一种土壤DNA快速提取方法及试剂盒技术

本发明专利技术涉及一种高效提取土壤微生物DNA的方法，本试剂盒无需有机溶剂，使用胍盐和无机盐缓冲液DNA提取试剂盒相结合的方法，能够有效去除腐殖质，脂类和糖类物质对DNA提取的干扰，能适应于各种土壤类型，能够有效地富集DNA，并去除腐殖质的污染。DNA纯度和浓度检测实验结果证明本发明专利技术提取方法获得的DNA既能够达到下游实验的要求，也能有效的降低腐殖质的影响。影响。

【技术实现步骤摘要】
一种土壤DNA快速提取方法及试剂盒


[0001]本专利技术属于微生物学和分子生物学
，具体涉及一种高效提取土壤微生物DNA的方法及试剂盒。

技术介绍

[0002]由于土壤微环境的多样化，土壤微生物具有高度多样性。这些高度多样性的微生物及群落功能的研究不但可以了解生命如何耐受极端环境、新的生物能源、生命进化以及微生物与环境之间的相互作用，还可以用于人类疾病新型诊断，新型治疗等方法的开发。
[0003]研究土壤微生物多样性的有效手段是对土壤中的DNA进行分离纯化及分析，跟踪某些目标菌株或重组基因在自然环境中的行为；也可以用来揭示土壤微生物生态系统中的基因的多样性及其随环境的变化；还以从各种不同来源的土壤中抽提和纯化土壤微生物基因组DNA是非常关键的一步。
[0004]基因组DNA提取的主要目标是高纯度，高浓度并且能代表多种微生物DNA，从而从微生物群落中获得最具代表性的DNA，并进行下一步分析(如PCR、SSCP、宏观基因组测序、质谱分析等)。但是来自环境中的样品含有非常复杂的成分，尤其是土壤中的腐质酸类物质在提取过程中很难有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种土壤DNA高效提取试剂盒，其特征在于：由以下七种溶液组成：(1) Pre
‑
Wash溶液：为KCl和硫酸铵的混合溶液，其中，KCl的浓度为500mM
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2M之间，优选浓度为650mM
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1.25M之间；硫酸铵的浓度为200
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950mM之间，优选浓度为350
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450mM之间；(2) 土壤裂解液：为柠檬酸钠、CTAB(十六烷基三甲基溴化铵)、SDS和NaCl的混合溶液，混合溶液中柠檬酸钠的浓度为10
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100mM之间，优选浓度为50mM；CTAB的质量浓度为0.1
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1%之间，优选质量浓度为0.2
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0.5%之间；SDS的质量浓度为0.2
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2％之间，优选质量浓度为0.5
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1％之间；NaCl的浓度为20
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600mM之间，优选浓度为50
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200mM之间；(3) 杂质沉淀剂：为曲拉通X
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100和EDTA的混合溶液，其中，曲拉通X
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100体积比浓度为0.5
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3%之间，优选体积比浓度为1
‑
2%之间；EDTA的浓度为10
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100mM之间，优选浓度为20
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50mM之间；(4) DNA结合液：为NaCl、乙酸钠和PEG8000的混合溶液，其中，NaCl的浓度为500mM
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2M之间，优选浓度为1
‑
2M之间；PEG8000质量浓度为10
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30%之间，优选浓度为15
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20%之间，乙酸钠的浓度为500mM
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2M之间，优选浓度为1
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1.5M之间，用醋酸调溶液的pH值为4
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5之间，优选PH为4.5；(5) 蛋白杂质去除液：为硫酸铵和乙醇的混合溶液，其中，硫酸铵的浓度为300mM
‑
2M之间，优选浓度为205
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450mM之间；乙醇浓度为40
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60 vt％之间，优选浓度为5...

【专利技术属性】
技术研发人员：贾萌萌，潘韵芝，朱国强，
申请(专利权)人：苏州易迈吉生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：