一种高产表面活性素的基因工程菌及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种高产表面活性素的基因工程菌及其构建方法和应用，所述基因工程菌以解淀粉芽孢杆菌CPLK1314为出发菌株，敲除或者失活菌株基因组中负调控ComQ基因所得。本发明专利技术失活ComQ的基因工程菌在优化的培养基和发酵条件下用于生产表面活性素产量是野生型菌株的5倍，在5L发酵罐40‑50h可稳定生产表面活性素5‑6g/L。该表面活性素高产基因工程菌及其构建方法为加速表面活性素的产业化提供原材料，同时高产表面活性素的基因工程菌可用于制备猪腹泻病毒的防治生物试剂。

【技术实现步骤摘要】
一种高产表面活性素的基因工程菌及其构建方法和应用
本专利技术属于基因工程
，具体涉及一种高产表面活性素的基因工程菌及其构建方法与应用。
技术介绍
表面活性素(surfactins)是由7个氨基酸亲水性短肽头部和13～15碳原子的脂肪酸的疏水性尾部组成的一类双亲性环脂肽化合物，是目前已知最强的生物表面活性剂，具有抗细菌抗病毒，抗肿瘤，抑制生物膜形成和促进血栓溶解等生物活性。相对于传统的抗生素，表面活性素对多种耐药性细菌比如金黄色葡萄球菌具有更高的抑制活性和更低的细胞毒性。表面活性素通过渗透病毒包膜形成穿孔，对多种包膜病毒比如猪腹泻病毒具有很强的抗病毒活性。表面活性素能作为信号分子诱导癌细胞凋亡，从而表现出抗肿瘤的活性。生物膜是许多病原微生物产生耐药性和污染医疗器官的主要原因，表面活性素也展示出很强的抑制病原微生物比如黏附能力和生物膜形成的活性。表面活性素还能够激活尿激酶原导致血纤维蛋白溶酶原的构象改变，从而促进血栓的溶解。总之，表面活性素由于具有上述的生物学活性，在植物保护，食品安全和现代医疗中都具有广泛的用途。由于表面活性素特殊的大环内酯本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高产表面活性素的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌以解淀粉芽孢杆菌为出发菌株，敲除或者失活菌株基因组中负调控ComQ基因所得。/n

【技术特征摘要】
1.一种高产表面活性素的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌以解淀粉芽孢杆菌为出发菌株，敲除或者失活菌株基因组中负调控ComQ基因所得。


2.根据权利要求1所述的高产表面活性素的基因工程菌，其特征在于，所述负调控ComQ基因的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。


3.根据权利要求1所述的高产表面活性素的基因工程菌，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌为解淀粉芽孢杆菌CPLK1314，保藏号CCTCCNO：M2017658。


4.一种权利要求1所述高产表面活性素的基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)以ComQ基因核酸序列设计引物，以解淀粉芽孢杆菌的基因组DNA作为模板，扩增到ComQ基因片段；
(2)同源重组质粒载体pTCCOMQ的构建：扩增的ComQ基因片段经过XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切，然后经过T4DNA连接酶连接到经过同样双酶切的质粒载体pTC中，构建同源重组整合质粒载体pTCCOMQ；
(3)ComQ基因失活突变菌株ΔComQ的构建：将构建好的重组质粒pTCCOMQ转化至解淀粉芽孢杆菌得到高产表面活性素的基因工程菌ComQ基因突变株ΔComQ。


5.根据权利要求4的构建方法，其特征在于，步骤(1)所述的引物优选为：ComQ-FCOMQF(5...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗楚平，仲海静，李彬，王小花，刘佳琛，朱晓文，李相前，尹秀莲，张金峰，李春阳，刘媛，
申请(专利权)人：淮阴工学院，江苏省农业科学院，
类型：发明
国别省市：江苏;32