一种利用高效液相电感耦合等离子体质谱测定硒形态的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用高效液相电感耦合等离子体质谱测定硒形态的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：(1)流动相制备；(2)采用高效液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种利用高效液相电感耦合等离子体质谱测定硒形态的方法


[0001]本专利技术涉及一种利用高效液相电感耦合等离子体质谱测定硒形态的方法，属于分析测试领域。

技术介绍

[0002]目前的研究发现硒在环境介质中主要以SeO
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、SeO
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‑
、Se0、Se2‑
的形式存在；而硒在农作物中主要以SeMet、SeCysCysSe、MeSeCys、SeO
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‑
、SeO
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‑
等形式存在，一般通过LC
‑
AFS、HPLC
‑
ICP
‑
MS等方法予以分析。全国供销行业标准《富硒农产品GH/T1135
‑
2017》中推荐的检测方法为LC
‑
AFS，而低硒、含硒或天然富硒的农产品经样品前处理后往往达不到AFS的仪器检测限。

技术实现思路

[0003]有鉴于此，本专利技术的主要目的在于提供一种利用高效液相电感耦合等离子体质谱测定硒形态的方法，不仅仅是检测元素总量，同时优化了定量方法，排除实验干扰，提高检测效率与准确率。
[0004]为了实现上述目的，本专利技术提供了一种利用高效液相电感耦合等离子体质谱测定硒形态的方法，包括以下步骤：
[0005](1)流动相制备：将铵盐溶液及色谱纯甲醇配制成甲醇
‑
柠檬酸铵缓冲液并调节pH值；使用0.22μm滤膜对流动相进行抽滤，超声脱气，得到流动相；
[0006](2)采用高效液相色谱
‑
电感耦合等离子体质谱联用(ICP
‑
MS)对标准硒形态溶液和待测提取提取液进行测定；ICP
‑
MS在分析检测硒形态时具有灵敏度高、选择性好等优点，以及具有多元素和同位素同时检测的能力,但是硒离子化效率相对较低，并且氩的二聚物Ar2对检测硒存在着严重的离子干扰，因此采用CCT 碰撞池技术消除离子干扰；
[0007](3)采用归一化法对样品中硒代胱氨酸(SeCys2)、硒代蛋氨酸(SeMet)、甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)、亚硒酸根(SeO
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‑
)以及硒酸根(SeO
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‑
)五种硒形态进行定量分析。归一化法相较其他方法的优点是：简便、准确、定量结果与进样量重复性无关(在色谱柱不超载的范围内)、操作条件略有变化时对结果影响较小，并且可以对未知物质进行定量分析。
[0008]进一步地，其中步骤(1)中，所述铵盐选自柠檬酸二铵、磷酸氢二胺和柠檬酸铵中的一种，优选为柠檬酸铵。
[0009]进一步地，其中步骤(1)中，所述色谱纯甲醇为经过
‑
20℃冷冻的色谱纯甲醇，以保证其物理及化学性质的稳定下最节省实验成本。
[0010]进一步地，其中步骤(1)中，所述流动相中甲醇的体积浓度为2
‑
10％，优选为 2％，这样优选后有利于达到完全分离五种硒形态的效果。
[0011]进一步地，其中步骤(1)中，所述流动相中铵盐溶液的浓度为2
‑
10mmol/L，优选为6mmol/L，这样优选后有利于达到完全分离五种硒形态的效果。
[0012]进一步地，其中步骤(1)中，所述流动相的pH值为5
‑
6，优选为5.7，这样优选后有利
于达到完全分离五种硒形态的效果。
[0013]进一步地，其中步骤(1)中，所述超声脱气的时间为15
±
5min。
[0014]进一步地，其中步骤(2)中，所述标准硒形态溶液包括硒代胱氨酸(SeCys2)、硒代蛋氨酸(SeMet)、甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)、亚硒酸根(SeO
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‑
) 以及硒酸根(SeO
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‑
)五种硒形态标准样品储备液，其中每种硒形态标准样品储备液的浓度为1000mg/mL(以硒计)。
[0015]进一步地，其中步骤(3)具体包括：根据HPLC
‑
ICP
‑
MS联用检测样品中各组分的量与其峰面积成正比的特性，且样品中所有组分都能产生信号得到相应的色谱峰，由各组分保留时间可知其对应形态，由此可以用归一化公式(1)计算各组分的含量：
[0016][0017]其中：设试样分组共n，各组含量分别为m1，m2，
……
，m
n
。
[0018]进一步地，其中步骤(3)中，使用归一化法对样品进行定量分析时，所有标准样品配置需以硒计算浓度，并且满足所有硒形态成分都洗脱并且在检测器有响应且所有硒形态成分相同硒浓度的情况下峰面积相同。
[0019]相比于现有技术，本专利技术具有以下有益效果：
[0020]本专利技术通过HPLC
‑
ICP
‑
MS联用技术，采用归一化法对样品进行定量分析，能分别检测出植物中硒代胱氨酸(SeCys2)、甲基硒代半胱氨酸(SeMeCy)、硒代蛋氨酸(SeMet)、亚硒酸根(SeO
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‑
)以及硒酸根(SeO
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‑
)五种硒形态及各含量。方法简单快捷，流动相配制简便，分析结果准确可靠。相比于现有的光谱法、质谱法和色谱法等对元素形态的选择性更好，稳定性更强。
附图说明
[0021]图1为本专利技术不采用CCT碰撞池技术的Se元素标准曲线；
[0022]图2为本专利技术采用CCT碰撞池技术的Se元素标准曲线。
具体实施方式
[0023]下面结合说明书附图对本专利技术进行进一步说明。
[0024]以下材料或试剂，除非特别说明，均为市售。
[0025]本专利技术的实施例提供了一种利用高效液相电感耦合等离子体质谱测定硒形态的方法，包括以下步骤：
[0026](1)流动相制备：称取柠檬酸二铵、磷酸氢二胺或柠檬酸铵并加入超纯水，用玻璃棒搅拌均匀；加入冷冻(
‑
20℃)色谱纯甲醇(2％)后，使用10wt％的稀盐酸调节pH值至5.7；使用0.22μm滤膜对流动相进行抽滤，之后将制备好的流动相超声脱气15min；分别用柠檬酸二铵、磷酸氢二铵与柠檬酸铵配置流动相对样品硒形态进行色谱分析，由得出的各形态保留时间和峰面积可知，用磷酸氢二铵与柠檬酸二铵配置的流动相均无法有效分离五种形态，影响实验结果，而柠檬酸铵作流动相盐可使五种形态分离完全。
[0027](2)利用高效液相色谱
‑
电感耦合等离子体质谱联用对标准硒形态溶液和待测提取液进行测定，并且采用CCT碰撞池技术消除离子干扰(见图1、图2)，
[0028]CCT碰撞池技术具体的操作步骤如下(以7％氢+93％氦混合气为例)。
[0029]①
打开He气钢瓶(要求其纯度>99.999％)调气压至0.1M本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用高效液相电感耦合等离子体质谱测定硒形态的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：(1)流动相制备：将铵盐溶液及色谱纯甲醇配制成甲醇
‑
柠檬酸铵缓冲液并调节pH值；使用0.22μm滤膜对流动相进行抽滤，超声脱气，得到流动相；(2)采用高效液相色谱
‑
电感耦合等离子体质谱联用对标准硒形态溶液和待测提取提取液进行测定；(3)采用归一化法对样品中硒代胱氨酸、硒代蛋氨酸、甲基硒代半胱氨酸、亚硒酸根以及硒酸根五种硒形态进行定量分析。2.如权利要求1所述的测定硒形态的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述铵盐选自柠檬酸二铵、磷酸氢二胺和柠檬酸铵中的一种。3.如权利要求1所述的测定硒形态的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述色谱纯甲醇为经过
‑
20℃冷冻的色谱纯甲醇。4.如权利要求1所述的测定硒形态的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述流动相中甲醇的体积浓度为2
‑
10％。5.如权利要求1所述的测定硒形态的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述流动相中铵盐溶液的浓度为2
‑
10mmol/L。6.如权利要求1所述的测定硒形态的方法，其特征在于，步...

【专利技术属性】
技术研发人员：张泽洲，陈晓凡，王张民，刘志奎，孙辰璐，王莉莉，王晓丽，宋佳平，林锦钰，罗琴，
申请(专利权)人：南京恒宝田功能农业产业研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：