【技术实现步骤摘要】
一种合成2′-岩藻糖基乳糖的重组大肠杆菌及其构建方法
本专利技术涉及基因工程
，具体涉及一种合成2′-岩藻糖基乳糖的重组大肠杆菌及其构建方法。
技术介绍
母乳是一种复杂的混合物，含有水、脂肪、蛋白质、矿物质、维生素、多糖、单糖、双糖(乳糖)、低聚糖。乳糖是母乳主要固体成分(总固形物的～6.8％)，同时广泛存在于动物乳汁。但是，结构较复杂的母乳低聚糖(总固形物的～1％)却是人类所独有的。目前，结构确证的母乳低聚糖大约有200种，聚合度从3到32不等。母乳低聚糖的结构特征包括乳糖-N-乙酰葡萄糖胺骨架、直链β-(1,3/4)-糖苷键、支链β-(1,6)-糖苷键、乳糖在糖链还原末端而L-岩藻糖或唾液酸在非还原末端。2’-岩藻糖基乳糖是大多数哺乳期母亲乳汁中含量最丰富的母乳低聚糖。在表达α-(1,2)-岩藻糖基转移酶基因FUT2的分泌型母亲的乳汁中，2’-岩藻糖基乳糖占母乳低聚糖总量的比例可以高达30％。因此，2’-岩藻糖基乳糖的研究较为充分，并且发现2’-岩藻糖基乳糖具有多种有益功能。例如，2’-岩藻糖基乳糖特异性地...
【技术保护点】
1.一种合成2'-岩藻糖基乳糖的重组大肠杆菌，其特征在于：所述重组大肠杆菌是在大肠杆菌原始菌株的基因组中敲除β-半乳糖苷酶基因、从鸟苷二磷酸岩藻糖出发合成可拉酸的关键酶基因，强化表达乳糖通透酶基因、鸟苷二磷酸岩藻糖从头合成途径的关键酶基因，并表达外源岩藻糖基转移酶基因得到的。/n
【技术特征摘要】
1.一种合成2'-岩藻糖基乳糖的重组大肠杆菌，其特征在于：所述重组大肠杆菌是在大肠杆菌原始菌株的基因组中敲除β-半乳糖苷酶基因、从鸟苷二磷酸岩藻糖出发合成可拉酸的关键酶基因，强化表达乳糖通透酶基因、鸟苷二磷酸岩藻糖从头合成途径的关键酶基因，并表达外源岩藻糖基转移酶基因得到的。
2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于：所述敲除β-半乳糖苷酶基因是指利用CRISPR基因编辑技术敲除β-半乳糖苷酶基因lacZ，敲除从鸟苷二磷酸岩藻糖出发合成可拉酸的关键酶基因是指利用CRISPR基因编辑技术敲除十一碳二烯磷酸酯葡萄糖磷酸转移酶基因wcaJ。
3.根据权利要求2所述的重组大肠杆菌，其特征在于：利用CRISPR基因编辑技术敲除十一碳二烯磷酸酯葡萄糖磷酸转移酶基因wcaJ时，敲除基因wcaJ的gRNA1的靶标序列的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，敲除基因wcaJ的gRNA2的靶标序列的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示，PCR鉴定的上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，PCR鉴定的下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示。
4.根据权利要求2所述的重组大肠杆菌，其特征在于：利用CRISPR基因编辑技术敲除β-半乳糖苷酶基因lacZ时，敲除基因lacZ的gRNA1的靶标序列的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示，敲除基因lacZ的gRNA2的靶标序列的核苷酸序列如SEQIDNO.6所示，PCR鉴定的上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.7所示，PCR鉴定的下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.8所示。
5.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于：所述强化表达乳糖通透酶基因、鸟苷二磷酸岩藻糖从头合成途径的关键酶基因是指利用CRISPR基因编辑技术在鸟苷二磷酸岩藻糖从头合成途径的磷酸甘露糖变位酶基因manB上游敲入T7lac启动子。
6.根据权利要求5所述的重组大肠杆菌，其特征在于：利用CRISPR基因编辑技术在鸟苷二磷酸岩藻糖从头合成途径的磷酸甘露糖变位酶基因manB上游敲入T7lac启动子时，敲入片段的核苷酸序列如SEQIDNO.9所示，敲入位置上游基因的核苷酸序列如SEQIDNO.10所示，敲入位置下游基因的核苷酸序列如SEQIDNO.11所示，PCR鉴定的上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.12所示，PCR鉴定的下游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.1...
【专利技术属性】
技术研发人员：郝占西，杨新球，曾宪维，魏远安，许本宏，阮鸿波，吴嘉仪，吴少辉，霍金洪，
申请(专利权)人：量子高科广东生物有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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