马尾藻岩藻聚糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤S1为：半叶马尾藻经粉碎过孔径0.18mm筛，以半叶马尾藻与水为1g∶30mL的比例加水，然后在80℃恒温水浴锅中浸提3.5h，60℃、350W下超声50min，4000r/min离心20min浓缩，向浓缩后获得的浓缩液中加入无水乙醇，浓缩液与无水乙醇的体积比为7∶3，充分混匀，24h后离心得到上清液，继续加无水乙醇至上清液的体积分数为80％，充分混匀，24h后离心，得到沉淀；用丙酮和无水乙醇交替洗涤沉淀各2次；用少量水溶解沉淀得多糖溶液，向多糖溶液中加入Sevage，多糖溶液与Sevage的体积比为5∶1，剧烈振荡1h，于分液漏斗中静置分层后，除去沉淀；重复上述步骤6次，直至没有变性蛋白出现；所述的Sevage是将正丁醇与氯仿以体积比1∶4混合得到的；透析48h并真空冷冻干燥，得到半叶马尾藻岩藻聚糖Fb。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤S2中，所述的DEAE-52纤维素柱规格为2.6×50cm，Cl-形式。<...
【技术特征摘要】
1.一种半叶马尾藻岩藻聚糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤s1为：半叶马尾藻经粉碎过孔径0.18mm筛，以半叶马尾藻与水为1g∶30ml的比例加水，然后在80℃恒温水浴锅中浸提3.5h，60℃、350w下超声50min，4000r/min离心20min浓缩，向浓缩后获得的浓缩液中加入无水乙醇，浓缩液与无水乙醇的体积比为7∶3，充分混匀，24h后离心得到上清液，继续加无水乙醇至上清液的体积分数为80％，充分混匀，24h后离心，得到沉淀；用丙酮和无水乙醇交替洗涤沉淀各2次；用少量水溶解沉淀得多糖溶液，向多糖溶液中加入sevage，多糖溶液与sevage的体积比为5∶1，剧烈振荡1h，于分液漏斗中静置分层后，除去沉淀；重复上述步骤6次，直至没有变性蛋白出现；所述的sevage是将正丁醇与氯仿以体积比1∶4混合得到的；透析48h并真空冷冻干燥，得到半叶马尾藻岩藻聚糖fb。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤s2中，所述的deae-52纤维素柱规格为2.6×50cm，cl-形式。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤s3中，所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈建平，罗宝浈，钟赛意，梁远维，刘颖，刘晓菲，李瑞，宋兵兵，汪卓，
申请(专利权)人：广东海洋大学，
类型：发明
国别省市：
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