一种检测枸橼酸托法替布中间体及其相关杂质的方法技术

本发明专利技术属于分析化学领域，具体涉及一种HPLC法分离测定枸橼酸托法替布中间体及其相关杂质的方法，所述方法采用的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用流动相A和流动相B进行梯度洗脱，进入检测器进行检测；所述流动相A为磷酸盐缓冲液

【技术实现步骤摘要】
一种检测枸橼酸托法替布中间体及其相关杂质的方法


[0001]本专利技术属于分析化学领域，具体时间涉及一种检测枸橼酸托法替布中间体及其相关杂质的方法。

技术介绍

[0002]托法替布(Tofacitinib)，化学名为N
‑
甲基
‑
N
‑
[(3R，4R)
‑1‑
氰乙酰基
‑4‑
甲基哌啶
‑3‑
基]‑7‑
H
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺，是由辉瑞公司(Pfrizer)开发的一种抗类风湿性关节炎口服抑制剂，其枸橼酸盐(枸橼酸托法替布，Tofacitinib Citrate)已经通过Ⅲ期临床试验，于2012年11月6日获美国食品药品管理局(FDA)批准上市，于2013年3月25日获得日本医药品医疗器械综合机构(PMDA)批准上市，于2017年3月22日获得欧洲药品质量管理局(EDQM)批准上市。
[0003]目前已报道的托法替布制备方法较多，其中使用4
‑
氯
‑7‑
对甲苯磺酰基
‑
7H
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶(起始物料1)和(3R,4R)
‑1‑
苄基
‑
N,4
‑
二甲基哌啶
‑3‑
胺盐酸盐(起始物料2)为起始物料，经缩合、脱保护、氢化、氰基乙酰化得到托法替布是一种相对比较成熟的制备方法，为大多数申报厂家的首选路线。其合成路线如下：
[0004][0005]通常来说，一种药物杂质总含量应小于1.0％，单个杂质含量应小于0.1％，对于制备枸橼酸托法替布过程中产生的杂质或引入的有关物质，不论是在原料药还是制剂中均需要进行严格控制。
[0006]N
‑
((3R,4R)
‑1‑
苄基
‑4‑
甲基哌啶
‑3‑
基)
‑
N
‑
甲基
‑
7H
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺，是合成枸橼酸托法替布的关键中间体，结构如式Ⅰ所示：
[0007][0008]我们研究发现，枸橼酸托法替布的关键中间体Ⅰ的质量直接影响枸橼酸托法替布成品的质量，对枸橼酸托法替布的关键中间体的分析研究对反应过程的控制以及杂质控制对枸橼酸托法替布成品质量的提高起着至关重要的作用。
[0009]申请号为201510124650.1的中国专利公开了托法替布中间体杂质、托法替布杂质及其合成方法，以及托法替布的质量监控方法,但是其主要是对含氯中间体化合物进行控制，由于合成路线不同，所涉及的杂质也不一样。另有文献《沈阳药科大学学报》2018年第35卷第2期131页，报道了RP
‑
HPLC法测定枸橼酸托法替尼含量以及有关物质。但是，目前为止，尚未有文献单独的报导枸橼酸托法替布的关键中间体Ⅰ的检测方法，更没有公开的方法报道可以同时分离测定枸橼酸托法替布中间体Ⅰ及其相关杂质的方法，因此，有必要建立一种简单有效的方法对该关键中间体进行质量控制。

技术实现思路

[0010]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种HPLC法分离测定枸橼酸托法替布中间体及其相关杂质的方法；本专利技术的方法可以有效的将枸橼酸托法替布中间体及其相关杂质分开，且该方法具有很高的灵敏度及分离度，重复性及耐用性好，操作简单，结果稳定可靠。
[0011]为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：
[0012]HPLC法分离测定枸橼酸托法替布中间体及其相关杂质的方法，所述方法采用的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用流动相A和流动相B进行梯度洗脱，进入检测器进行检测；所述相关杂质包括杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f和杂质g的一种或多种，具体结构式如下所示：
[0013][0014][0015]所述流动相A为磷酸盐缓冲液，所述流动相B为乙腈和甲醇的混合液。
[0016]所述枸橼酸托法替布中间体为N
‑
((3R,4R)
‑1‑
苄基
‑4‑
甲基哌啶
‑3‑
基)
‑
N
‑
甲基
‑
7H
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺，是合成枸橼酸托法替布的关键中间体，本专利技术中，也称为式Ⅰ中间体或者枸橼酸托法替布中间体Ⅰ或者枸橼酸托法替布中间体，其化学式为C
20
H
25
N5，结构如式Ⅰ所示：
[0017][0018]该中间体的分析研究对反应过程的控制以及质量的提高起着至关重要的作用，也直接影响枸橼酸托法替布成品的质量。本专利技术的检测分析方法可以有效的将枸橼酸托法替布中间体及其相关杂质分开，且该方法具有很高的灵敏度及分离度，重复性及耐用性好，操
作简单，结果稳定可靠。
[0019]所述流动相A为磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为95:5；
[0020]作为一种优选，所述流动相A磷酸盐缓冲液为pH 3.0
‑
4.5的10mmol/L磷酸二氢钾水溶液，即所述流动相A为用磷酸调节10mmol/L磷酸二氢钾pH值至3.0
‑
4.5形成的磷酸盐缓冲液；
[0021]作为一种优选，所述流动相A磷酸盐缓冲液为pH 3.5的10mmol/L磷酸二氢钾水溶液，即所述流动相A为用磷酸调节10mmol/L磷酸二氢钾pH值至3.5形成的磷酸盐缓冲液；
[0022]进一步，所述流动相B为乙腈和甲醇的混合液，其体积比为93:7；
[0023]进一步，所述梯度洗脱设置如下：
[0024][0025]所述流动相进行洗脱的流速为0.7～1.3ml/min。
[0026]作为一种优选，所述洗脱设置如下：
[0027][0028]所述流动相进行洗脱的流速为1.0ml/min；
[0029]进一步，所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱填料的颗粒粒径为3
‑
6μm；所述色谱柱的柱温为20
‑
35℃；
[0030]作为一种优选，所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱填料的颗粒粒径为5μm；所述色谱柱的柱温为25℃；
[0031]作为一种优选，所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱为YMC
‑
pack ODS
‑
AQ；
[0032]进一步，所述检测器的检测波长为220nm
±
2nm；
[0033]作为一种优选，所述检测器的检测波长为220nm；
[0034]进一步，HPLC法分离测定枸橼酸托法替布中间体及其相关杂质的方法，所述相关杂质为杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.HPLC法分离测定枸橼酸托法替布中间体及其相关杂质的方法，其特征在于，所述方法采用的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料，采用流动相A和流动相B进行梯度洗脱，进入检测器进行检测；所述相关杂质是杂质a、杂质b、杂质c、杂质d、杂质e、杂质f和杂质g的一种或多种，具体结构式如下所示：所述枸橼酸托法替布中间体，化学名为：N
‑
((3R,4R)
‑1‑
苄基
‑4‑
甲基哌啶
‑3‑
基)
‑
N
‑
甲基
‑
7H
‑
吡咯并[2,3
‑
d]嘧啶
‑4‑
胺，结构式如式Ⅰ所示：
所述流动相A为磷酸盐缓冲液
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乙腈95:5(体积比)，所述流动相B为乙腈和甲醇混合液，所述梯度洗脱设置如下：所述流动相进行洗脱的流速为0.7～1.3ml/min。2.根据权利要求1所述的方法，所述洗脱设置如下：3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液为用磷酸调节到pH 3.0～4.5的10mmol/L磷酸二氢钾水溶液。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液为用磷酸调节pH 3.5的10mmol/L磷酸二氢钾水溶液。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述流动相B为体积比93:7的乙腈和甲醇混合溶液。6...

【专利技术属性】
技术研发人员：李惠，谢军，姜春阳，杜丽丽，许全胜，周小群，
申请(专利权)人：上海博悦生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：