【技术实现步骤摘要】
一种提高解冻后猪精子体外受精效果的方法
本专利技术涉及猪精子冷冻保存
，具体涉及一种提高解冻后猪精子体外受精效果的方法。
技术介绍
精液的冷冻保存可以有效保留生物的遗传育种和种质资源[8]。随着猪冷冻精液生产工艺和人工授精技术的迅速发展，采用冷冻精液繁育的种猪在受孕率和仔猪分娩数方面均得到了有效的提高，已经接近鲜精的配种水平。但猪冷冻精液生产因难度大、冻精-解冻后活率及受胎率低等诸多原因，导致猪精液冷冻技术的研究仍未完全成熟。总体而言，完善猪冷冻精液制备技术，还有很多的问题亟待解决。猪是一种在转基因生物反应器领域有着广阔应用前景的模型动物,需要建立一套有效的体外繁殖技术为转基因猪生产提供大量高质量的成熟卵母细胞和胚胎。体外成熟(IVM)猪卵母细胞IVF后囊胚发育率在20％左右，与牛、羊等动物体外胚胎生产(IVP)相比,猪IVP的效率较低。卵母细胞成熟质量差、多精子受精率高和胚胎质量差是猪IVP所面临的主要问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种提高解冻后猪精子体外受精效果的方法。
【技术保护点】
1.一种提高解冻后猪精子体外受精效果的方法，其特征在于，包括以下操作步骤：/n(1)将冷冻后的精液取出后解冻处理，其中精液冷冻所用的冷冻基础液由以下重量份的组分制成：葡萄糖200-300份、乳糖300-400份、碳酸氢钠10-15份、青霉素钠5-7份、硫酸链霉素8-12份、卵黄1800-2200份、三蒸水7000-9000份，其中冷冻基础液中还包括咖啡酸苯乙酯和聚乙烯吡咯烷酮，其中咖啡酸苯乙酯在冷冻基础液中的摩尔浓度为30-50μmol/L，聚乙烯吡咯烷酮在冷冻基础液中的质量分数为0.4-0.6％；；/n(2)将解冻处理后的精液用受精操作液清洗并离心2次，再将离心沉淀用mT...
【技术特征摘要】
1.一种提高解冻后猪精子体外受精效果的方法，其特征在于，包括以下操作步骤：
(1)将冷冻后的精液取出后解冻处理，其中精液冷冻所用的冷冻基础液由以下重量份的组分制成：葡萄糖200-300份、乳糖300-400份、碳酸氢钠10-15份、青霉素钠5-7份、硫酸链霉素8-12份、卵黄1800-2200份、三蒸水7000-9000份，其中冷冻基础液中还包括咖啡酸苯乙酯和聚乙烯吡咯烷酮，其中咖啡酸苯乙酯在冷冻基础液中的摩尔浓度为30-50μmol/L，聚乙烯吡咯烷酮在冷冻基础液中的质量分数为0.4-0.6％；；
(2)将解冻处理后的精液用受精操作液清洗并离心2次，再将离心沉淀用mTBM获能液清洗离心1次，离心后向沉淀中加入mTBM液获能液重悬，调整精液浓度4-9×106个/mL，放入培养箱中获能35-45min，得到获能精液，所述mTBM获能液采用以下方法制成：按重量份计，将氯化钠0.4-0.9份，氯化钾0.01-0.05份，二水氯化钙0.08-0.12份，葡萄糖0.1-0.2份，丙酮酸钠0.02-0.08份，咖啡因0.005-0.010份，L-半胱氨酸0.002-0.008份，Tris0.1-0.3份，牛血清白蛋白0.05-0.20份溶于90-110份三蒸水中，滤器过滤后，制得mTBM获能液；
(3)将刚从母猪体内取下来的卵巢于半小时内抽出卵泡液，在显微镜下拣出卵丘-卵母细胞复合体，培养后取出卵母细胞，脱去卵丘，放入受精操作液中洗一遍，在显微镜下拣出有极体的成熟卵母细胞，mTBM获能液中洗一遍，将成熟卵母细胞放入平衡好的mTBM受精小滴中备用保存；
(4)向每个受精小滴加步骤(2)制得的获能精液，放入培养箱中培养5-7h后在胚胎培养液中洗去卵母细胞上附着的精子，然后再放入胚胎培养液中进行培养，体外受精培养完成。
2.根据权利要求1所述的一种提高解冻后猪精子体外受精效果的方法，其特征在于，所述受精操作液采用以下方法制成：按重量份计，将氯化钠6-7份，氯化钾0.1-0.3份，碳酸氢钠0.1-0.3份，磷酸二氢钠0.01-0.06份，乳酸钠1-2份，六水氯化镁0.1-0.2份，羟乙基哌秦乙硫磺酸1-4份，酚红0.005-0.015份，二水氯化钙0.1-0.3g，PVA0.05-0....
【专利技术属性】
技术研发人员：钱芙蓉，李兆华，张志彬，于永生，高一，菅芯蕊，王珺，曹阳，张立春，昭日格图，孙华，王俊恒，李彦春，刘向光，金庆国，柳海星，高见红，马腾飞，孟庆祝，丁德，李闯，张鑫，陆永辉，祝永凯，
申请(专利权)人：吉林省农业科学院，
类型：发明
国别省市：吉林;22
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