一种基因组DNA室温保存卡及其制作方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种基因组DNA室温保存卡及其制作方法与应用，属于生物技术领域。所述的基因组DNA室温保存卡，包括具有液体吸收性能的介质和细胞保存液体预混剂。本发明专利技术的基因组DNA室温保存卡，能在室温下长期确保基因组DNA结构的完整性和理化性质的稳定性、避免基因组信息的丢失或变化；还可延长基因组样本在室温下的储存时间及实现远距离运输。本发明专利技术所涉及基因组DNA长期常温保存及提取方法可为体细胞的突变监测，疾病预防和疾病治疗提供有力保障。障。

【技术实现步骤摘要】
一种基因组DNA室温保存卡及其制作方法与应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及生物基因样本常温保存技术，具体涉及一种基因组DNA室温保存卡及其制作方法与应用。

技术介绍

[0002]基因组DNA(genomic DNA)是指组成生物基因组的所有DNA，人体基因组DNA蕴藏人体全部的遗传信息，是遗传和物种延续的物质基础，它使后代出现与亲代相似的性状。保存人体基因组DNA样本也即保存人体的全部遗传信息。近年来，随着基因组测序技术的高速发展以及国家一系列利好政策的推动，科学家已能对基因组DNA的遗传信息和生命密码进行全面的分析和解读。越来越多的研究证明，多种疾病特别是肿瘤，都是由于体细胞基因突变改变了细胞的性能，进而又改变了该组织和器官的性能，导致出现疾病症状。因此，在婴儿期以较低的成本将基因样本保存起来，待将来需要是将基因样本取出进行检测以对体细胞的突变进行监测，对预防疾病发生和疾病治疗具有重要意义。
[0003]目前，已有许多基因保存公司开展个人基因样本的保存服务，现有技术大多将分离获得的基因组DNA样本贮存在超低温条件下以长期维持其理化性质及生物学活性的稳定，其保存条件苛刻，成本较高，限制了其广泛应用。因此，开发能在常温下保存基因组DNA的技术，在降低基因保存的成本的同时确保基因组DNA结构的完整性和理化性质的稳定性、避免基因组信息的丢失或变化，对该领域的发展十分必要。
[0004]FTA(Flinders Technology Associates)卡是英国Whatman公司专利产品，为室温下采集、运输和储存检材提供了稳妥、安全、可靠的方法。有研究表明，FTA卡法可作为一种通用、快速、简便的DNA模板制备方法，FTA卡中含有特殊的化学物质，当检材吸附在卡上时，细胞膜和细胞器被裂解，蛋白质变性，释放出的核酸被捕获在FTA卡纤维上，从而免受核酸酶、氧化剂和紫外线损伤。FTA卡可以快速地使有机体(包括血液中的各种病原体)失活，并抑制细菌和其他微生物的生长，基因组DNA可在FTA卡上室温条件储存17年以上，而不会降低扩增效率。另外，美国公司研发的FTA基因保藏系统在常温保存基因方面也有很好的效果，可以长时间的保存基因样品，而无须考虑在远距离运输基因样品时环境温度等条件对基因样品的影响。
[0005]中国专利CN 101153263 B公开了一种血液DNA保存卡及其制作方法，其保护一种血液保存卡，包括具有吸附能力的纤维状物的介质，该介质内吸附有盐分，所述盐分包括细胞裂解剂、核酸酶抑制剂、使病原菌和病毒蛋白变性的物质和抗氧化抑制剂。然而，上述专利中保护的是从细胞内解离出的裸露DNA，离开细胞结构的保护，DNA稳定性将下降。因此，寻找一种能够保存基因组原位包封样本的保存卡具有重要意义。

技术实现思路

[0006]本专利技术的首要目的在于提供一种基因组DNA室温保存卡，旨在延长现有基因组DNA的保存时间并简化保存及提取的操作步骤。
[0007]本专利技术的第二个目的是在于提供上述基因组DNA室温保存卡的制作方法。
[0008]本专利技术的第三个目的是在于提供上述基因组DNA室温保存卡的应用。
[0009]本专利技术的目的通过以下技术方案实现：
[0010]一种基因组DNA室温保存卡，包括具有液体吸收性能的介质和细胞保存液体预混剂。
[0011]所述的介质优选包括但不限于滤纸、硝酸纤维素膜、尼龙膜、玻璃纤维素膜和硅胶膜中的至少一种。
[0012]所述的具有液体吸收性能的介质优选为经过氨基化试剂处理的介质，即氨基化的具有液体吸收性能的介质。
[0013]所述的介质经过氨基化试剂处理的方法优选为：将介质与氨基化试剂按照10～50μL氨基化试剂/cm2介质的比例混合，于密封条件下共孵育30min，然后取出氨基化的介质于0～80℃至完全干燥，即得具有液体吸收性能的介质。
[0014]为进一步提升保存效果，上述具有液体吸收性能的介质还可以经过核酸酶抑制剂、抗氧化抑制剂和/或其他能够使病原菌和病毒蛋白变性的试剂处理。
[0015]所述的细胞保存液体预混剂，包括如下按重量份计的各组分：0～200份抗凝血剂，0～200份细胞稳定剂，1～200份反应型细胞包封剂，0.1～200份pH调节剂，0.1～200份离子浓度调节剂和500～1000份无RNase纯化水。
[0016]当待保存细胞为血液时，抗凝血剂的加入能够有效防止血液凝固；当待保存细胞不是血液时，可以不加入抗凝血剂。
[0017]所述的抗凝血剂优选为0～150份；进一步优选为0～120份；更优选为0～50份。
[0018]所述的抗凝血剂优选为枸橼酸钠、柠檬酸钠、肝素钠、肝素锂、乙二胺四乙酸二钾、乙二胺四乙酸三钾和乙二胺四乙酸二钠中的至少一种。
[0019]所述的细胞稳定剂优选为1～200份；进一步优选为5～200份；更优选为120～180份。
[0020]所述的细胞稳定剂优选为甘油、羟乙基淀粉、羧甲基纤维素钠、二甲亚砜、蔗糖、聚乙烯醇、海藻糖和甜菜碱中的至少一种。
[0021]所述的反应型细胞包封剂优选为1～100份；进一步优选为1～50份；更优选为5～30份。
[0022]所述的反应型细胞包封剂优选为可形成纳米层的化合物；所述的纳米层优选为贵金属纳米层、硅纳米层、钛纳米层、有机纳米层和有机
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无机杂化纳米层中的至少一种。
[0023]所述的反应型细胞包封剂优选为可形成贵金属纳米层的四氯合金酸(HAuCl4)、四氯合金酸钾(KAuCl4)、六氯合铂酸(H2PtCl6)、六氯合铂酸钾(K2PtCl6)、三氯氨铂酸钾(KPt(NH3)Cl3)、四氯铂酸钾(K2PtCl4)、六溴铂酸钾(K2PtBr6)；可形成硅纳米层的甲基三甲氧基硅烷、甲基二乙氧基硅烷、乙基三乙氧基硅烷、甲基三乙氧基硅烷、正硅酸四乙酯(TEOS)、正硅酸四甲酯(TMOS)、双(三甲基硅烷基)乙酰胺(BSA)、3
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氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)、3
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巯丙基三甲氧基硅烷(MPTMS)、三甲基氯硅烷(TMCS)、氯三乙氧基硅烷(TECS)、辛基三甲氧基硅烷、环己基甲基二甲氧基硅烷、三甲氧基甲硅烷、三乙氧基硅烷、苄基三乙氧基硅烷、乙烯基三甲氧基硅烷、异丁基三乙氧基硅烷；可形成钛纳米层的四异丙基钛酸酯、钛酸甲酯、钛酸四乙酯、钛酸四丁酯、钛酸四丙酯；可形成其他无机纳米层的异丙醇铝、锆酸四丁酯和能
够形成有机纳米层的多巴胺、鞣酸中的至少一种。进一步优选为四氯合金酸(HAuCl4)、四氯合金酸钾(KAuCl4)、六氯合铂酸(H2PtCl6)、甲基三乙氧基硅烷、正硅酸四乙酯(TEOS)、正硅酸四甲酯(TMOS)、乙烯基三甲氧基硅烷、异丁基三乙氧基硅烷、钛酸甲酯、钛酸四乙酯、钛酸四丁酯、钛酸四丙酯、异丙醇铝、锆酸四丁酯、多巴胺和鞣酸中的一种；更优选为四氯合金酸(HAuCl4)、六氯合铂酸(H2PtCl6)、甲基三乙氧基硅烷、正硅酸四乙酯(TEOS)、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基因组DNA室温保存卡，其特征在于，包括具有液体吸收性能的介质和细胞保存液体预混剂。2.根据权利要求1所述的基因组DNA室温保存卡，其特征在于，所述的介质包括但不限于滤纸、硝酸纤维素膜、尼龙膜、玻璃纤维素膜和硅胶膜中的至少一种；所述的具有液体吸收性能的介质为经过氨基化试剂处理的介质，即氨基化的具有液体吸收性能的介质；所述的介质经过氨基化试剂处理的方法为：将介质与氨基化试剂按照10～50μL氨基化试剂/cm2介质的比例混合，于密封条件下共孵育30min，然后取出氨基化的介质于0～80℃至完全干燥，即得具有液体吸收性能的介质；所述的具有液体吸收性能的介质还可以经过核酸酶抑制剂、抗氧化抑制剂和/或其他能够使病原菌和病毒蛋白变性的试剂处理；所述的细胞保存液体预混剂，包括如下按重量份计的各组分：0～200份抗凝血剂，0～200份细胞稳定剂，1～200份反应型细胞包封剂，0.1～200份pH调节剂，0.1～200份离子浓度调节剂和500～1000份无RNase纯化水。3.根据权利要求1所述的基因组DNA室温保存卡，其特征在于，所述的抗凝血剂为0～150份；所述的抗凝血剂为枸橼酸钠、柠檬酸钠、肝素钠、肝素锂、乙二胺四乙酸二钾、乙二胺四乙酸三钾和乙二胺四乙酸二钠中的至少一种；所述的细胞稳定剂为1～200份；所述的细胞稳定剂为甘油、羟乙基淀粉、羧甲基纤维素钠、二甲亚砜、蔗糖、聚乙烯醇、海藻糖和甜菜碱中的至少一种。4.根据权利要求1所述的基因组DNA室温保存卡，其特征在于，所述的反应型细胞包封剂为1～100份；所述的反应型细胞包封剂为可形成纳米层的化合物；所述的纳米层为贵金属纳米层、硅纳米层、钛纳米层、有机纳米层和有机
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无机杂化纳米层中的至少一种；所述的反应型细胞包封剂为可形成贵金属纳米层的四氯合金酸、四氯合金酸钾、六氯合铂酸、六氯合铂酸钾、三氯氨铂酸钾、四氯铂酸钾、六溴铂酸钾；可形成硅纳米层的甲基三甲氧基硅烷、甲基二乙氧基硅烷、乙基三乙氧基硅烷、甲基三乙氧基硅烷、正硅酸四乙酯、正硅酸四甲酯、双(三甲基硅烷基)乙酰胺、3
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氨丙基三乙氧基硅烷、3
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巯丙基三甲氧基硅烷、三甲基氯硅烷、氯三乙氧基硅烷、辛基三甲氧基硅烷、环己基甲基二甲氧基硅烷、三甲氧基甲硅烷、三乙氧基硅烷、苄基三乙氧基...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱伟，雷琪，周亮，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：