一种光感受器神经元细胞的化学诱导方法技术

本发明专利技术提供一种新的光感受器神经元细胞纯化学诱导方法，通过将一组小分子抑制剂添加至无血清基础培养基中，将多能干细胞快速转化为光感受器神经元细胞，与目前国际通行的血清加视黄醇的诱导方法相比，本发明专利技术不使用血清，使用化学小分子替代视黄醇，保证了光感受器神经元发育所需要的视觉循环的运行的同时也排除了血清的不利因素。

【技术实现步骤摘要】
一种光感受器神经元细胞的化学诱导方法
本专利技术属于生物领域。具体涉及光感受器神经元细胞的化学诱导及培养方法、培养基及其在多种疾病中的应用。
技术介绍
外胚层是胚胎发育过程中形成的最外层，随着器官发生的开始，外胚层细胞逐渐分化为大脑、脊髓、感觉器官等重要的系统。其中神经系统是负责思维、情感、感知、运动等功能的重要系统。相比于肿瘤等疾病，目前神经系统疾病的药物数量较少，且研发周期漫长，其中最为重要的一个原因是外胚层谱系中多种原代细胞的特殊性，例如原代神经元的不可再生性导致了神经系统药物体外药物筛选平台的稀缺。外胚层细胞的体外再生能解决多种退行性疾病，例如神经退行性疾病是目前常见的老龄化疾病，治疗及护理费用极其昂贵，而且市面上无特效药物可以进行有效的治疗。神经退行性疾病包括肌萎缩侧索硬化症(ALS)、帕金森病(PD)、阿尔茨海默症(AD)等疾病。世界卫生组织统计，2050年我国神经退行性疾病患者将超过3000万，预期医疗费用将超过1万亿。此类疾病的治疗难点在于中枢神经系统的神经细胞具有不可再生性，而这类疾病是由于中枢神经的不可逆损伤造成。目前，神经本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.LY2157299在多能干细胞分化为外胚层中的应用，优选地，所述LY2157299的用量为55nM-25uM，更优选为100nM、300nM、500nM、700nM、900nM、1uM、2.5uM、5uM、7.5uM、10uM、12.5uM、15uM、17.5uM、20uM或22uM。/n

【技术特征摘要】
1.LY2157299在多能干细胞分化为外胚层中的应用，优选地，所述LY2157299的用量为55nM-25uM，更优选为100nM、300nM、500nM、700nM、900nM、1uM、2.5uM、5uM、7.5uM、10uM、12.5uM、15uM、17.5uM、20uM或22uM。


2.培养基，其特征在于，在NouvNeu-basal基础培养基中加入LY2157299，所述NouvNeu-basal基础培养基的配方为杜氏改良伊格尔/F12培养基(DMEM/F12培养基)、0.1％-2％最低必须培养基非必需氨基酸(MinimumEssentialMediumNon-EssentialAminoAcids，最佳浓度为1％)、0.1-0.8g/L氯化钠(SodiumChloride，最佳浓度为0.5g/L)、0.1-80mg/L维生素C(L-ascorbicacid，最佳浓度为64mg/L)、0.1-1.8uM维生素B12(最佳浓度为1.2uM)、0.1-9.8ng/ml黄体酮(Progesterone，最佳浓度6.3ng/ml)、10-35ug/ml腐胺(Putrescine，最佳浓度为23ug/ml)、1ug/L-25ug/L亚硒酸钠(最佳浓度为13.6ug/L)、0.1-44ug/ml胰岛素(最佳浓度为22ug/ml)、0.5-20umol/LOptiferrin(最佳浓度为10μmol/L)、2.5-100ng/ml植物源重组人碱性生长因子(OsrbFGF，最佳浓度为50ng/mL)。


3.根据权利要求2所述的培养基，其特征在于，所述LY2157299的用量为55nM-25uM，优选为100nM、300nM、500nM、700nM、900nM、1uM、2.5uM、5uM、7.5uM、10uM、12.5uM、15uM、17.5uM、20uM或22uM。


4.根据权利要求3所述的培养基，其特征在于，所述LY2157299的用量为7.5uM。


5.将多能干细胞(优选人源多能干细胞)分化为外胚层的方法，其特征在于，将多能干细胞在根据权利要求2-4任一项所述的培养基中培养，获得外胚层细胞。


6.培养基，其特征在于，在NouvNeu-basal基础培养基中加入LY2157299和JW55，所述NouvNeu-basal基础培养基的配方为杜氏改良伊格尔/F12培养基(DMEM/F12培养基)、0.1％-2％最低必须培养基非必需氨基酸(MinimumEssentialMediumNon-EssentialAminoAcids，最佳浓度为1％)、0.1-0.8g/L氯化钠(SodiumChloride，最佳浓度为0.5g/L)、0.1-80mg/L维生素C(L-ascorbicacid，最佳浓度为64mg/L)、0.1-1.8uM维生素B12(最佳浓度为1.2uM)、0.1-9.8ng/ml黄体酮(Progesterone，最佳浓度6.3ng/ml)、10-35ug/ml腐胺(Putrescine，最佳浓度为23ug/ml)、1ug/L-25ug/L亚硒酸钠(最佳浓度为13.6ug/L)、0.1-44ug/ml胰岛素(最佳浓度为22ug/ml)、0.5-20umol/LOptiferrin(最佳浓度为10μmol/L)、2.5-100ng/ml植物源重组人碱性生长因子(OsrbFGF，最佳浓度为50ng/mL)；任选地，所述JW55的浓度为0.5-20uM，最佳浓度为5uM；任选地，所述LY2157299的用量为55nM-25uM，优选为100nM、300nM、500nM、700nM、900nM、1uM、2.5uM、5uM、7.5uM、10uM、12.5uM、15uM、17.5uM、20uM或22uM。


7.将多能干细胞(优选人源多能干细胞)分化为神经干细胞的方法，其特征在于，将多能干细胞在根据权利要求6所述的培养基中培养。


8.AM580在多能干细胞(优选人源多能干细胞)分化为光感受器神经元细胞中的应用，优选地，所述AM580的用量为0.05-0.95μM，更优选为0.08uM，0.09uM，0.1uM，0.2uM，0.3uM，0.5uM，0.6uM，0.7uM，0.8uM，0.9uM。


9.AM580在外胚层细胞分化为光感受器神经元细胞中的应用，优选地，所述AM580的用量为0.05-0.95μM，更优选为0.08uM，0.09uM，0.1uM，0.2uM，0.3uM，0.5uM，0.6u...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏君，蔡萌，牛璐萌，周佳，
申请(专利权)人：武汉睿健医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42