一种同时生产2`-岩藻糖基乳糖和D-阿洛酮糖的方法技术

本发明专利技术公开了一种重组菌株，所述重组菌株是将质粒pCOLADuet‑1‑CB、质粒pCDFDuet‑1‑GW、质粒pETDuet‑1‑BY共转化到大肠杆菌获得。本发明专利技术还公开了该菌株的应用以及同时生产2'‑岩藻糖基乳糖和D‑阿洛酮糖的方法。本发明专利技术以果糖为初始原料，经过酶催化、细胞工厂转化，同时生产出稀少单糖D‑阿洛酮糖和人乳寡糖2'‑岩藻糖基乳糖（2’‑FL），再通过下游分离分别得到D‑阿洛酮糖和2’‑FL结晶产品的方法，实现了两种高附加值产品的同时生产，具有很强的技术原创性及经济价值。该技术的应用将为食品添加剂生产技术的升级提供借鉴。

【技术实现步骤摘要】
一种同时生产2`-岩藻糖基乳糖和D-阿洛酮糖的方法
本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种同时生产2′-岩藻糖基乳糖和D-阿洛酮糖的方法。
技术介绍
人乳寡糖(humanmilkoligosaccharides，简称HMO)是母乳中非常独特的一类寡糖物质，大多由3～6个糖基组成，迄今已发现了200多种。HMO是母乳中含量第3的固形物(仅次于乳糖和脂肪)，它在初乳中的含量为20～25g/L，在成熟母乳中的含量为10～15g/L。HMO的类型主要包括岩藻糖基化的中性HMO(占比35～50％)、唾液酸化的酸性HMO(占比12～14％)、以及非岩藻糖基化的中性HMO(占比42～55％)，所有的HMO中超过70％由岩藻糖进行修饰。具有代表性的HMO成分包括2’-岩藻糖基乳糖，2’-FL(CAS号：41263-94-9)、3-岩藻糖基乳糖(3-FL)、6’-唾液酸乳糖(6’-SL)、乳糖-N-新四糖(LNnT)等。其中，2’-FL结构式如下：是含量最高的一种人乳寡糖，可以占到母乳总物质量的30％。牛奶、山羊奶、绵羊奶中几乎不含HMO，或含量仅本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组菌株，其特征在于，所述重组菌株是将质粒pCOLADuet-1-CB、质粒pCDFDuet-1-GW、质粒pETDuet-1-BY共转化到大肠杆菌获得。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组菌株，其特征在于，所述重组菌株是将质粒pCOLADuet-1-CB、质粒pCDFDuet-1-GW、质粒pETDuet-1-BY共转化到大肠杆菌获得。


2.根据权利要求1所述的重组菌株，其特征在于，所述质粒pCOLADuet-1-CB是将manC基因克隆到pCOLADuet-1质粒上获得重组质粒pCOLADuet-1-C，然后将manB基因克隆到pCOLADuet-1-C质粒上获得重组质粒pCOLADuet-1-CB。


3.根据权利要求1所述的重组菌株，其特征在于，所述质粒pCDFDuet-1-GW是将gmd基因克隆到pCDFDuet-1质粒上获得重组质粒pCDFDuet-1-G；然后将wcag基因克隆到pCDFDuet-1-G质粒上获得重组质粒pCDFDuet-1-GW。


4.根据权利要求1所述的重组菌株，其特征在于，所述质粒pETDuet-1-BY是将wcfB基因克隆到pETDuet-1质粒上获得重组质粒pETDuet-1-B；然后将lacY基因克隆到pETDuet-1-B质粒的NdeI-XhoI位点，获得重组质粒pETDuet-1-BY。


5.权利要求1~4任一项所述的重组菌株在制备2'-岩藻糖基乳糖和/或D-阿洛酮糖中的应用。


6.一种同时生产2'-岩藻糖基乳糖和D-阿洛酮糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）首先制备交联有D-塔格糖-3-差向异构酶的固定化酶，将D-果糖溶液循环通过固定化酶实现异构化，获得包含有D-果糖和D-阿洛酮糖的混合糖液；
2）然后将D-果糖和D-阿洛酮糖的混合糖液作为发酵碳源进行发酵培养，流加补料喂养权利要求1~4任一项所述的菌株，同时流加乳糖，经过发酵获得包含有D-阿洛酮糖和2’-岩藻糖基乳糖的混合糖液；
3）最...

【专利技术属性】
技术研发人员：张建鸿，徐铮，夏洪志，牛堃，
申请(专利权)人：南通励成生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32