规模化生产病毒载体的无血清培养基、制备方法及其用途技术

本发明专利技术公开一种规模化生产病毒载体的无血清培养基、制备方法及其用途。本发明专利技术技术方案通过设计无血清培养基的组分，解决了传统培养基培养病毒回收率低的技术问题。

【技术实现步骤摘要】
规模化生产病毒载体的无血清培养基、制备方法及其用途
本专利技术涉及生物制品
，特别涉及一种规模化生产病毒载体的无血清培养基、制备方法及其用途。
技术介绍
目前，细胞培养技术已成为工业化生产生物活性物质、疫苗、载体，如单克隆抗体、药用蛋白质、基因工程药物等常用的手段，细胞培养技术与基因工程技术、酶工程技术和发酵工程技术密切相关，在整个生物技术产业的发展中起到了关键的核心作用。此外，细胞培养技术的日臻完善，促进蛋白质表达纯化技术、病毒培养技术等的发展。从当前发展趋势来看，细胞悬浮培养、无血清培养是近年来生物技术产业化发展的方向。相关技术中，利用293T细胞大规模制备病毒的培养方式主要采用带血清的培养基进行培养，但是血清来源复杂、供货稳定、有携带病毒的危险，增加了细胞表达产物安全性的不确定因素，具有可能导致过敏反应、批次间差异大、易受污染和成本较高等缺点。此外，血清中成分较为复杂，多含有分子量较大的组分，易影响病毒的分离纯化，且容易被支原体感染等缺点，导致制备的病毒的纯度不高、品质较差、回收率低的不利影响。
技术实现思路
本专利技术的主要目的是提供一种规模化生产病毒载体的无血清培养基、制备方法及其用途，以解决传统培养基培养病毒回收率低的技术问题。为实现上述目的，本专利技术提出一种规模化生产病毒载体的无血清培养基，包括如下组分：甘氨酸40～50mg/L、L-丙氨酸50～60mg/L、L-缬氨酸88～98mg/L、L-亮氨酸210～250mg/L、L-异亮氨酸110～140mg/L、L-甲硫氨酸50～60mg/L、L-脯氨酸210～250mg/L、L-色氨酸50～70mg/L、L-丝氨酸400～430mg/L、L-酪氨酸120～160mg/L、L-半胱氨酸15～45mg/L、L-苯丙氨酸300～360mg/L、L-天冬酰胺25～45mg/L、L-天冬氨酸30～50mg/L、L-谷氨酰胺800～1200mg/L、L-苏氨酸200～250mg/L、L-谷氨酸60～100mg/L、L-赖氨酸210～280mg/L、L-精氨酸60～80mg/L、L-组氨酸50～70mg/L、维生素D20.5～1.1mg/L、维生素B20.05～0.12mg/L、维生素B10.04～0.08mg/L、维生素B60.2～0.6mg/L、维生素A0.4～0.8mg/L、维生素E0.020～0.050mg/L、维生素B1230～60mg/L、维生素C7～17mg/L、氯化胆碱2.5～4.5mg/L、叶酸0.45～0.85mg/L、无水硫酸镁45～85mg/L、氯化钾400～600mg/L、碳酸氢钠1000～1600mg/L、氯化钠6000～10000mg/L、磷酸氢二钠600～1000mg/L、柠檬酸铁100～160mg/L、亚硒酸钠4.5～6.5μg/L、硅酸钠0.03～0.07μg/L、四水钼酸铵8～12μg/L、四水氯化锰0.2～0.6μg/L、七水硫酸锌100～160μg/L、氯化铬10～20μg/L、六水氯化钴4～8μg/L、氯化锡0.05～0.09μg/L、D-葡萄糖2500～3500mg/L、D-氨基葡萄糖4.5～6.5mg/L、β-巯基乙醇3～7mg/L、γ-氨基丁酸6～10mg/L、腺嘧啶脱氧核苷20～30mg/L、氯化胆碱0.6～1.0mg/L、脱氧胞苷45～65mg/L、脱氧尿苷40～90mg/L、脱氧腺嘌呤核苷15～45mg/L、PluronicF-68800～1200mg/L、谷胱甘肽20～30mg/L、β-NAD8～14mg/L、β-NADP6～10mg/L、胸苷45～75mg/L。可选地，所述规模化生产病毒载体的无血清培养基组分具体如下：甘氨酸45mg/L、L-丙氨酸55mg/L、L-缬氨酸95mg/L、L-亮氨酸230mg/L、L-异亮氨酸125mg/L、L-甲硫氨酸55mg/L、L-脯氨酸230mg/L、L-色氨酸60mg/L、L-丝氨酸410mg/L、L-酪氨酸145mg/L、L-半胱氨酸25mg/L、L-苯丙氨酸355mg/L、L-天冬酰胺35mg/L、L-天冬氨酸40mg/L、L-谷氨酰胺1000mg/L、L-苏氨酸225mg/L、L-谷氨酸80mg/L、L-赖氨酸245mg/L、L-精氨酸75mg/L、L-组氨酸60mg/L、维生素D20.8mg/L、维生素B20.08mg/L、维生素B10.06mg/L、维生素B60.4mg/L、维生素A0.6mg/L、维生素E0.035mg/L、维生素B1245mg/L、维生素C12mg/L、氯化胆碱3.5mg/L、叶酸0.65mg/L、无水硫酸镁65mg/L、氯化钾500mg/L、碳酸氢钠1200mg/L、氯化钠8500mg/L、磷酸氢二钠800mg/L、柠檬酸铁130mg/L、亚硒酸钠5.5μg/L、硅酸钠0.05μg/L、四水钼酸铵10μg/L、四水氯化锰0.4μg/L、七水硫酸锌130μg/L、氯化铬15μg/L、六水氯化钴6μg/L、氯化锡0.07μg/L、D-葡萄糖3000mg/L、D-氨基葡萄糖5.5mg/L、β-巯基乙醇5mg/L、γ-氨基丁酸8mg/L、腺嘧啶脱氧核苷25mg/L、氯化胆碱0.8mg/L、脱氧胞苷55mg/L、脱氧尿苷65mg/L、脱氧腺嘌呤核苷30mg/L、PluronicF-681000mg/L、谷胱甘肽25mg/L、β-NAD11mg/L、β-NADP8mg/L、胸苷60mg/L。本专利技术还提供一种如上所述的规模化生产病毒载体的无血清培养基的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：按比例对应称取各组分，双蒸水溶解、调节pH值，过滤除菌，得所述的规模化生产病毒载体的无血清培养基；保藏备用。可选地，所述pH值的范围为7.0～7.4。可选地，所述保藏的具体条件为：将所述的规模化生产病毒载体的无血清培养基于2～8℃下保藏。本专利技术还提供一种如上所述的规模化生产病毒载体的无血清培养基在悬浮培养HEK293细胞中的应用。本专利技术还提供一种如上所述的规模化生产病毒载体的无血清培养基在规模化制备病毒中的应用。相较于相关技术，本专利技术的有益效果是：本专利技术技术方案通过优化设计培养基的组分及配比，使得培养基为不含血清、蛋白全化学成分的培养基；并且不存在任何生长因子及蛋白，其化学成分组分限定，均为小分子物质，使得本专利技术中提出保护的规模化生产病毒载体的无血清培养基的成本较低、便于配制且易储存。其不仅可以保证细胞的生长状态和产毒能力，还可以降低纯化的负担及成本，更适用于商业市场。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1为本专利技术实施例中转染结果数据图。本专利技术目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例及其附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种规模化生产病毒载体的无血清培养基，其特征在于，包括如下组分：/n甘氨酸40～50mg/L、L-丙氨酸50～60mg/L、L-缬氨酸88～98mg/L、L-亮氨酸210～250mg/L、L-异亮氨酸110～140mg/L、L-甲硫氨酸50～60mg/L、L-脯氨酸210～250mg/L、L-色氨酸50～70mg/L、L-丝氨酸400～430mg/L、L-酪氨酸120～160mg/L、L-半胱氨酸15～45mg/L、L-苯丙氨酸300～360mg/L、L-天冬酰胺25～45mg/L、L-天冬氨酸30～50mg/L、L-谷氨酰胺800～1200mg/L、L-苏氨酸200～250mg/L、L-谷氨酸60～100mg/L、L-赖氨酸210～280mg/L、L-精氨酸60～80mg/L、L-组氨酸50～70mg/L、维生素D2 0.5～1.1mg/L、维生素B2 0.05～0.12mg/L、维生素B1 0.04～0.08mg/L、维生素B6 0.2～0.6mg/L、维生素A 0.4～0.8mg/L、维生素E 0.020～0.050mg/L、维生素B12 30～60mg/L、维生素C 7～17mg/L、氯化胆碱2.5～4.5mg/L、叶酸0.45～0.85mg/L、无水硫酸镁45～85mg/L、氯化钾400～600mg/L、碳酸氢钠1000～1600mg/L、氯化钠6000～10000mg/L、磷酸氢二钠600～1000mg/L、柠檬酸铁100～160mg/L、亚硒酸钠4.5～6.5μg/L、硅酸钠0.03～0.07μg/L、四水钼酸铵8～12μg/L、四水氯化锰0.2～0.6μg/L、七水硫酸锌100～160μg/L、氯化铬10～20μg/L、六水氯化钴4～8μg/L、氯化锡0.05～0.09μg/L、D-葡萄糖2500～3500mg/L、D-氨基葡萄糖4.5～6.5mg/L、β-巯基乙醇3～7mg/L、γ-氨基丁酸6～10mg/L、腺嘧啶脱氧核苷20～30mg/L、氯化胆碱0.6～1.0mg/L、脱氧胞苷45～65mg/L、脱氧尿苷40～90mg/L、脱氧腺嘌呤核苷15～45mg/L、Pluronic F-68 800～1200mg/L、谷胱甘肽20～30mg/L、β-NAD 8～14mg/L、β-NADP 6～10mg/L、胸苷45～75mg/L。/n...

【技术特征摘要】
1.一种规模化生产病毒载体的无血清培养基，其特征在于，包括如下组分：
甘氨酸40～50mg/L、L-丙氨酸50～60mg/L、L-缬氨酸88～98mg/L、L-亮氨酸210～250mg/L、L-异亮氨酸110～140mg/L、L-甲硫氨酸50～60mg/L、L-脯氨酸210～250mg/L、L-色氨酸50～70mg/L、L-丝氨酸400～430mg/L、L-酪氨酸120～160mg/L、L-半胱氨酸15～45mg/L、L-苯丙氨酸300～360mg/L、L-天冬酰胺25～45mg/L、L-天冬氨酸30～50mg/L、L-谷氨酰胺800～1200mg/L、L-苏氨酸200～250mg/L、L-谷氨酸60～100mg/L、L-赖氨酸210～280mg/L、L-精氨酸60～80mg/L、L-组氨酸50～70mg/L、维生素D20.5～1.1mg/L、维生素B20.05～0.12mg/L、维生素B10.04～0.08mg/L、维生素B60.2～0.6mg/L、维生素A0.4～0.8mg/L、维生素E0.020～0.050mg/L、维生素B1230～60mg/L、维生素C7～17mg/L、氯化胆碱2.5～4.5mg/L、叶酸0.45～0.85mg/L、无水硫酸镁45～85mg/L、氯化钾400～600mg/L、碳酸氢钠1000～1600mg/L、氯化钠6000～10000mg/L、磷酸氢二钠600～1000mg/L、柠檬酸铁100～160mg/L、亚硒酸钠4.5～6.5μg/L、硅酸钠0.03～0.07μg/L、四水钼酸铵8～12μg/L、四水氯化锰0.2～0.6μg/L、七水硫酸锌100～160μg/L、氯化铬10～20μg/L、六水氯化钴4～8μg/L、氯化锡0.05～0.09μg/L、D-葡萄糖2500～3500mg/L、D-氨基葡萄糖4.5～6.5mg/L、β-巯基乙醇3～7mg/L、γ-氨基丁酸6～10mg/L、腺嘧啶脱氧核苷20～30mg/L、氯化胆碱0.6～1.0mg/L、脱氧胞苷45～65mg/L、脱氧尿苷40～90mg/L、脱氧腺嘌呤核苷15～45mg/L、PluronicF-68800～1200mg/L、谷胱甘肽20～30mg/L、β-NAD8～14mg/L、β-NADP6～10mg/L、胸苷45～75mg/L。


2.如权利要求1所述的规模化生产病毒载体的无血清培养基，其特征在于，所述规模化生产病毒载体的无血清培养基组分具体如下：
甘氨酸45mg/L、L-丙氨酸55mg/...

【专利技术属性】
技术研发人员：李华秀，梁锦华，李海玲，宋宗培，栗红建，包朝乐萌，王玲，
申请(专利权)人：深圳普瑞金生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44